實(shí)驗(yàn)rna提取方法及原理(編輯修改稿)
2025-06-17 06:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 水樣層后，樣品中的 DNA 和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的 DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。 Trizol 試劑提 RNA的原理 ?Trizol 試劑是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的單相的快速抽提總 RNA的試劑 。 Trizol中含苯酚和異硫氰酸胍，可保護(hù) RNA免受 RNase的污染。 ?Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總 RNA的試劑。它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持 RNA的完整性，裂解細(xì)胞并釋放出 RNA,酸性條件使 RNA與 DNA分離 ,加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)還原。在除去水樣層后，樣品中的 DNA和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的 DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。 TRIzol法提取流程 1. 樣品處理： 組織：取 100mg 組織（新鮮或 70 ℃ 及液氮中保存的組織均可）置勻漿器中 ，加入 1ml Trizol 充分勻漿，勻漿液轉(zhuǎn) 離心管中 ,室溫靜置５ min 。 2 .加入 氯仿，振蕩 15s ，靜置 2min 。 3 .4 ℃ 離心， 13000g 15min ，取上清。 4 .加入 與上清 1:1的異丙醇 (約 )，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置 20min (20 ℃ ，時(shí)間長(zhǎng)效果更好 )。 取 200300ul從 5步往下做。 TRIzol法提取流程 5 .4 ℃ 離心， 13000g 10min ，棄上清。 6 .加入 1ml 75% 乙醇，洗滌沉淀 ,將沉淀打碎。 4 ℃ ， 13000g 5min ，棄上清。 %乙醇 ,輕輕洗滌沉淀 .(不用將沉淀打碎 ) 8. 晾干，加入適量的 H 2 O 溶解（ 100ul）（ 65 ℃ 促溶 1015min ）。
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