20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—trizol法同時(shí)提取rna-dna-蛋白質(zhì)(編輯修改稿)
2024-11-17 22:18 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 用SDS溶液。RNA也可用100℅的去離子甲酰胺溶解，70℃保存。 考前須知： 〔110mg組織或102104細(xì)胞〕中提取RNA時(shí)可參加少許糖原以促進(jìn)RNA沉淀。例如加800ml TRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加510μg RNasefree糖原。糖原會(huì)與RNA一同沉淀出來(lái)，糖原濃度不高于4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反響。 2．勻漿后加氯仿之前樣品可以在60至70℃保存至少一個(gè)月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中28℃一星期以上或5至20℃一年以上。 3．分層和RNA沉淀時(shí)也可使用臺(tái)式離心機(jī)，2600g離心3060分鐘。 預(yù)期產(chǎn)量：1mg組織或1106細(xì)胞提取RNA分別為： 肝和脾610μg ,腎34μg , ,胎盤(pán)14μg ,上皮細(xì)胞815μg ,成纖維細(xì)胞57μg 。 常見(jiàn)問(wèn)題分析： 得率低： B．RNA沉淀未完全溶解 A260/A280 ：，RNA樣品沒(méi)有溶于水，而溶于了TE中。低離子濃度和低pH值條件下A280值偏高 B．樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少 C．勻漿樣品時(shí)未在室溫放置5分鐘 D．吸取水相時(shí)混入了有機(jī)相 E．RNA沉淀未完全溶解。 RNA降解： ℃,而保存在了5至20℃ DNA污染: A. 樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少 (如乙醇,DMSO等),強(qiáng)緩沖液或堿性溶液 蛋白聚糖和多糖污染: 沉淀RNA的過(guò)程中作以下改良可去除這些污染，步驟7中,每使用1ml ( NaCl)混合離心,按之前操作進(jìn)行。這種方法可使蛋白聚糖和多糖留在溶液中，高效沉淀出純RNA。從含有大量多糖的植物中提取RNA時(shí)應(yīng)在勻漿后離心，并加上以上操作步驟。 DNA的別離 準(zhǔn)備試劑：乙醇 (含10%乙醇) 75%乙醇 8mM NaOH 操作步驟: 1. 樣品加氯仿分層后,移去上層水相,用乙醇沉淀中間層和有機(jī)相中的DNA。每使用1ml ，室溫放置3分鐘，2
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