實驗13瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法(編輯修改稿)
2025-06-18 16:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 為潛水式。目前更多用的是后者，因為它制膠和加樣比較方便，電泳槽簡單，易于制作，又可以根據(jù)需要制備不同規(guī) 18 (2) 缺少離子時，電流太小， DNA遷移慢；相反，高離子強度的緩沖液由于電流太大會大量產(chǎn)熱 ，嚴重時，會造成膠熔化和 DNA 常用的電泳緩沖液有 EDTA()和 Tris乙酸 (TAE)， Tris硼酸 (TBE)或 Tris磷酸 (TPE)等 ，濃度約為 50mmol/L() 。電泳緩沖液一般都配制成濃的貯備液，臨用時稀釋到所需倍 TAE緩沖能力較低，后兩者有足夠高的緩沖能力，因此更常用。 TBE濃溶液長期貯存會出現(xiàn)沉 淀，為避免此缺點，室溫下貯存 5 溶液，用時稀釋 10倍。 工作液也可提供足夠的緩沖能力。 19 (3) 以稀釋的電極緩沖液為溶劑，用沸水浴或微波爐配制一定濃度的溶膠，冷卻至 4550℃ 時灌入水平膠框或垂直膠膜，插入梳子，自然冷卻。 (4) DNA樣品用適量 TrisEDTA緩沖液溶解，緩沖溶解液內(nèi)含有 %溴酚藍或其他指示染料， 含有 10%15%蔗糖或 5%10%甘油，以增加其比重，使樣品集中。為避免蔗糖或甘油可能使電泳結(jié)果產(chǎn)生 U形條帶，可改用 % Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。 20 (5) 瓊脂糖凝膠分離大分子 DNA實驗條件的研究結(jié)果表明：在低濃度、低電壓下，分離效果較好。在低電壓條件下，線性 DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。但是，在電場強度增加時，較大的 DNA片段遷移率的增加相對較小。因此隨著電壓的增高，電泳分辨率反而下降，為了獲得電泳分離 DNA片段的最大分辨率，電場強度不宜高于 5V/cm 電泳系統(tǒng)的溫度對于 DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳行為沒有顯著的影響。通常在室溫下進行電泳，只有當(dāng)凝膠濃度低于 %時，為增加凝膠硬度，可在 4℃ ，進 (6) 常用熒光染料溴乙錠 (EB)染色，在紫外光下觀察 DNA條帶，用紫外分析儀拍照，或用凝膠成像系統(tǒng)輸出照片，并進行有關(guān)的數(shù)據(jù)分析。 21 注意 ! 溴 化乙 錠 （ EB） 為 強致癌 劑 ，操作 時應(yīng) 戴手套， 盡 量 減 少臺面 污 染。 目前 實驗 室一般用相 對 安全的 GoldenView等核
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