sdspage凝膠電泳(1)(編輯修改稿)
2025-06-03 18:13 本頁面
【文章內容簡介】 這是因為 SDS破壞了蛋白質氫鍵、疏水鍵等非共價鍵。 ? SDS聚丙烯酰胺凝膠的有效分離范圍取決于用于灌膠的 聚丙烯酰胺的濃度和交聯(lián)度 。 在沒有交聯(lián)劑的情況下聚合的丙烯酰胺形成毫無價值的粘稠溶液 ， 而經(jīng)雙丙烯酰胺交聯(lián)后凝膠的剛性和抗張強度都有所增加 ，并形成 SDS蛋白質復合物必須通過的小孔 。 這些小孔的孔徑隨 “ 雙丙烯酰胺～丙烯酰胺 ” 比率的增加而變小 ， 比率接近 1： 20 時孔徑達到最小值 。 SDS聚丙烯酰胺凝膠大多按 “ 雙丙烯酰胺～丙烯酰胺 ” 為 1： 29 配制 ， 試驗表明它能分離大小相差只有 3% 的蛋白質 。 分離范圍 ? 凝膠的篩分特性取決于它的孔徑 ， 而孔徑又是灌膠時所用丙烯酰胺和雙丙烯酰胺絕對濃度的函數(shù) 。 用 5～ 15%的丙烯酰胺所灌制凝膠的線性分離范圍如下表： 丙烯酰胺濃度（ %） 線性分離范圍（ kD） 15 12～ 43 10 16～ 68 36～ 94 57～ 212 雙丙烯酰胺～丙烯酰胺摩爾比為 1： 29。 實驗中各成分作用 ? 聚丙烯酰胺 ? SDS ? 甘氨酸 ? 上樣緩沖液 ? 固定液 ? 染色劑 丙 烯 酰胺 N,N’亞甲基雙 丙烯酰胺 聚丙烯酰胺 四甲基乙二胺 (TEMED) 過硫酸胺 (AP) 激活作用 激活作用 共聚合 被激活的單體和未被激活的單體反應開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機地通過 Bis的作用進行交叉互聯(lián)成為網(wǎng)狀結構，最終多聚物聚合成凝膠狀，而其孔徑大小等特征由聚合條件及單體濃度決定。 丙烯酰胺 (Acr) N,N’亞甲基雙丙烯酰胺 (Bis) 十二烷基硫酸鈉 (SDS) ? SDS是陰離子型表面活性劑，它能按一定比例與蛋白質分子結合成帶負電荷的復合物，再與 PAGE技術結合，則譜帶差異更加明顯、清晰，并可測定蛋白質分子量。 ? SDS帶有大量負電荷，當其與蛋白質結合時，所帶的負電荷大大超過了蛋白質原有的負電荷，因而 消除或掩蓋了不同種類蛋白質間原有電荷的差異 ，使蛋白質均帶有相同密度的負電荷，因而可利用分子量的差異將各種蛋白質分開。 當?shù)鞍踪|的分子量在 15,000～ 200,000之間時，樣品的遷移率與其分子量的對數(shù)呈線性關系。
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