外文翻譯----關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的pcr檢測(編輯修改稿)
2025-06-26 11:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 于南非、津巴布韋、中國、印度、印尼、尼泊爾、菲律賓、臺灣、泰國的黃龍病病原感染的甜橙葉片提取物 泳道 （ 標(biāo)記為 3～ 11泳道 ） 。 在加了水或者是健康甜橙提取物的 沒有擴增物出現(xiàn) 中。 不管出現(xiàn)黃龍病菌是否在底物 OI2c/OI1()， OI2c/OIA()和 OI2c/OI1/OIA (Fig. 3C)被用到，典型的 1160bp條 帶 只能在經(jīng)感染的甜橙葉片的提取液中才能 被觀察到。相反，當(dāng) PCR的進行用 OI2c/O1A(Fig. 3B)， 1160bp只能在非洲、亞洲的提取物中獲得， 它們得到的都很少或者是根本沒有被擴增。這一步驟可以在同一種植物的獨立提取液中重復(fù)操作，并且總是會得出一致的結(jié)果。另外，這種擴增的條 帶 比方法一 (Fig. 3 pared with )中的更為敏感。 植物樣品采集和保存的環(huán)境 本科畢業(yè)論文 （或設(shè)計） 外文翻譯 4 采用新鮮的葉片中脈得到的擴增產(chǎn)物相當(dāng)好，葉片干燥后 2025℃情況下 2放在工作臺上，用硅酸保存幾天，或者是在冰柜里放在塑料袋子中可以保存達 3周， 且 沒有發(fā)酵發(fā)生。經(jīng)冰凍達 3周的中脈能降低 PCR的靈敏度，如果是從發(fā)酵或者是腐爛的的葉片中提取的清液不能夠 PCR，即使是用針對 16SrDNA萬能底物還是用韌皮部桿菌特異性底物。陽性導(dǎo)出液依然有陽性擴增產(chǎn)物當(dāng)它們被檢測，即使是在冷凍在 20℃或保存在 4℃的冰柜中放置高達 6個月。 以上描述的實驗操作可以 用 。其中葉片中脈的重量高達 1g的情況下 一樣能夠進行 ，容器中高效緩沖液于葉片的比例是 2ml： 1g。 植物提取液的蛋白酶 K孵化時間和用作 PCR的導(dǎo)出液的量 檢驗用 引 物 OI2c/OI1的 PCR產(chǎn)物，在多種體積量（ 2， 5， 10， 25ul）的從健康和感染柑橘葉片中準(zhǔn)備好的導(dǎo)出液，蛋白酶 K孵化時間分別是 30min， 1h， 2h， 4h和 12h。陽性擴增產(chǎn)物在用蛋白酶 K勻漿最低孵化 2h可以獲得 ，過夜后孵化產(chǎn)物很容易獲取。在這些情況下，擴增產(chǎn)物可以用 210ul的導(dǎo)出液獲取，但是更大量的導(dǎo)出液（ 25ul）對 PCR有一種抑制作用。 PCR的特異性和靈敏性 在上面我已經(jīng)指出了用 引 物 OI2c/OI1對青果病菌所有 16SrDNA的擴增的特異性，對所有的韌皮部桿菌品種能夠擴增，而對大腸桿菌、柯 養(yǎng)木桿菌，番茄頑固支原體 等卻不能擴增產(chǎn)物形成。我們將進一步研究韌皮部桿菌引 物的特異性在其它柑橘病原體上， 例如柑橘螺原體，桿菌頑固病菌的柔膜體綱，柑橘潰瘍病的 革蘭氏陰性菌，從柑橘上獲得的（魯菲不動桿菌）細菌，植物病原細菌 ,根癌病土壤桿菌，歸屬于相同的系統(tǒng)發(fā)生的叢生性和韌皮部桿菌相比。我們也檢測了植物根腐病毒感染的柑橘葉子里提取的 DNA清液的擴增產(chǎn)物，這種病毒（ RNA病毒）在亞洲和非洲屬于一種地方病 ，和青果病、根 腐病 是相伴發(fā)生的。圖 4中第 716條 泳道 顯示，從生物體或感染植物提取的 DNA清液的擴增產(chǎn)物，只有在用原核 16SrDNA普通 引 物情況下才能獲取（ 泳道 7， 9， 11， 13， 15），而不是韌皮部桿菌的特異引 物（ 泳道 8， 10， 12， 14， 16）。 在根腐病毒感染植物的 DNA是葉綠體 16SrDNA， 這 DNA用普通引物擴增 。 泳道 5和 6顯示擴增產(chǎn)物是由亞洲菌系感染的 DNA清液獲得的（浦那，印度品種），引物分別是普通引物和特異引物。用水取代 DNA清液的調(diào)控的樣品沒有擴增產(chǎn)物形成（ 泳道 2）和從健康柑橘 上提取的 DNA清液，同預(yù)期一樣，能用普通引物擴增（ 泳道 3）而不能用 韌皮部桿菌特異引物擴增。 由于青果病菌不能培養(yǎng)，確定 PCR的敏感性困難。為了評價這種方法的檢測極限，采用一般的受感染的中脈的量（大約 10mg到 ）和逐漸增多的健康葉片中脈（ 0到 1g）混 合 ，柑橘方法 2來安排實驗。 當(dāng)感染葉片為 20mg時仍然會有擴增產(chǎn)物獲得，但是感染的葉片中脈量更少一些和健康的葉片中脈混合時就沒有擴增產(chǎn)物獲得。 擴增 DNA的特征 韌皮部桿菌 16SrDNA的序列顯示， 限制性內(nèi)切酶 Xbal可以將非洲菌系的 16SrDNA水解成 3個片段（ 520bp， 506bp和 130bp），亞洲菌 系的 16SrDNA水解成 2個片段（ 640bp， 520bp）。當(dāng)擴增從非洲菌系的 內(nèi)爾斯普雷特 品種（南非）（圖 5， 泳道 1） 、 萊塔巴 品種（南非）（泳道 2）或者哈拉雷 品種（津巴布韋）（ 泳道 3），和亞洲菌系的中國品種（ 泳道 4）、印度品種（ 泳道 5）、印度尼西亞品種（ 泳道 6）、菲尼賓品種（ 泳道 7）、臺灣品種（ 泳道 8）和泰國品種（ 泳道 9）提取的 DNA被限制性內(nèi)切酶 Xbal消化 ，再在 4%的瓊脂糖凝膠電泳分析，得到理想的 條帶 的數(shù)量和大小，這兩種品種就很容易從限制性側(cè)面來鑒別出來。 本科畢業(yè)論文 （或設(shè)計） 外文翻譯 5 越南和毛里求斯收集的原始樣品的 PCR評價分析 1995年 1月至 2月間，在越南北部、中部、南部多個不同果園 表現(xiàn)青果病特征的 54個原始樣品和 1995年 4月在毛里求斯 收
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