外文翻譯----關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的pcr檢測(cè)-全文預(yù)覽
【正文】 0， 11），菲律賓（ 泳道 12， 13），臺(tái)灣（ 泳道 14， 15）和泰國(guó)（ 泳道 16）。 Bove180。 參考文獻(xiàn) ： 1. Da Grac184。 關(guān)于流行病學(xué)的研究，用限制性內(nèi)切酶 Xbal 消化 DNA 的擴(kuò)增是來(lái)檢測(cè)提供的韌皮部桿菌品種是可能的。 一種方案是建立在用于韌皮部桿菌 DNA 擴(kuò)增的提取液的差速離心和稀釋上，但是 不能始終如一的足夠可靠的診斷。當(dāng)然，它看起來(lái)像是兩種韌皮部桿菌在同一橘樹(shù)上出現(xiàn) ，使用一對(duì)引物 OI1/ OI2c得到的亞洲菌系和非洲菌系的主要擴(kuò)增產(chǎn)物和引物 OI1的 100%相似，但是亞洲菌系的 16SrDNA片段的有 3處和非洲菌系的不相符 植物病原用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來(lái)探測(cè)用未經(jīng)處理的植物提取液是困難的，因?yàn)?PCR 反應(yīng)的抑制劑存在。 在 毛里求斯和越南 采集 的 沒(méi)有出現(xiàn)青果病癥狀的樹(shù)葉，同樣也有那些從青果病未曾出現(xiàn)的的地方（科西嘉、馬提尼克島）采集到的樹(shù)葉，它們都在這次試驗(yàn)中有所包括，它們用這兩種方法得出了陰性的結(jié)果。 27種樣品用兩種技術(shù)檢測(cè)都是陽(yáng)性，通過(guò) PCR方法是陽(yáng)性和限制性內(nèi)切酶方法是陰性的有 5種樣品。 電子顯 這三個(gè)樣本中的圖 6里的 泳道 兩種探針?lè)磻?yīng)的樣本，它們與三種不同引物的混合物反應(yīng)后均得到了擴(kuò)增。當(dāng)擴(kuò)增從非洲菌系的 內(nèi)爾斯普雷特 品種（南非）（圖 5， 泳道 1） 、 萊塔巴 品種（南非）（泳道 2）或者哈拉雷 品種（津巴布韋）（ 泳道 3），和亞洲菌系的中國(guó)品種（ 泳道 4）、印度品種（ 泳道 5）、印度尼西亞品種（ 泳道 6）、菲尼賓品種（ 泳道 7）、臺(tái)灣品種（ 泳道 8）和泰國(guó)品種（ 泳道 9）提取的 DNA被限制性內(nèi)切酶 Xbal消化 ，再在 4%的瓊脂糖凝膠電泳分析，得到理想的 條帶 的數(shù)量和大小，這兩種品種就很容易從限制性側(cè)面來(lái)鑒別出來(lái)。 由于青果病菌不能培養(yǎng)，確定 PCR的敏感性困難。圖 4中第 716條 泳道 顯示，從生物體或感染植物提取的 DNA清液的擴(kuò)增產(chǎn)物，只有在用原核 16SrDNA普通 引 物情況下才能獲取（ 泳道 7， 9， 11， 13， 15），而不是韌皮部桿菌的特異引 物（ 泳道 8， 10， 12， 14， 16）。在這些情況下，擴(kuò)增產(chǎn)物可以用 210ul的導(dǎo)出液獲取，但是更大量的導(dǎo)出液（ 25ul）對(duì) PCR有一種抑制作用。 以上描述的實(shí)驗(yàn)操作可以 用 。另外，這種擴(kuò)增的條 帶 比方法一 (Fig. 3 pared with )中的更為敏感。 在加了水或者是健康甜橙提取物的 沒(méi)有擴(kuò)增物出現(xiàn) 中。 盡管如此，從相同植株上提取不同上清液，結(jié)果并不一致，得到一些錯(cuò)誤的陰性反應(yīng)。在以水（ 泳道 1）或者健康甜橙樹(shù)苗樣品提取的 DNA(泳道 2)作為反應(yīng)液的，沒(méi)有這種 陽(yáng)性反應(yīng) 。在到達(dá) 實(shí)驗(yàn)室之 前，葉脈是分離 開(kāi) 的； 按 2g 的葉脈 分批 在 80℃ 冷 凍保存，以備以后提取 DNA 和圓點(diǎn)印跡雜交法用；從 的中脈提取 清 液準(zhǔn)備作 PCR 分析用。 限制性內(nèi)切酶分析擴(kuò)增 DNA 片段 在最后，用 35μ L 的量（根據(jù)制造廠商而定） 20U 的 Xba1 限制性內(nèi)切酶來(lái)切割 8μ L 擴(kuò)增 DNA 片段，靜置時(shí)間 為 一晚上。因而它們用來(lái)作韌皮部桿菌的 16sDNA 的特異性擴(kuò)增。懸浮液 12020g 情況下離心 15min，混入 1ml 的引物 DNA 凈化樹(shù)脂。研磨成漿液狀態(tài)，用注射器收 集 進(jìn)行 100g 的低速離心 時(shí)，進(jìn)行離心。這兩類植物，其中感染亞洲菌系的主要放置在白天 30℃和晚上 25℃的溫室中； 感染非洲菌系的放置在白天 25℃和晚上 20℃的溫室中；另外健康的長(zhǎng)春花和柑橘植物通過(guò)播種，在 25/ 20℃的溫室里生長(zhǎng)獲得。通過(guò)基因序列比較分析，模板和擴(kuò)增的韌皮部桿菌的核糖體 DNA 有明顯的相同部分。通常 圓點(diǎn)印跡 雜交化驗(yàn)法 ，可以在感染的柑橘果園里采集柑橘葉片樣片，分別檢測(cè)青果病病菌種類。 青果病是由一種韌皮部限制性細(xì)菌引起的， 由于這種細(xì)菌難培養(yǎng)，當(dāng)前把它作為一個(gè)特征 。 該 病菌是 屬于 韌皮部桿菌屬難培養(yǎng)的新種類 ，在變形菌門的阿爾法部分上，這兩種病菌可以被鑒別出來(lái)，即亞洲株系和非洲株系 。它是由一種 難以分離和培養(yǎng)的韌皮部桿菌引起的，目前是從核糖體 DNA 序列來(lái)鑒別出來(lái)。由于昆蟲(chóng)媒介可以攜 帶 這種 病菌，所以這種病害威脅著其他柑橘種植區(qū)域（像美洲和地中海國(guó)家），例如 柑橘木虱、非洲木虱相繼在南美和大西洋島出現(xiàn)。兩種 DNA 探針 ： 和 包含 核糖體蛋白質(zhì) 的 基因（ 稱作β 操縱子，知道其片段結(jié)構(gòu)和大小） ，分別由亞洲菌系和非洲菌系制備的。 PCR是一種簡(jiǎn)單、快捷和靈敏的方法，的確如此， 我們把它作為早期 DNA 克隆的目的，得到亞洲菌系和非洲菌系的 16SrDNA 的基因序列。 本科畢業(yè)論文 （或設(shè)計(jì)） 外文翻譯 2 植物材料 長(zhǎng)春花 （薔薇屬）和甜橙（柑橘科），均受到亞洲菌系和非洲菌系的兩種不同病菌的感染，并體現(xiàn)初 出 早期的癥狀。 方法 1： 取 的葉片中脈，用刀片切成細(xì)小的碎片放在一個(gè)碟狀的可使用的研缽中，加入 1ml 的 NaCl。 將研磨成漿液轉(zhuǎn)移到 Eppendorf 離心管中，在 65℃情況下孵化 2h。
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