外文翻譯----關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的pcr檢測(cè)(文件)
【正文】 稀釋的懸浮液中擴(kuò)增， 1500bp 和 1160bp 的 DNA 條 泳道 可以依次看見(jiàn)，其中感染甜橙樹(shù)苗的品種有來(lái)自南非的（ 泳道 4， 5），中國(guó)（ 泳道 6， 7），印度（ 泳道 8， 9），印度尼西亞（ 泳道 10， 11） ，菲律賓（ 泳道 12， 13），臺(tái)灣（ 泳道 14， 15）和泰國(guó)（ 泳道 16，僅用的特異引 物）。因此，方法 2 中一些局部活躍的 DNA 擴(kuò)增成功， 并 得到證實(shí)（方法 2，材料和方法）。相反，當(dāng) PCR的進(jìn)行用 OI2c/O1A(Fig. 3B)， 1160bp只能在非洲、亞洲的提取物中獲得， 它們得到的都很少或者是根本沒(méi)有被擴(kuò)增。經(jīng)冰凍達(dá) 3周的中脈能降低 PCR的靈敏度，如果是從發(fā)酵或者是腐爛的的葉片中提取的清液不能夠 PCR，即使是用針對(duì) 16SrDNA萬(wàn)能底物還是用韌皮部桿菌特異性底物。 植物提取液的蛋白酶 K孵化時(shí)間和用作 PCR的導(dǎo)出液的量 檢驗(yàn)用 引 物 OI2c/OI1的 PCR產(chǎn)物，在多種體積量（ 2， 5， 10， 25ul）的從健康和感染柑橘葉片中準(zhǔn)備好的導(dǎo)出液，蛋白酶 K孵化時(shí)間分別是 30min， 1h， 2h， 4h和 12h。我們將進(jìn)一步研究韌皮部桿菌引 物的特異性在其它柑橘病原體上， 例如柑橘螺原體，桿菌頑固病菌的柔膜體綱，柑橘潰瘍病的 革蘭氏陰性菌，從柑橘上獲得的（魯菲不動(dòng)桿菌）細(xì)菌，植物病原細(xì)菌 ,根癌病土壤桿菌，歸屬于相同的系統(tǒng)發(fā)生的叢生性和韌皮部桿菌相比。 泳道 5和 6顯示擴(kuò)增產(chǎn)物是由亞洲菌系感染的 DNA清液獲得的（浦那，印度品種），引物分別是普通引物和特異引物。 當(dāng)感染葉片為 20mg時(shí)仍然會(huì)有擴(kuò)增產(chǎn)物獲得，但是感染的葉片中脈量更少一些和健康的葉片中脈混合時(shí)就沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物獲得。 在越南收集的 54個(gè)樣品中， 8個(gè)在剛剛 寄入 波爾多時(shí)便腐爛了，它們與 后積極的生長(zhǎng)但是與 ，并且不管是用的通用的還是特種的黃龍病原引物都不會(huì)產(chǎn)生 PCR條 帶 ，這說(shuō)明這一 DNA不能被擴(kuò)增即使它仍然可以為 雜交培植中所接受。限制性內(nèi)切酶 Xbal消化了從這 46個(gè)陽(yáng)性 PCR樣本 中給出的擴(kuò)增 DNA，正如我們所期待的，在瓊脂糖凝膠電泳中，這一條 帶 輪廓與柑橘黃龍病菌相符合。用亞洲菌系的探針經(jīng)限制性內(nèi)切酶方法是陽(yáng)性的樣 本，它們用引物 OI2c/OI1 和引物 OI2c/OI1/OA1得出了陽(yáng)性的PCR結(jié)果，但是和引物 OI2c/。 OI1/ OI2c這一對(duì)引物能夠擴(kuò)增出這兩個(gè)菌種，然而引物對(duì) OI2c/OA1能夠優(yōu)先擴(kuò)增出非洲菌種 。盡管如此，至于難培養(yǎng)的柑橘青果病菌，這種方法不能應(yīng)用，由于已出現(xiàn)了許多病菌的血清型，而迄今為止還沒(méi)有單克隆抗體生產(chǎn) ，這種方法能夠與所有韌皮部桿菌起反應(yīng)。在溫室和原野里生長(zhǎng)的橘 本科畢業(yè)論文 （或設(shè)計(jì)） 外文翻譯 6 樹(shù)亞洲菌系和非洲菌系的檢測(cè)結(jié)果是一致的， 至少用一種敏感性和 DNADNA 雜交 具有同等效率的方法。我們要感謝 CIRADFLHOR 在柑橘青果病研究的全力支持，和提供資金在越南地區(qū)進(jìn)行調(diào)查。, J. M. amp。a, J. V. amp。 DNA以通用引物 rDNA為底物（ 泳道 1， 3， 5， 7， 9， 11， 13和 15）或者以黃龍病菌的16SrDNA菌種 O12c/OI1為引物 (泳道 2， 4， 6， 8， 10， 12， 14和 16)與水的對(duì)照（ 泳道 1，2） ，從健康葉片的提取物（ 泳道 3， 4），來(lái)自亞洲菌種的（ 泳道 5， 6），來(lái)自受根腐病菌感染的甜橙樹(shù)種（ 泳道 5， 6），來(lái)自螺原體的 DNA（ 泳道 9， 10），來(lái)自野生黃桿菌屬（ 泳道 11， 12），不動(dòng)細(xì)菌屬（ 泳道 13， 14） 圖 %的瓊脂糖凝膠電泳分析 。 限制性內(nèi)切酶 Xbal消化的 DNA擴(kuò)增產(chǎn)物 ， 內(nèi)羅斯布魯 Nelsprui（ 南非 ） （ 泳道 1）， 萊塔巴 品種 （ 泳道 2）和哈拉雷品種（津巴布韋）（ 泳道 3），亞洲菌系的中國(guó)品種（ 泳道 4），印度品種（ 泳道 5）和尼泊爾品種（ 泳道 6），菲尼賓品種（ 泳道 7），臺(tái)灣品種（ 泳道 8）和和泰國(guó)品種（ 泳道 9）。 M, 1 kb ladder (Gibco, BRL), 。 限制性內(nèi)切酶 Xbal消化 DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。螺原體病原的 DNA(泳道 9， 10)柑橘潰瘍?。?泳道 11， 12）洛夫不動(dòng)桿菌（ 泳道 13， 14）和根癌病土壤桿菌（ 泳道 15， 16） 。 M,1kb ladder（ Gibco 公司生產(chǎn)） 本科畢業(yè)論文 （或設(shè)計(jì)） 外文翻譯 8 圖 16SrDNA為通用引物（ 泳道 1， 2， 4， 6， 8， 10， 12和 14） 或者 從水中（ 泳道 1） 以黃龍病菌 16SrDNA的菌種引物 OI2c/OI1（ 泳道 3， 5， 7， 9， 11， 13， 15和 16） 的DNA擴(kuò)增條 泳道 的 %瓊脂糖凝膠 分析 來(lái)自健康甜橙葉片遵循方法一的提取物（ 泳道 2， 3）或者從感染了黃龍病菌的提取物：南非（ 泳道 4， 5），中國(guó)（ 泳道 6， 7） ， 印度 （ 泳道 8， 9），印尼（ 泳道 1
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