物理圖譜的構(gòu)建策略研究(ppt39)-經(jīng)營(yíng)管理(編輯修改稿)
2024-09-19 20:07 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ，以 mRNA為模板經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成鉤狀的 DNA即互補(bǔ)DNA (plement DNA,cDNA)，用 cDNA來(lái)標(biāo)記特定染色體區(qū)域或區(qū)帶上 DNA表達(dá)的區(qū)域和位置。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? 構(gòu)建方法： cDNA作圖的基礎(chǔ)是構(gòu)建 cDNA文庫(kù) (library)。以 cDNA為探針，從基因組 DNA克隆片段上尋找 編碼蛋白質(zhì)區(qū)域，分離出相應(yīng)的特異性基因。因 cDNA與 mRNA嚴(yán)格互補(bǔ)， cDNA直接反映了基因 中編碼區(qū)域的相關(guān)序列，并確定其轉(zhuǎn)譯cDNA圖譜可作為表達(dá)序列尤其是致病基因表達(dá)區(qū)域的識(shí)別工具。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? 家系分離分析法 (pedigree segregate analysis)構(gòu)建的遺傳圖譜 ? 將低分辨率物理圖譜與遺傳圖譜進(jìn)行對(duì)比，整合的遺傳圖譜提供的多態(tài)性標(biāo)記的距離和位置可粗 略地對(duì)應(yīng)于物理圖譜的平均距離，即 1cM連鎖圖距對(duì)應(yīng)于1Mb 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? 二、輻射雜交圖譜 (radiation hybridization map ,RH) ? 概念：輻射雜交圖譜是利用體細(xì)胞雜交技術(shù)構(gòu)建人類基因組高分辨率、大尺度范圍的連續(xù)物理 圖譜的 常用方法。該方法以 Goss和 Harris(1975)等人的研究為基礎(chǔ)，將體細(xì)胞雜交技術(shù)與 PCR方法 相結(jié)合，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)手段計(jì)算染色體位點(diǎn)斷裂分離頻率，推出位標(biāo)之間的距離和在染色體上 的排列順序。其精度范圍約為 ～ 30Mb 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? 構(gòu)圖方法：輻射雜交是利用含有全套鼠染色體和含有某條人類染色體的中國(guó)倉(cāng)鼠體細(xì)胞進(jìn)行雜 交。含選擇性標(biāo)記單一染色體的體細(xì)胞作為供體，利用高劑量的 X射線將候選染色體打斷成若干片段，這種染色體結(jié)構(gòu)被破壞的細(xì)胞與倉(cāng)鼠細(xì)胞形成雜交克隆。依據(jù)染色體上位標(biāo)相距越近其斷裂頻率越低的原理，通過(guò) Southern雜交和 PCR方法研究雜種克隆中人基因組 DNA 位標(biāo)的分布，用類似于遺傳重組原理和最大似然性法 (maximum likelihood)來(lái)計(jì)算 DNA片段 上多態(tài)性和非多態(tài)性 STS之間斷裂頻率，斷裂頻率越高， STS間的距離越遠(yuǎn)，以此估計(jì) STS的 實(shí)際距離。根據(jù)不同要求，構(gòu)建斷裂程度不同的多套拷貝，建立含有人類 DNA片段的 YA C克隆庫(kù)，得到分辨率不同的輻射雜交圖譜。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) 輻射雜交圖譜的特點(diǎn) ? ① RH可以使用非多態(tài)標(biāo)記。 ? ② RH法與脈沖電場(chǎng)凝膠電泳法 (pulsedfield gel electrophoretic,PFGE)聯(lián)合使用使兩方 法具有互補(bǔ)性。 ? ③用 RH法在細(xì)胞分裂間期繪制染色體區(qū)域圖比用細(xì)胞遺傳學(xué)法在細(xì)胞分裂中期繪制的染色 體區(qū)域圖更準(zhǔn)確。 ? ④由于一些不易建立重疊群的基因組區(qū)域 (如某些 GC)富集區(qū)較難構(gòu)建物理圖譜，
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