20xx年直腸黏膜修復敷料生物學評價研究(編輯修改稿)
2025-03-15 02:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 操作。見圖1。激發(fā)：最后一次誘導后14d，對所有豚鼠于圖1中的激發(fā)部位進行激發(fā)，方法同①，貼敷6h。24h后剔除激發(fā)部位及周圍被毛，溫水洗凈擦干，脫毛后至少2h，按表1對試驗部位評分，并于48h再次評分。見表1。（MTT法）[3,5,6]試驗樣品及試液的制備：①供試液：?C浸提24h后2000r/min離心3min，取上清。②陰性對照液：取高密度聚乙烯（厚度為1mm）36cm2，剪成5mm25mm的小塊，加12mL細胞生長培養(yǎng)液，37?C浸提24h，過濾除菌。③陽性對照液：5g/L苯酚溶液，過濾除菌，現(xiàn)用現(xiàn)配。④空白對照液：同細胞生長培養(yǎng)液。方法：取6塊96孔培養(yǎng)板，每板各設6孔，每孔接種100μL處于對數(shù)生長期狀態(tài)良好的L929細胞混懸液，密度為1104個/mL。置5%CO2培養(yǎng)箱37?C培養(yǎng)24h后，棄去原生長培養(yǎng)液。13板各加100μL供試液，作為供試品組；4板加100μL空白對照液，作為空白對照組；5板加100μL的陽性對照液，作為陽性對照組，6板加100μL的陰性對照液，作為陰性對照組，置CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。72h后，取出各板，置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，每孔加入20μL質(zhì)量濃度為5g/L的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄去孔內(nèi)液體，每孔加入150μLDMSO，振蕩10min，在酶標儀570nm和630nm波長下測定吸光度，按下式計算相對增值率（RGR）。RGR=A/A0100%注：RGR——相對增值率，%；A——供試品組（陽性及陰性對照組）在570nm和630nm波長下的吸光度的差值；A0——空白對照組吸光度。根據(jù)RGR按表2判定毒性反應分級。見表2。[4]選取直腸無明顯刺激癥狀、無缺陷和無損傷的家兔
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