細(xì)胞生物學(xué)研究方法(1)(編輯修改稿)
2025-02-12 21:11 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 樣品時(shí) ， 此處電子云重疊 ， 外加一電壓 （ 2mV~2V） ， 針尖與樣品之間形成隧道電流 。 電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系 ， 將掃描過(guò)程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像 ， 即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài) 。 ? 分辨率：橫向?yàn)?~， 縱向可達(dá) 。 ? 用途：三態(tài) （ 固態(tài) 、 液態(tài)和氣態(tài) ） 物質(zhì)均可進(jìn)行觀察 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法 。 顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置 。 ? 顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植 、 顯微注射 、 嵌合體技術(shù) 、胚胎移植以及顯微切割等 。 – 細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史 ， Gordon等人 （ 1962） 對(duì)非洲爪蟾進(jìn)行核移植獲得成功 。 我國(guó)著名學(xué)者童第周等上個(gè)世紀(jì) 70年代在魚(yú)類(lèi)細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作 ， 并取得了豐碩成果 。 顯微操作儀 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) 一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù) ? 組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method） 用于對(duì)某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 2. 化學(xué)固定：如甲醇 、 乙醇 、 丙酮 、 甲醛 、 戊二醛和鋨酸等試劑 。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類(lèi)多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 （二）顯示方法 1. 金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后 ， 反應(yīng)產(chǎn)物最終生成 CoS或 PbS有色沉淀 ， 而顯示出酶活性 。 2. Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無(wú)色品紅變?yōu)榧t色 。 用于顯示糖和脫氧核糖核酸 （ Feulgen反應(yīng) ） 。 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)：過(guò)氧化酶分解 H202。 產(chǎn)生新生氧 ， 后者再將無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán) ， 進(jìn)而變成棕色化合物 。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類(lèi)而使脂類(lèi)顯色 。 5. 茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì) 。 二、免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用抗體同特定抗原專(zhuān)一結(jié)合 ， 對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù) 。 常用的標(biāo)記物有熒光素和酶 。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 ? 酶標(biāo)免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶 ， 酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物 ， 從而顯示出抗原存在的部位 。 三、顯微光譜分析技術(shù) ? 細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線(xiàn)。 ? 可利用顯微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測(cè)定。 四、放射自顯影術(shù) ? 用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體 、 組織和細(xì)胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機(jī)理 、 作用部位等等 。 ? 原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi) ， 經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后 ， 制取切片 ， 涂上鹵化銀乳膠 ， 經(jīng)放射性曝光 ，使乳膠感光 。 ? 一般用 14C和 3H標(biāo)記 。 常用 3HTDR來(lái)顯示 DNA， 用 3HUDR顯示 RNA；用 3H氨基酸研究蛋白質(zhì) ， 用 3H甘露糖 、3H巖藻糖研究多糖 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 五、分子雜交技術(shù) ? 具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段 ， 在適當(dāng)條件下 ， 通過(guò)氫鍵結(jié)合 ， 形成 DNADNA， DNARNA或RNARNA雜交的雙鏈分子 。 這種技術(shù)可用來(lái)測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是否
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