細胞生物學實驗技術(編輯修改稿)
2025-02-12 21:12 本頁面
【文章內容簡介】 極細的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結構有關，次級電子由探測器收集，信號經放大用來調制熒光屏上電子束的強度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。 ? 為了使標本表面發(fā)射出次級電子，標本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細胞 酵母 人類精子 三、顯微操作技術 micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用 顯微操作器 進行細胞或早期胚胎操作的一種方法 。 ? 顯微操作器 是用以 控制 顯微注射針 在顯微鏡視野內移動的機械裝置 。 ? 顯微操作技術包括細胞核移植 、 顯微注射 、 嵌合體技術 、 胚胎移植以及顯微切割等 。 顯微操作儀 第二節(jié) 生物化學與分子生物學技術 一、細胞化學技術 ? 組織化學和細胞化學染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method） 用于對某些細胞成分進行定性和定位研究 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 2. 化學固定：如甲醇 、 乙醇 、 丙酮 、 甲醛 、 戊二醛和鋨酸等試劑 。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 （二）顯示方法 1. 金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后 ， 反應產物最終生成 CoS或 PbS有色沉淀 ， 而顯示出酶活性 。 2. Schiff反應：細胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色 。 用于顯示糖和脫氧核糖核酸 （ Feulgen反應 ） 。 3. 聯苯胺反應：過氧化酶分解 H202。 產生新生氧 ， 后者再將無色聯苯胺氧化成聯苯胺藍 ， 進而變成棕色化合物 。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色 。 5. 茚三酮反應：顯示蛋白質 。 二、免疫細胞化學 immunocytochemistry ? 根據免疫學原理 ， 利用抗體同特定抗原專一結合 ， 對抗原進行定位測定的技術 。 常用的標記物有熒光素和酶 。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 ? 酶標免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過氧化物酶 ， 酶與底物發(fā)生反應后形成不透明的沉積物 ， 從而顯示出抗原存在的部位 。 三、放射自顯影術 ? 用于研究標記化合物在機體 、 組織和細胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機理 、 作用部位等等 。 ? 原理：將放射性同位素標記的化合物導入生物體內 ， 經過一段時間后 ， 制取切片 ， 涂上鹵化銀乳膠 ， 經放射性曝光 ，使乳膠感光 。 ? 一般用 14C和 3H標記 。 常用 3HTDR來顯示 DNA， 用 3HUDR顯示 RNA；用 3H氨基酸研究蛋白質 ， 用 3H甘露糖 、3H巖藻糖研究多糖 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 四、分子雜交技術 ? 具有互補核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段 ， 在適當條件下 ， 通過氫鍵結合 ， 形成 DNADNA， DNARNA或RNARNA雜交的雙鏈分子 。 這種技術可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補關系 。 ? （ 一 ） 原位雜交 （ in situ hy
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