【正文】 2．掌握細菌染色體、質(zhì)粒的概念及主要性質(zhì)。細菌變異的實際意義。感染來源、感染方式、感染的類型。第二篇 微生物學檢驗第十章 微生物學檢驗概述[教學學時] 2學時[重點] 標本采集與處理與微生物學檢查的具體操作方法與步驟[要點] 微生物學檢查的各種方法[難點] 質(zhì)量保證 ——措施如何得到切實的質(zhì)量保證[基本內(nèi)容]一、微生物學檢驗的目的要求二、標本采集與處理 1. 標本采集 2. 標本的運送三、微生物學檢查 1. 直接鏡檢 2. 快速診斷和直接藥敏試驗 3. 常規(guī)檢驗 4. 報告四、血清學診斷五、臨床微生物學實驗室的安全措施和質(zhì)量保證 1. 實驗室安全防護 2. 感染性廢棄物的處理 3. 質(zhì)量保證第十一章 球　菌［教學學時］ 2學時［重點］ 掌握各種病原性球菌的形態(tài)染色、培養(yǎng)特性，致病物質(zhì)和所致疾病。Ｂ族、Ｄ族鏈球菌的特性及所致疾病。 掌握大腸桿菌、痢疾桿菌、沙門氏菌的生化反應特點、致病物質(zhì)、所致疾病。[目的要求] 掌握霍亂孤菌的形態(tài)、培養(yǎng)特點、致病性（腸毒素及其致病機理）、微生物學檢查及快速診斷方法。幽門螺桿菌：形態(tài)培養(yǎng)、致病性、生化反應、防治原則。（3）肉毒桿菌：生物學性狀，致病性、微生物學檢查、防治原則。[要點與基本要求]結(jié)核桿菌：形態(tài)、染色、培養(yǎng)、抵抗力、變異性，菌體成分及其作用。鮑特氏菌屬：百日咳桿菌的生物學特性（變異）、致病性和免疫性、微生物學檢查和特異性預防。[重點]熟悉支原體主要種類及主要特性，掌握主要病原體支原體的致病性。致病性與免疫性，微生物學檢查及防治原則。主要病原性衣原體：沙眼生物變種的致病性與免疫性，微生物學檢查，性病淋巴肉芽腫生物變種的致病性。6．干擾現(xiàn)象：當兩種不同的病毒或兩株性質(zhì)不同的同種病毒，同時或先后感染同一細胞或機體時，可發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象，稱為病毒的干擾現(xiàn)象。形成三種對稱型：螺旋對稱性、20面體立體對稱型和復合對稱型。2．原代細胞培養(yǎng)：采用機械或胰蛋白酶等處理離體的新鮮組織器官，制成分散的單個細胞懸液，加入生長液后，分裝于培養(yǎng)管中培養(yǎng)，活細胞貼壁生長繁殖，數(shù)天后形成單層細胞，稱原代細胞培養(yǎng)。4．根據(jù)細胞的來源、染色體特性及傳代次數(shù)，細胞培養(yǎng)可分為三種類型：原代和次代細胞培養(yǎng)、二倍體細胞株、傳代細胞系。（2）從呼吸道、陰道、腸道標本分離病毒的病原學意義需要考慮這些病毒是否有無癥狀攜帶者和長期排毒者。否則出現(xiàn)溶血為陰性結(jié)果。2．中和試驗可用來檢查患病后或人工免疫后，機體血清中抗體增長情況，以便于輔助診斷和免疫效果評價；也可用已知抗體鑒定病毒。早期診斷主要是應用具有高度特異敏感的快速診斷方法去檢測病毒的特異成分（包括完整的病毒顆粒、病毒抗原和核酸成分）。通過電鏡檢查從早期感染材料中直接檢出病毒顆粒。一、流行性感冒病毒1．生物學性狀：病毒顆粒呈多形性，核酸為分節(jié)段的單負股RNA，易發(fā)生基因重組，從而引起變異；包膜表面有血凝素和神經(jīng)氨酸酶兩種刺突，其抗原性易發(fā)生變異；據(jù)NP和M蛋白的抗原性不同，可將流感病毒分為甲、乙、丙型，根據(jù)NA和HA抗原性不同又分為若干亞型；抗原變異幅度取決于HA和NA的變異大小，并直接影響流感流行的規(guī)模，表現(xiàn)為抗原漂移或抗原轉(zhuǎn)變；該病毒適于在雞胚中增殖，組織培養(yǎng)可采用犬腎細胞系（MDCK）或人胚腎或猴腎細胞，動物接種以雪貂最敏感。3．微生物學檢查采集發(fā)病早期的上呼吸道標本，接種于原代人胚腎、原代猴腎細胞，在CPE出現(xiàn)以前可用豚鼠紅細胞做吸附試驗，用紅細胞吸附抑制試驗、血凝抑制試驗、中和試驗和補體結(jié)合試驗進行鑒定。三、腺病毒（一）生物學特性：球形，二十面立體對稱，無包膜，12個五鄰體位于20面體的頂角上；不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織、細胞中增殖，人胚腎細胞易感。第五節(jié) 腸道病毒[授課學時] 1學時 [學習重點] 常見腸道病毒的生物學特性及其檢驗方法。因此，通過組織細胞分離病毒仍然是許多實驗室常用的診斷方法。HCV為黃病毒科，有包膜，含單正股RNA，最敏感的動物是黑猩猩。HEV感染的傳播途徑和臨床表現(xiàn)與HAV感染相似。[基本要點]一、流行性乙型腦炎病毒：1．主要生物學性狀：病毒結(jié)構(gòu)蛋白有3種：M、C和E，抗原性穩(wěn)定。三、登革病毒傳播媒介為伊蚊，在人蚊之間傳播，輕型病人表現(xiàn)為普通登革熱，再次感染的重型病人表現(xiàn)為登革出血熱。微生物學診斷主要是病毒分離和用ELISA、IFA檢測抗體，中和試驗、補體結(jié)合試驗及血凝抑制試驗常用于流行病學調(diào)查。（2）病毒培養(yǎng)是最敏感的方法，可用McAb或核酸雜交進行鑒定、分型。2．初次感染多見于兒童，表現(xiàn)為水痘，VZV常潛伏于脊髓后根神經(jīng)節(jié)或顱神經(jīng)感覺神經(jīng)節(jié)中。3．微生物學檢查（1）采用ACIF法和核酸雜交直接檢查淋巴結(jié)、脾或腫瘤組織中的病毒核酸或抗原。2．HIV選擇性地侵犯表達CD4的細胞，從而引起CD4細胞缺損，細胞免役功能受損，引起多種疾病狀態(tài)。3．病毒分離和抗體檢測方法與HIV感染檢測方法相似。4．微生物學檢查（1）取發(fā)病動物海馬回部組織做切片或涂片染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法檢查病毒抗原；取患者頸后發(fā)際皮膚做活檢系列切片，檢查病毒抗原。掌握致病性真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點，致病性及微生物學檢查，了解真菌毒素的致病作用，真菌性變態(tài)反應。黃曲霉素及其致癌作用。微生物學檢查、白色念珠菌：形態(tài)培養(yǎng)特性。2．只感染人的皮膚和粘膜上皮細胞，可引起不同的疣。3．常選用ELISA雙抗夾心法診斷，當糞便中的病毒顆粒較多時可用膠乳凝集實驗或電鏡觀察。（2）病毒分離采用非感染的PBMC進行培養(yǎng)，2周后可檢出上清夜中的逆轉(zhuǎn)錄酶活性或p24抗原。第九節(jié) 其他病毒[授課學時] 1學時 [學習重點] 有關(guān)病毒的生物學特性及其微生物學檢查方法。（3）EIA為主要的血清學診斷方法。3．微生物學檢查（1）采用組織病理學、脫落細胞學、免疫熒光技術(shù)、電鏡觀察、核酸雜交和PCR等直接檢查病毒或特異性抗原。HSV有兩種血清型，核酸同源性達40% 。2．臨床意義可引起腎綜合征出血熱（流行性出血熱），往往與鼠類的分布和活動有關(guān)，也可經(jīng)螨傳播。但臨床標本的分離率極低。HDV檢測標本為肝活檢組織和血清，用免疫熒光或酶標法檢測其中的HDAg，用核酸雜交和RTPCR法檢測HDV RNA，用EIA或RIA檢測血清中的抗HDV。HBV通過血液與血液制品、密切接觸、母嬰傳播，其臨床表現(xiàn)呈多樣性，可表現(xiàn)為無癥狀攜帶者、急性肝炎和遷延型慢性肝炎。[基本概念] 肝炎病毒：是引起病毒性肝炎的病原體。往往一種血清型腸道病毒可引起多種疾病，一種疾病也可與多種血清型有關(guān)。3．病毒分離與鑒定：采用人源傳代和原代細胞進行分離培養(yǎng)，典型CPE現(xiàn)象為細胞腫脹、變圓、聚集、拉絲呈葡萄狀，受染細胞核中形成嗜堿性包涵體。3．微生物學檢查：（1）采集早期的呼吸道標本。（2）分離培養(yǎng)與鑒定：可采用雞胚接種、細胞培養(yǎng)和動物接種進行分離，用人“O”型血或豚鼠紅細胞進行血凝試驗，并用血凝抑制試驗鑒定型和亞型。有些出現(xiàn)上呼吸道或下呼吸道感染癥狀，另一些由呼吸道感染，但主要癥狀是呼吸道以外的感染癥狀。2．胞外游離病毒的檢測：可用ELISA、dotELISA、酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡法（enzymelinked immunoelectrotransfer biot, EITB）、固相放射免疫試驗等。5．酶聯(lián)免疫吸附測定的基本原理同免疫熒光檢測，只是標記物為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶。4．間接免疫熒光檢測：實驗體系包括病毒抗原 + 抗體 + 熒光素標記的抗抗體，在熒光顯微鏡下觀察熒光的強弱。第二節(jié) 病毒血清學診斷[授課學時] 2學時 [學習重點] 重點學習各種血清學診斷方法的原理和檢測意義。6．動物接種分離病毒需要選擇敏感動物及合適的接種部位。6．細胞病變效應（CPE）：病毒在細胞內(nèi)增殖后，由病毒引起的細胞形態(tài)學改變，稱為細胞病變效應。7．注意學習亞病毒的概念、生物學特性和致病特點。[基本要點]注意學習以下內(nèi)容1．病毒的測量單位：納米2．病毒的形態(tài)：球形或近球形、桿狀、絲狀、彈形、磚形、蝌蚪形。3．復制周期：動物病毒的復制，一般可分為吸附、穿入、脫殼、生物合成、組裝與成熟、釋放等6個階段，稱為復制周期。主要病原性立克次氏：普氏及莫氏立克次氏體、恙蟲病立克次氏體、Q熱柯克斯體的傳播方式與致病特點、微生物學檢查。[重點] 熟悉螺旋體的主要特點及分類。 放線菌屬（補充內(nèi)容）[教學學時] [重點]熟悉放線菌的主要特性，致病性放線菌的形態(tài)特點及致病性。耶爾森氏菌屬：鼠疫桿菌的生物學性狀、致病性、微生物學檢查與防治。[要點與基本要求]白喉桿菌：形態(tài)染色、培養(yǎng)、抵抗力、致病性、免疫性、微生物學檢查、特異性防治。掌握無芽胞厭氧菌感染的機體條件及所致疾病。[基本內(nèi)容]一、 霍亂菌屬二、 非O1群霍亂弧菌三、 O139型霍亂弧菌第十四章 彎曲菌屬和螺桿菌屬[教學學時] 2學時。 志賀氏菌屬：生物學性狀|致病性|傷寒的病程和免疫性、微生物學檢查（沙門氏菌的分離與鑒定、肥達氏反應），防治原則，特異性預防。 柰瑟氏菌屬 腦膜炎球菌：形態(tài)染色、培養(yǎng)、抗原構(gòu)造、抵抗力、致病物質(zhì)及所致疾病、免疫性、微生物學檢查、防治原則。致病性：致病物質(zhì)（凝固酶、溶血素、殺白細胞素、表皮溶解