【正文】 2．掌握細(xì)菌染色體、質(zhì)粒的概念及主要性質(zhì)。細(xì)菌變異的實(shí)際意義。感染來(lái)源、感染方式、感染的類型。第二篇 微生物學(xué)檢驗(yàn)第十章 微生物學(xué)檢驗(yàn)概述[教學(xué)學(xué)時(shí)] 2學(xué)時(shí)[重點(diǎn)] 標(biāo)本采集與處理與微生物學(xué)檢查的具體操作方法與步驟[要點(diǎn)] 微生物學(xué)檢查的各種方法[難點(diǎn)] 質(zhì)量保證 ——措施如何得到切實(shí)的質(zhì)量保證[基本內(nèi)容]一、微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的要求二、標(biāo)本采集與處理 1. 標(biāo)本采集 2. 標(biāo)本的運(yùn)送三、微生物學(xué)檢查 1. 直接鏡檢 2. 快速診斷和直接藥敏試驗(yàn) 3. 常規(guī)檢驗(yàn) 4. 報(bào)告四、血清學(xué)診斷五、臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的安全措施和質(zhì)量保證 1. 實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù) 2. 感染性廢棄物的處理 3. 質(zhì)量保證第十一章 球　菌［教學(xué)學(xué)時(shí)］ 2學(xué)時(shí)［重點(diǎn)］ 掌握各種病原性球菌的形態(tài)染色、培養(yǎng)特性，致病物質(zhì)和所致疾病。Ｂ族、Ｄ族鏈球菌的特性及所致疾病。 掌握大腸桿菌、痢疾桿菌、沙門氏菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)、致病物質(zhì)、所致疾病。[目的要求] 掌握霍亂孤菌的形態(tài)、培養(yǎng)特點(diǎn)、致病性（腸毒素及其致病機(jī)理）、微生物學(xué)檢查及快速診斷方法。幽門螺桿菌：形態(tài)培養(yǎng)、致病性、生化反應(yīng)、防治原則。（3）肉毒桿菌：生物學(xué)性狀，致病性、微生物學(xué)檢查、防治原則。[要點(diǎn)與基本要求]結(jié)核桿菌：形態(tài)、染色、培養(yǎng)、抵抗力、變異性，菌體成分及其作用。鮑特氏菌屬：百日咳桿菌的生物學(xué)特性（變異）、致病性和免疫性、微生物學(xué)檢查和特異性預(yù)防。[重點(diǎn)]熟悉支原體主要種類及主要特性，掌握主要病原體支原體的致病性。致病性與免疫性，微生物學(xué)檢查及防治原則。主要病原性衣原體：沙眼生物變種的致病性與免疫性，微生物學(xué)檢查，性病淋巴肉芽腫生物變種的致病性。6．干擾現(xiàn)象：當(dāng)兩種不同的病毒或兩株性質(zhì)不同的同種病毒，同時(shí)或先后感染同一細(xì)胞或機(jī)體時(shí)，可發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象，稱為病毒的干擾現(xiàn)象。形成三種對(duì)稱型：螺旋對(duì)稱性、20面體立體對(duì)稱型和復(fù)合對(duì)稱型。2．原代細(xì)胞培養(yǎng)：采用機(jī)械或胰蛋白酶等處理離體的新鮮組織器官，制成分散的單個(gè)細(xì)胞懸液，加入生長(zhǎng)液后，分裝于培養(yǎng)管中培養(yǎng)，活細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)繁殖，數(shù)天后形成單層細(xì)胞，稱原代細(xì)胞培養(yǎng)。4．根據(jù)細(xì)胞的來(lái)源、染色體特性及傳代次數(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)可分為三種類型：原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)、二倍體細(xì)胞株、傳代細(xì)胞系。（2）從呼吸道、陰道、腸道標(biāo)本分離病毒的病原學(xué)意義需要考慮這些病毒是否有無(wú)癥狀攜帶者和長(zhǎng)期排毒者。否則出現(xiàn)溶血為陰性結(jié)果。2．中和試驗(yàn)可用來(lái)檢查患病后或人工免疫后，機(jī)體血清中抗體增長(zhǎng)情況，以便于輔助診斷和免疫效果評(píng)價(jià)；也可用已知抗體鑒定病毒。早期診斷主要是應(yīng)用具有高度特異敏感的快速診斷方法去檢測(cè)病毒的特異成分（包括完整的病毒顆粒、病毒抗原和核酸成分）。通過(guò)電鏡檢查從早期感染材料中直接檢出病毒顆粒。一、流行性感冒病毒1．生物學(xué)性狀：病毒顆粒呈多形性，核酸為分節(jié)段的單負(fù)股RNA，易發(fā)生基因重組，從而引起變異；包膜表面有血凝素和神經(jīng)氨酸酶兩種刺突，其抗原性易發(fā)生變異；據(jù)NP和M蛋白的抗原性不同，可將流感病毒分為甲、乙、丙型，根據(jù)NA和HA抗原性不同又分為若干亞型；抗原變異幅度取決于HA和NA的變異大小，并直接影響流感流行的規(guī)模，表現(xiàn)為抗原漂移或抗原轉(zhuǎn)變；該病毒適于在雞胚中增殖，組織培養(yǎng)可采用犬腎細(xì)胞系（MDCK）或人胚腎或猴腎細(xì)胞，動(dòng)物接種以雪貂最敏感。3．微生物學(xué)檢查采集發(fā)病早期的上呼吸道標(biāo)本，接種于原代人胚腎、原代猴腎細(xì)胞，在CPE出現(xiàn)以前可用豚鼠紅細(xì)胞做吸附試驗(yàn)，用紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。三、腺病毒（一）生物學(xué)特性：球形，二十面立體對(duì)稱，無(wú)包膜，12個(gè)五鄰體位于20面體的頂角上；不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織、細(xì)胞中增殖，人胚腎細(xì)胞易感。第五節(jié) 腸道病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 常見腸道病毒的生物學(xué)特性及其檢驗(yàn)方法。因此，通過(guò)組織細(xì)胞分離病毒仍然是許多實(shí)驗(yàn)室常用的診斷方法。HCV為黃病毒科，有包膜，含單正股RNA，最敏感的動(dòng)物是黑猩猩。HEV感染的傳播途徑和臨床表現(xiàn)與HAV感染相似。[基本要點(diǎn)]一、流行性乙型腦炎病毒：1．主要生物學(xué)性狀：病毒結(jié)構(gòu)蛋白有3種：M、C和E，抗原性穩(wěn)定。三、登革病毒傳播媒介為伊蚊，在人蚊之間傳播，輕型病人表現(xiàn)為普通登革熱，再次感染的重型病人表現(xiàn)為登革出血熱。微生物學(xué)診斷主要是病毒分離和用ELISA、IFA檢測(cè)抗體，中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)常用于流行病學(xué)調(diào)查。（2）病毒培養(yǎng)是最敏感的方法，可用McAb或核酸雜交進(jìn)行鑒定、分型。2．初次感染多見于兒童，表現(xiàn)為水痘，VZV常潛伏于脊髓后根神經(jīng)節(jié)或顱神經(jīng)感覺(jué)神經(jīng)節(jié)中。3．微生物學(xué)檢查（1）采用ACIF法和核酸雜交直接檢查淋巴結(jié)、脾或腫瘤組織中的病毒核酸或抗原。2．HIV選擇性地侵犯表達(dá)CD4的細(xì)胞，從而引起CD4細(xì)胞缺損，細(xì)胞免役功能受損，引起多種疾病狀態(tài)。3．病毒分離和抗體檢測(cè)方法與HIV感染檢測(cè)方法相似。4．微生物學(xué)檢查（1）取發(fā)病動(dòng)物海馬回部組織做切片或涂片染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法檢查病毒抗原；取患者頸后發(fā)際皮膚做活檢系列切片，檢查病毒抗原。掌握致病性真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，致病性及微生物學(xué)檢查，了解真菌毒素的致病作用，真菌性變態(tài)反應(yīng)。黃曲霉素及其致癌作用。微生物學(xué)檢查、白色念珠菌：形態(tài)培養(yǎng)特性。2．只感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞，可引起不同的疣。3．常選用ELISA雙抗夾心法診斷，當(dāng)糞便中的病毒顆粒較多時(shí)可用膠乳凝集實(shí)驗(yàn)或電鏡觀察。（2）病毒分離采用非感染的PBMC進(jìn)行培養(yǎng)，2周后可檢出上清夜中的逆轉(zhuǎn)錄酶活性或p24抗原。第九節(jié) 其他病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 有關(guān)病毒的生物學(xué)特性及其微生物學(xué)檢查方法。（3）EIA為主要的血清學(xué)診斷方法。3．微生物學(xué)檢查（1）采用組織病理學(xué)、脫落細(xì)胞學(xué)、免疫熒光技術(shù)、電鏡觀察、核酸雜交和PCR等直接檢查病毒或特異性抗原。HSV有兩種血清型，核酸同源性達(dá)40% 。2．臨床意義可引起腎綜合征出血熱（流行性出血熱），往往與鼠類的分布和活動(dòng)有關(guān)，也可經(jīng)螨傳播。但臨床標(biāo)本的分離率極低。HDV檢測(cè)標(biāo)本為肝活檢組織和血清，用免疫熒光或酶標(biāo)法檢測(cè)其中的HDAg，用核酸雜交和RTPCR法檢測(cè)HDV RNA，用EIA或RIA檢測(cè)血清中的抗HDV。HBV通過(guò)血液與血液制品、密切接觸、母嬰傳播，其臨床表現(xiàn)呈多樣性，可表現(xiàn)為無(wú)癥狀攜帶者、急性肝炎和遷延型慢性肝炎。[基本概念] 肝炎病毒：是引起病毒性肝炎的病原體。往往一種血清型腸道病毒可引起多種疾病，一種疾病也可與多種血清型有關(guān)。3．病毒分離與鑒定：采用人源傳代和原代細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，典型CPE現(xiàn)象為細(xì)胞腫脹、變圓、聚集、拉絲呈葡萄狀，受染細(xì)胞核中形成嗜堿性包涵體。3．微生物學(xué)檢查：（1）采集早期的呼吸道標(biāo)本。（2）分離培養(yǎng)與鑒定：可采用雞胚接種、細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物接種進(jìn)行分離，用人“O”型血或豚鼠紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗(yàn)，并用血凝抑制試驗(yàn)鑒定型和亞型。有些出現(xiàn)上呼吸道或下呼吸道感染癥狀，另一些由呼吸道感染，但主要癥狀是呼吸道以外的感染癥狀。2．胞外游離病毒的檢測(cè)：可用ELISA、dotELISA、酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡法（enzymelinked immunoelectrotransfer biot, EITB）、固相放射免疫試驗(yàn)等。5．酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的基本原理同免疫熒光檢測(cè)，只是標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。4．間接免疫熒光檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)體系包括病毒抗原 + 抗體 + 熒光素標(biāo)記的抗抗體，在熒光顯微鏡下觀察熒光的強(qiáng)弱。第二節(jié) 病毒血清學(xué)診斷[授課學(xué)時(shí)] 2學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 重點(diǎn)學(xué)習(xí)各種血清學(xué)診斷方法的原理和檢測(cè)意義。6．動(dòng)物接種分離病毒需要選擇敏感動(dòng)物及合適的接種部位。6．細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）：病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，由病毒引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)。7．注意學(xué)習(xí)亞病毒的概念、生物學(xué)特性和致病特點(diǎn)。[基本要點(diǎn)]注意學(xué)習(xí)以下內(nèi)容1．病毒的測(cè)量單位：納米2．病毒的形態(tài)：球形或近球形、桿狀、絲狀、彈形、磚形、蝌蚪形。3．復(fù)制周期：動(dòng)物病毒的復(fù)制，一般可分為吸附、穿入、脫殼、生物合成、組裝與成熟、釋放等6個(gè)階段，稱為復(fù)制周期。主要病原性立克次氏：普氏及莫氏立克次氏體、恙蟲病立克次氏體、Q熱柯克斯體的傳播方式與致病特點(diǎn)、微生物學(xué)檢查。[重點(diǎn)] 熟悉螺旋體的主要特點(diǎn)及分類。 放線菌屬（補(bǔ)充內(nèi)容）[教學(xué)學(xué)時(shí)] [重點(diǎn)]熟悉放線菌的主要特性，致病性放線菌的形態(tài)特點(diǎn)及致病性。耶爾森氏菌屬：鼠疫桿菌的生物學(xué)性狀、致病性、微生物學(xué)檢查與防治。[要點(diǎn)與基本要求]白喉?xiàng)U菌：形態(tài)染色、培養(yǎng)、抵抗力、致病性、免疫性、微生物學(xué)檢查、特異性防治。掌握無(wú)芽胞厭氧菌感染的機(jī)體條件及所致疾病。[基本內(nèi)容]一、 霍亂菌屬二、 非O1群霍亂弧菌三、 O139型霍亂弧菌第十四章 彎曲菌屬和螺桿菌屬[教學(xué)學(xué)時(shí)] 2學(xué)時(shí)。 志賀氏菌屬：生物學(xué)性狀|致病性|傷寒的病程和免疫性、微生物學(xué)檢查（沙門氏菌的分離與鑒定、肥達(dá)氏反應(yīng)），防治原則，特異性預(yù)防。 柰瑟氏菌屬 腦膜炎球菌：形態(tài)染色、培養(yǎng)、抗原構(gòu)造、抵抗力、致病物質(zhì)及所致疾病、免疫性、微生物學(xué)檢查、防治原則。致病性：致病物質(zhì)（凝固酶、溶血素、殺白細(xì)胞素、表皮溶解