【正文】 ? 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 鉀溶液（用 1mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié) pH值至177。 ? 紅霉素腸溶膠囊 表 2022年版藥典大環(huán)內(nèi)酯類品種增修訂項目 項目 修訂 增訂 刪去 結(jié)構(gòu)式 1 含量限度 5 性狀 3 鑒別 3（ HPLC 1項 和 IR 2 項） 23(HPLC 11項，顏色反應(yīng)和 TLC各 6項 ) 3（ IR） 釋放度 /溶出度 13 1 組分與有關(guān)物質(zhì) 26 3 殘留溶劑 1 干燥失重 2 可見異物和不溶性微粒 1 含量 37 其中濁度法增訂 21項 ? 本類抗生素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要點 ? 鑒別 ? 標(biāo)準(zhǔn)中凡用 HPLC法測定組分含量以及有關(guān)物質(zhì)的品種均采用 HPLC法作為鑒別，并增加部分品種的 TLC法鑒別，大部分品種 HPLC法和 TLC法并列，可任選一項； ? 原料藥也有用 IR作為鑒別，如羅紅霉素； ? 有紫外吸收特性的品種也可用 UV法作為鑒別，如麥白霉素、交沙霉素； ? 部分品種采用顯色反應(yīng)。紅霉素Ａ峰與紅霉素烯醇醚峰的分離度應(yīng)大于 ，紅霉素 A的拖尾因子應(yīng)小于 。 4. 檢測波長 210nm ，并明確前相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時間為 ）和后相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時間為 ）位置 琥乙紅霉素 方法（ TLC法） ? 溶出度 ? 除乳糖酸紅霉素是供注射用外，其他均為口服制劑（片、膠囊、干混懸劑、顆粒）。 ? 2022版藥典采用管碟法，本版藥典增加濁度法，兩法并列供選擇，在附錄中明確仲裁方法為 管碟法； ? 阿奇霉素系列由微生物法修訂為 HPLC法，系統(tǒng)適用性試驗規(guī)定“標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致”； ? 羅紅霉素系列完善系統(tǒng)適用性實驗，增加主峰與紅霉素的分離度，并明確與前相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時間為 ）和后相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時間為 ）位置； ? 依托紅霉素為紅霉素酯類衍生物，故在微生物法測定含量時，必須使藥物完全水解成紅霉素，有抗菌活性后，方能測定抑菌能力， ? 本版藥典進(jìn)行了充分研究后將水解條件由“ 37℃ 水浴中放置 6小時”修訂為“ 60℃ 水浴中放置 4小時”，縮短實驗時間。 ? 例 2. 阿米卡星 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ? （ 3） IR ? （ 4）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。 ? 滲透壓摩爾濃度 ? 2022年版藥典首先在抗生素類滴眼液 硫酸卡那霉素滴眼液標(biāo)準(zhǔn)中列入滲透壓檢查， ? 本版藥典將其擴大為 4個滴眼液， ? 兩種表示方法并列 : ? 妥布霉素滴眼液、慶大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液（均為滲透壓摩爾濃度為 260320mOsmol/kg） ? 硫酸新霉素滴眼液（滲透壓摩爾濃度比為）。 圖 阿米卡星混合溶液的分離色譜圖 圖 BP2022阿米卡星項下系統(tǒng)適用性色譜 ? 硫酸鹽 ? 除部分品種仍采用原滴定方法，本版藥典首次采用 HPLCELSD方法對其進(jìn)行測定。分子中存在酚羥基和烯醇型羥基，顯弱酸性；同時含有二甲胺基，顯弱堿性，故遇酸及堿，均能生成相應(yīng)的鹽，臨床上大多采用鹽酸鹽。 ? (3) 四環(huán)類抗生素能與許多金屬離子形成有色絡(luò)合物。 ? 限度的確定 ? 限度是參考 。 ? 該色譜條件下首次檢出了土霉素。 ? 檢查 ? ? 有關(guān)物質(zhì)測定方法仍以 HPLC為主，但測定條件隨含量測定方法修改有所改變。 ? (2) 堿性條件下 : ? 四環(huán)類抗生素在堿性溶液中放置一段時間，C環(huán)打開，生成無活性的具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的異四環(huán)類抗生素。 ? （ 3）硫酸新霉素 硫酸核糖霉素及其制劑共 5個標(biāo)準(zhǔn)的含量測定采用微生物檢定法管碟法 . ? （ 4）鹽酸大觀霉素及其制劑共 2個標(biāo)準(zhǔn)的含量測定采用微生物檢定法濁度法 ? （ 5）其他 21個標(biāo)準(zhǔn)的含量測定均采用微生物檢定法管碟法和微生物檢定法濁度法兩法并列，可任選一方法。 ? 盡管 ELSD檢測器在靈敏度上不如 UV檢測器，但較之 TLC其靈敏度要高得多。（供注射用） ? 無菌 取本品，加 ％無菌氯化鈉溶液制成每1ml中含阿米卡星 8mg的供試液，經(jīng)薄膜過濾法處理，用 －蛋白胨緩沖液分次沖洗（每膜不少于 500ml），以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌，依法檢查（附錄 XI H），應(yīng)符合規(guī)定。 ? 例 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ? （ 3）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。見表 。 表 有關(guān)物質(zhì)測定 (1) 品種 方法（ HPLC） 丙酸交沙霉素 231nm 交沙霉素 231nm 克拉霉素 克拉霉素片 克拉霉素膠囊 克拉霉素顆粒 2．檢測波長 210nm 阿奇霉素 阿奇霉素干混懸劑 阿奇霉素片 阿奇霉素分散片 阿奇霉素膠囊 阿奇霉素顆粒 TLC法修訂為 HPLC法，無該項檢查的已增訂 （阿奇霉素 Gx為 A偕亞胺醚為 ）與不加校正因子（阿奇霉素 B和其他單個雜質(zhì)）的自身對照 210nm ，不同限度 紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 乳糖酸紅霉素 注射用乳糖酸紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 表 有關(guān)物質(zhì)測定 (2) 品種 方法（ HPLC） 硬脂酸紅霉素 硬脂酸紅霉素片 硬脂酸紅霉素膠囊 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 依托紅霉素 檢測波長 190nm 麥白霉素 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 25%） 檢測波長 232nm 麥白霉素片 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 麥白霉素膠囊 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 羅紅霉素 羅紅霉素片 羅紅霉素分散片 羅紅霉素膠囊 ，并對該峰定位。 紅霉素 紅霉素腸溶片 紅霉素腸溶膠囊 紅霉素 A 紅霉素 B 紅霉素 C 修訂 HPLC法 紅霉素 A：對照品外標(biāo)法計算； 紅霉素 B：加校正因子自身對照計算； 紅霉素 C：自身對照法計算。它們均為多組分抗生素。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。 ? 如：拉氧頭孢鈉 ? 【 含量測定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測定。m以上的微粒不得過 600粒； ? 規(guī)格 （包括 ）的制劑按每 1個供試品容器中含 10181。方法也收載在 2022年版藥典二部（附錄 Ⅷ L ） . ? 如 :頭孢地嗪鈉、 ? 頭孢呋辛鈉、 ? 頭孢孟多酯鈉、 ? 氨芐西林鈉等。 ? 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每 1ml中約含 200μ g的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。 ％ 頭孢唑林鈉 CZSS051142 （奧奇特） 均值： % (n=3) 均值： % (n=3) 177。 品種 2022年版藥典方法 F值 改進(jìn)后的方法 F值 相對偏差 阿莫西林 均值： F=*103 (n=36) 均值： F=*103 (n=31) 177。 Kv=0也降低。 ? 其中 40個品種以葡聚糖凝膠 G10(40～120μ m)為填充劑的玻璃柱（ ～ 30cm）色譜柱的凝膠色譜法測定， ? 2個品種以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量為 1000－ 5000）為填充劑為色譜柱的 HPLC法測定。 ? 用雜質(zhì)對照品外標(biāo)法計算已知雜質(zhì)的含量 ,用加校正因子與不加校正因子的自身對照法計算已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的含量和雜質(zhì)的總量。 ? 其中有阿莫西林、阿莫西林鈉、青霉素鈉(鉀 )、青霉素 V鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、氨曲南等原料及其制劑共 27個品種采用梯度洗脫方法。 ? ? 檢查溶液的澄清度與顏色是控制 β 內(nèi)酰胺類注射用的原料藥與制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。 ?三、抗生素品種分類介紹 下面將重點介紹 β 內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、酰胺醇類、利福霉素類、喹諾酮類、抗腫瘤類、肽類的抗生素在新版藥典中的增修訂的情況。在原來 21個品種基礎(chǔ)上增加至 42個品種 . ? 2022年版藥典 β 內(nèi)酰胺類抗生素品種進(jìn)行高分子雜質(zhì)檢查時，由于該方法的分析周期較長，本版藥典對測定方法進(jìn)一步完善，采用直徑較細(xì)內(nèi)徑為 1cm,長為 30cm的玻璃柱作為色譜柱。 ? 8. 紅霉素類經(jīng)對幾種 HPLC方法比較后，采用同一 HPLC方法檢查紅霉素與其衍生物以及制劑中紅霉素 A、 B、 C及有關(guān)物質(zhì)。 ? 5. 喹諾酮類抗生素的有關(guān)物質(zhì)檢查， EP、 BP、USP均采用 TLC、 HPLC兩種方法進(jìn)行控制。 ? ? 該混合對照品用于系統(tǒng)適用性試驗，測得的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。 妥布霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)測定等。 中國藥典 2022年版抗生素品種 增修訂概況 一 、概況 : 2022年版藥典抗生素品種收載情況，見表： 品種 原料 新增 制劑 新增 總數(shù) 新增 β 內(nèi)酰胺類 頭孢菌素類 27 11 48 19 75 30 青霉素類與酶抑制劑 20 3 28 6 48 9 碳青酶烯類及單環(huán) β 內(nèi)酰胺類 2 1 2 1 4 2 大環(huán)內(nèi)酯類 13 2 35 4 48 6 氨基糖苷類 14 25 1 39 1 四環(huán)素類 6 12 18 利福霉素類 1 7 8 林可霉素類 2 4 6 酰胺醇類 4 11 15 多肽類與肽類 4 2 4 2 8 4 抗真菌類 3 3 6 抗腫瘤抗生素類 6 2 6 1 12 3 磷霉素類 3 5 8 其他抗生素 3 4 7 喹諾酮類 12 3 34 5 46 8 總計 120 24 228 39 348 63 ?二、 2022年版藥典抗生素類藥標(biāo)準(zhǔn)增修訂要點 : ? 鑒別項下盡可能應(yīng)用專屬性強的鑒別反應(yīng) , 如：光譜法： IR 色譜法：HPLC TLC等，與鈉、鉀、鹽酸鹽、硫酸鹽的鑒別反應(yīng) . 標(biāo)準(zhǔn)中鑒別反應(yīng) HPLC與TLC二法并列。 硫酸卡那霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)卡 B以及含量測定， 硫酸慶大霉素及制劑的慶大霉素 C組分及有關(guān)物質(zhì)測定， 硫酸小諾霉素及其制劑的組分測定。 ? 對雜質(zhì)數(shù)多或多組分的、分離難度大的品種，中檢所提供混合雜質(zhì)對照品，多組分對照品及標(biāo)準(zhǔn)圖譜 . ? 如阿莫西林、阿莫西林克拉維酸、氨芐西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。 ? 有很多品種采用 HPLC梯度洗脫法測定有關(guān)物質(zhì)，如：頭孢地尼，頭孢唑林鈉，拉氧頭孢鈉 , 阿莫西林及其復(fù)方制劑，氨芐西林等。 ? 7. 氨基糖苷類用 HPLCELSD替代 TLC檢查有關(guān)物質(zhì)與組分，提高檢測靈敏度； ? ? 同時可用該方法測定硫酸鹽（ SO4）的含量。 ? 11. 為保證臨床使用的安全有效，供注射用 β 內(nèi)酰胺抗生素，除檢查有關(guān)物質(zhì)外，增加高分子聚合物的檢查。 ? ，其化學(xué)命名均在標(biāo)準(zhǔn)最后列出，便于與國外藥典的雜質(zhì)比較。少數(shù)有用 UV法作為鑒別。 ? ? 有關(guān)物質(zhì)檢查均采用 HPLC法， ? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測。 ? 有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果計算可分為三種方法： ? (1). 不加校正因子的自身對照法； ? (2). 加校正因子的自身對照法； ? (3). 已知雜質(zhì)對照品外標(biāo)法 。 ? 2022年版藥典已有２１個品種收載高分子聚合物檢查，本版藥典增加到 42 個品種。以 sephadexG10為填充劑，柱內(nèi)徑的縮小，柱床體積隨之也變小。即兩種不同規(guī)格柱并列，可根據(jù)實際條件選擇，測定結(jié)果是一致的。 ％ 頭孢唑林鈉 比對樣品 （上海新先 鋒