【正文】 LC 11項，顏色反應(yīng)和 TLC各 6項 ) 3（ IR） 釋放度 /溶出度 13 1 組分與有關(guān)物質(zhì) 26 3 殘留溶劑 1 干燥失重 2 可見異物和不溶性微粒 1 含量 37 其中濁度法增訂 21項 ? 本類抗生素質(zhì)量標準要點 ? 鑒別 ? 標準中凡用 HPLC法測定組分含量以及有關(guān)物質(zhì)的品種均采用 HPLC法作為鑒別，并增加部分品種的 TLC法鑒別，大部分品種 HPLC法和 TLC法并列，可任選一項； ? 原料藥也有用 IR作為鑒別，如羅紅霉素； ? 有紫外吸收特性的品種也可用 UV法作為鑒別，如麥白霉素、交沙霉素； ? 部分品種采用顯色反應(yīng)。它們均為多組分抗生素。 ? 標準中涉及的已知雜質(zhì)，在標準最后列出其化學(xué)命名，便于與國外藥典標準中的雜質(zhì)比較。 ? 測定法 取本品約 50mg，精密稱定，置 50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 20μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氨曲南對照品適量，同法測定。 ? 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 鉀溶液（用 1mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié) pH值至177。按外標法以峰面積計算，即得。 取頭孢地尼對照品約 20mg，置 100ml量瓶中，加上述，用流動相稀釋至刻度，搖勻，在水浴中加熱不少于 30分鐘，放冷，得每 1ml中約含 合溶液（其中相對主峰保留時間 的量各約為 2%）， ? 取 20μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，頭孢地尼峰保留時間約為 8分鐘， E異構(gòu)體峰保留時間約為頭孢地尼峰保留時間的 ，理論板數(shù)按頭孢地尼峰計算不低于 2022，頭孢地尼峰與其相對保留時間 度均應(yīng)不小于 。 ? 如：頭孢地尼 ? 【 含量測定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測定。取拉氧頭孢對照品適量，加水溶解并稀釋制成每 1ml中約含 ， 取上述溶液適量，在 80℃ 水浴中加熱 30分鐘，冷卻，取 10μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，拉氧頭孢 R異構(gòu)體、拉氧頭孢 S異構(gòu)體依次流出；拉氧頭孢 R異構(gòu)體和拉氧頭孢 S異構(gòu)體的分離度應(yīng)不小于 ，兩主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)符合要求 。 ? 如：拉氧頭孢鈉 ? 【 含量測定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測定。利用該類藥物遇光照或加熱能產(chǎn)生反式異構(gòu)體或 E異構(gòu)體等有關(guān)物質(zhì)。 ? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測。m以上的微粒不得過 600粒。m以上的微粒不得過 600粒； ? 規(guī)格 （包括 ）的制劑按每 1個供試品容器中含 10181?？紤]臨床使用的安全性，在標準中規(guī)定： ? 規(guī)格 ，每 1g樣品中，含 10181。 ? 由于不溶性微粒光阻法測定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)的樣品溶液成正比關(guān)系，因此在標準中規(guī)定不溶性微粒檢查供試品溶液濃度。 ? 如 :注射用頭孢他啶，因含有 10%的碳酸鈉對水分測定有干擾，改為 60℃ 真空減壓干燥， ? 頭孢地尼膠囊也改為 60℃ 真空減壓干燥。方法也收載在 2022年版藥典二部（附錄 Ⅷ L ） . ? 如 :頭孢地嗪鈉、 ? 頭孢呋辛鈉、 ? 頭孢孟多酯鈉、 ? 氨芐西林鈉等。 ? 測定法 首先取甲烷氣體頂空進樣，記錄甲烷的保留時間作為色譜系統(tǒng)的死時間（ t0）再取供試品溶液頂空進樣，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有色譜峰，按下式計算各色譜峰的保留時間（ tR）相對于正丙醇保留時間（ tR（正丙醇））的相對調(diào)整保留時間（ RART）； 0)(0 tt ttRARTRR －正丙醇??0)(0ttttR A R TRR－正丙醇??? 將得到的 RART值與下表的 RART值比較，確定供試品中的殘留溶劑種類；再制備相應(yīng)的對照品溶液，取對照品溶液頂空進樣，記錄色譜圖，按內(nèi)標法以峰面積比值計算，甲基異丁基酮不得過 %；、其他均應(yīng)符合規(guī)定。分別精密稱取各溶劑適量，用內(nèi)標溶液定量稀釋制成規(guī)定濃度的溶液，作為混合對照品溶液，混合對照品溶液中各溶劑的濃度分別為每 1ml中含甲醇 600 ug、丙酮 1mg、異丙醇 1mg、乙腈 82ug、二氯甲烷 120ug、丁酮 1mg、乙酸乙酯 1mg，四氫呋喃 150 ug、四氯化碳 1 ug、環(huán)己烷 760 ug、苯 1 ug、 1,2二氯乙烷 1 ug、乙酸異丙酯 1mg、二氧六環(huán) 76 ug、甲基異丁基酮1mg、吡啶 40 ug、甲苯 178 ug。 ? 供試品溶液的制備 取本品約 ，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入內(nèi)標溶液 ，密封瓶口，作為供試品溶液。 ? 內(nèi)標溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每 1ml中約含 200μ g的溶液，作為內(nèi)標溶液。 ? 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以 6%氰丙基苯基 94%二甲基聚硅氧烷為固定液（或極性相近）的毛細管柱為色譜柱，柱溫 40℃ ，維持 22分鐘，以每分鐘 100℃ 速率升溫至 120℃ ，維持 10分鐘。 ? 由于生產(chǎn)工藝的不同，各廠使用的有機溶媒也不同，同一品種中可能有幾十種的溶媒，為方便操作、經(jīng)試驗在標準中規(guī)定各溶劑的相對調(diào)整保留時間（ RART）， ? 檢查時可先做供試品，從供試品中檢出的溶媒的 RART與規(guī)定的 RART比較，確定為何種溶媒時，再進行對照品測定，可減少工作量，大大降低檢驗成本，提高工作效率。 ? 標準中增加有機溶媒檢查的品種較多 ? 本檢查法大多采用涂層毛細管柱為色譜柱，等溫，程序升溫，頂空進樣， ? 內(nèi)標法，外標法計算結(jié)果。 ％ 頭孢唑林鈉 CZSS051142 （奧奇特） 均值： % (n=3) 均值： % (n=3) 177。 ％ 頭孢唑林鈉 比對樣品 （蘇州制藥） 均值： % (n=2) 均值： % (n=6) 177。 % * F值為對照品溶液濃度 (μ g/ml)與峰面積的比值 表 F值的比較 表 高分子聚合物測定結(jié)果的比較 品種 批號 2022年版藥典方法 高聚物含量（ %） 改進后的方法 高聚物含量（ %） 相對偏差 阿莫西林囊 0507501 （聯(lián)邦制藥） 均值： % (n=2) 均值： % (n=4) 177。 % 頭孢拉定 均值 F= 103 (n=5) 均值： F= 103 (n=5) 177。 品種 2022年版藥典方法 F值 改進后的方法 F值 相對偏差 阿莫西林 均值： F=*103 (n=36) 均值： F=*103 (n=31) 177。 ? 因此本版藥典凝膠色譜高分子聚合物項下僅將色譜柱修訂為內(nèi)徑 ～ ,長為 30～40cm的玻璃柱。 ? 根據(jù)上面公式，分離度隨著聚合物峰高的增大而增大，故加入藍色葡聚糖 2022的量應(yīng)該有一定的要求，在研究方法時，根據(jù)品種項下規(guī)定的限度及藍色葡聚糖 2022在該系統(tǒng)中的響應(yīng)值 ,－般加入的量為聚合物規(guī)定限度響應(yīng)值的 12倍即可。（見圖 ，圖 ） ? 在系統(tǒng)適用性試驗中規(guī)定分離度的要求，在高分子雜質(zhì)檢查時，某些藥物分子單體與高聚物不能達到基線分離時，其分離度計算公式為： ? R=聚合體的峰高 /單體與聚合體之間的谷高 ? （分離度 R應(yīng)大于 ）。 Kv=0也降低。 ? 擬采用直徑較細，內(nèi)徑為 1cm,長為30cm的玻璃柱作為色譜柱。 ? 作為常規(guī)檢驗方法有必要進行改進，考慮到原藥典收載的方法在原理，系統(tǒng)適用性試驗，以及方法驗證專屬性、重現(xiàn)性、準確性等方面均符合要求，而僅僅是分析周期過長 . ? 因此在研究建立新的方法時，我們?nèi)圆捎媚z色譜的分離模式，并采用原方法中的自身對照外標法，進行高分子聚合物雜質(zhì)的測定。 ? 2022年版藥典擴大到 11個品種的 21個藥品標準中均有高分子雜質(zhì)檢查。 ? 其中 40個品種以葡聚糖凝膠 G10(40～120μ m)為填充劑的玻璃柱（ ～ 30cm）色譜柱的凝膠色譜法測定， ? 2個品種以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量為 1000－ 5000）為填充劑為色譜柱的 HPLC法測定。 ? 高分子聚合物 ? 高分子聚合物是 β 內(nèi)酰胺類抗生素臨床過敏反應(yīng)的一個主要因素，故在注射用原料及其制劑標準中增加檢查高分子聚合物，控制一定的限度，對臨床用藥安全有效具有重大的意義。 ? 如：頭孢拉定中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? 雙氫苯苷氨酸（ 220nm） ? 頭孢氨芐 ? 頭孢氨芐中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? α 苯苷氨酸 ? 頭孢羥氨芐中已知雜質(zhì)： ? 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA） ? α 對羥基苯苷氨酸 ? 頭孢哌酮鈉中已知雜質(zhì)： ? 雜質(zhì) A（原稱為頭孢哌酮降介物 β ） ? 如：頭孢羥氨芐 : ? 供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，含 α 對羥基苯甘氨酸和 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸按外標法以峰面積計算， 均不得過 %；其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面（ %），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的 3倍（ %） ,供試品溶液色譜圖中任何小于對照溶液主峰面積 . ? 如：頭孢哌酮鈉 ? 供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，含 雜質(zhì) A按外標法以峰面積計算， 不得過 %，其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的 2倍（ 2％），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的 3倍（ %） ,供試品溶液色譜圖中任何小于對照溶液主峰面積 可忽略不計。 ? 如：頭孢他啶中吡啶與頭孢拉定中頭孢氨芐均采用雜質(zhì)對照品外標法。 ? 用雜質(zhì)對照品外標法計算已知雜質(zhì)的含量 ,用加校正因子與不加校正因子的自身對照法計算已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的含量和雜質(zhì)的總量。以免基線噪音影響結(jié)果正確性。 ? 如：頭孢克洛規(guī)定 : ? 頭孢克洛峰的保留時間約為 23分鐘，頭孢克洛峰與頭孢克洛 δ 3異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)不小于 ，頭孢克洛峰的拖尾因子應(yīng)小于 。 ? 如：頭孢地尼規(guī)定 : ? 主成分頭孢地尼峰保留時間約為 22分鐘 ， E異構(gòu)體峰保留時間約為頭孢地尼峰保留時間的 ，理論板數(shù)按頭孢地尼峰計算不低于 7000， 頭孢地尼峰與其相對保留時間 。 ? 其中有阿莫西林、阿莫西林鈉、青霉素鈉(鉀 )、青霉素 V鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、氨曲南等原料及其制劑共 27個品種采用梯度洗脫方法。 表 頭孢菌素的有關(guān)物質(zhì)檢查 總數(shù) 有關(guān)物質(zhì) HPLC梯度洗脫 原料 27 27 12 制劑 42 36 17 ? 青霉素類、酶抑制劑、碳青霉烯類與單環(huán) β 內(nèi)酰胺類原料 22個品種均規(guī)定檢查有關(guān)物質(zhì)， ? 制劑 25個品種除 5個品種片，顆粒與干混懸劑等由于輔料干擾未規(guī)定檢查有關(guān)物質(zhì)外 , 其他品種均有有關(guān)物質(zhì)檢查。 ? 頭孢菌素品種有關(guān)物質(zhì)檢查均采用 HPLC法，除頭孢西丁鈉以苯基鍵合硅膠為填充劑外；其他均以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測。 ? 本版藥典有多個品種采用紫外 可見分光光度法在特定的波長處測定吸光度，控制溶液的顏色，如：頭孢尼西鈉、 頭孢噻肟鈉。 ? ? 檢查溶液的澄清度與顏色是控制 β 內(nèi)酰胺類注射用的原料藥與制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要指標。 ? 固體口服制劑一般用 HPLC或 HPLC與 TLC作為鑒別，二法并列。 ? 鑒別 ? 原料藥與注射用粉針的鑒別均采用色譜法HPLC，光譜法 IR以及鉀、鈉離子火焰反應(yīng)，也有多個品種采用 HPLC與 TLC二法并列。 ： 表 頭孢菌素類品種收載情況 收載情況 原料 制劑 總計 2022年版藥典收載品種 27 48 75 新增品種 11 19 30 ? 頭孢菌素類新增品種： ? 原料：