食品檢驗(yàn)工中級培訓(xùn)資料(存儲版)
【正文】 革蘭染色鏡檢 第三步 乳糖復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 報(bào)告結(jié)果 ?樣品稀釋程序 ? （ 1）用 1mL滅菌吸管吸取 1： 10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有 9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成 1：100的稀釋液。溴甲酚紫還有抑制其他細(xì)菌如芽胞菌生長的作用。 ? 3．復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) ? 以上大腸菌群陽性菌落，經(jīng)涂片染色為革蘭氏陰性無芽胞桿菌者，通過此試驗(yàn)再進(jìn)一步證實(shí)。 2. 若有兩個(gè)稀釋度其生長之菌落數(shù)均在 30300，則應(yīng)視二者之比如何來決定，若其比值小于 2，應(yīng)報(bào)告平均數(shù)。 1℃ 培養(yǎng) 48177。 根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查 MPN表，報(bào)告每100ml（ g）大腸菌群的MPN值。 較清潔樣品的三步法圖示 100mL 50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 100mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 水樣 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 三步法圖示 取產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管中培養(yǎng)液在伊紅美蘭平板上進(jìn)行劃線 取有核心和帶金屬光澤的深紫色菌落進(jìn)行革蘭氏染色 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 鏡檢（ 革蘭氏陰性菌 ） 37℃ 培養(yǎng) 48h 證實(shí)產(chǎn)氣（陽性）結(jié)果與否 37℃ 培養(yǎng) 24h 37℃ 培養(yǎng) 24h 典型菌落 產(chǎn)氣 報(bào)告為大腸菌群陽性 不產(chǎn)氣 報(bào)告為大腸菌群陰性 乳糖起選擇作用；溴甲酚紫起產(chǎn)酸指示，還有抑制其他細(xì)菌作用 ?1．水樣的采取 ?自來水：先將自來水龍頭用火焰燒灼 3min滅菌，再開放水龍頭使水流 5 min后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。 （ c）淡紫紅色、中心顏色較深。另取 10ml和 100ml原水樣，分別注入裝有 5 ml和 50ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵液的試管（瓶）中。 將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于煌綠乳糖膽鹽（ BGLB）肉湯中， 36177。 ? 嚴(yán)格遵守上下班制度，不遲到，不早退，禁止代打卡。 ? 叉車必須在規(guī)定的叉車通道內(nèi)行駛。并記錄于 [車間管制清洗、消毒記錄表 ]中。 ? 各生產(chǎn)車間門禁管理 : ? 、離崗。 ? 制訂應(yīng)變計(jì)劃，在計(jì)劃執(zhí)行出現(xiàn)異常時(shí)及時(shí)應(yīng)對。 ? 腦力激蕩，具有創(chuàng)造性 ? 經(jīng)濟(jì)性、時(shí)效性。 ? ，用餐前環(huán)境準(zhǔn)備餐后清掃。消毒池視水質(zhì)清潔狀況不定時(shí)更換和加藥。 ? 原物料、包材入庫必須憑送貨單到門衛(wèi)處辦理登記，由 IQC檢驗(yàn)合格后按要求卸貨。 ? 3 定義 ? (無 ) ? 4 標(biāo)準(zhǔn)作法 ? 進(jìn)入廠區(qū)人員： ? 廠區(qū)內(nèi)禁止抽煙，公司員工只能在規(guī)定的時(shí)間、規(guī)定的地點(diǎn)抽煙。 1℃ 培養(yǎng)48177。 則： MPN=? ? 3．池水、河水或湖水等的檢查 （ 1）將水樣稀釋成 101與 102。 （ a）深紫黑色、有金屬光澤。 培養(yǎng)： 選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管，每管加樣 1ml。 1℃ 培養(yǎng)24177。 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告 : 菌落數(shù) 報(bào)告結(jié)果 30~300 之間 平均菌落數(shù) X 稀釋倍數(shù) 求比值 2 取較小稀釋倍數(shù) 在 30~300之間 2 取平均數(shù) 300 最高稀釋度平均菌落數(shù) X 最高稀釋倍數(shù) 30 最低稀釋度平均菌落數(shù) X 最低稀釋倍數(shù) 300 30 無法計(jì)數(shù) 報(bào)告無法計(jì)數(shù) 取最接近的 X 稀釋倍數(shù) (若有兩個(gè)稀釋度 ) 四、操作步驟 ? （二）大腸菌群的測定 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 分離培養(yǎng) 證實(shí)試驗(yàn) 樣品稀釋后， 選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。 冷卻 45℃ 的營養(yǎng)瓊脂傾注于平皿中，搖勻，置37 ℃ 培養(yǎng) 24小時(shí)。 伊紅美藍(lán)瓊脂平板含有伊紅與美藍(lán)染料，在此亦作為指示劑，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境時(shí)，該兩種染料即結(jié)合成復(fù)合物，使大腸菌群產(chǎn)生與遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上相似的、帶核心的、有金屬光澤的深紫色（龍膽紫的紫色）菌落。乳糖能起選擇作用，因?yàn)楹芏嗉?xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣。 ? 9. 混合涂片染色 ? 10. 清理：實(shí)驗(yàn)完畢，清潔顯微鏡。待玻片冷卻后再加染料。 ? 3．用二甲苯擦鏡頭時(shí)用量要少，不宜久抹，以防溶解膠粘透鏡的樹脂。 ?
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