食品檢驗工中級培訓(xùn)資料-展示頁
2024-09-10 21:23本頁面
【正文】 菌落數(shù)均在 30300，則應(yīng)視二者之比如何來決定，若其比值小于 2，應(yīng)報告平均數(shù)。 冷卻 45℃ 的營養(yǎng)瓊脂傾注于平皿中，搖勻，置37 ℃ 培養(yǎng) 24小時。 1ml無菌吸管吸取樣品 1ml加入 9ml 無菌生理鹽水，使樣品成 1： 10 和 1： 100 兩個稀釋度。 ? 三、器材 乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）（內(nèi)有倒置小套管），伊紅美藍(lán)瓊脂平板，滅菌水； 載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。 ? 3．復(fù)發(fā)酵試驗 ? 以上大腸菌群陽性菌落，經(jīng)涂片染色為革蘭氏陰性無芽胞桿菌者，通過此試驗再進一步證實。 伊紅美藍(lán)瓊脂平板含有伊紅與美藍(lán)染料，在此亦作為指示劑，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境時，該兩種染料即結(jié)合成復(fù)合物，使大腸菌群產(chǎn)生與遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上相似的、帶核心的、有金屬光澤的深紫色（龍膽紫的紫色）菌落。 ? 2．平板分離 ? 平板培養(yǎng)基一般使用復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂（遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基， Endo＇ s medium）或伊紅美藍(lán)瓊脂（ eosin methylene blueagar， EMB agar）， 前者含有堿性復(fù)紅染料，在此作為指示劑，它可被培養(yǎng)基中的亞硫酸鈉脫色，使培養(yǎng)基呈淡粉紅色，大腸菌群發(fā)酵乳糖后產(chǎn)生的酸和乙醛即和復(fù)紅反應(yīng)，形成深紅色復(fù)合物，使大腸菌群菌落變?yōu)閹Ы饘俟鉂傻纳罴t色。在量少的情況下，也可能延遲到 48小時后才產(chǎn)氣，此時應(yīng)視為可疑結(jié)果，因此，以上兩種結(jié)果均需繼續(xù)做下面兩部分實驗，才能確定是否是大腸菌群。溴甲酚紫還有抑制其他細(xì)菌如芽胞菌生長的作用。乳糖能起選擇作用，因為很多細(xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣。 ? 多管發(fā)酵法包括初步發(fā)酵試驗、平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗三個部分。 二、多管發(fā)酵法測大腸菌群的基本原理 ? 大腸菌群概念 大腸菌群系指一群在 37度能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性的無芽胞桿菌。 五、實驗結(jié)果 ? 列表簡述細(xì)菌染色觀察結(jié)果（說明各菌的形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)） 水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群測定 一、目的要求 1．學(xué)習(xí)平板菌落計數(shù)法測定水中細(xì)菌總數(shù) 2．學(xué)習(xí)多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群 MPN值 細(xì) 菌 學(xué) 檢 驗 程 序 樣品 細(xì)菌總數(shù) 大腸菌群 水樣稀釋或不稀釋 水樣稀釋或不稀釋 第一步 初步發(fā)酵試驗 傾注平板培養(yǎng) （乳糖發(fā)酵） 37 ℃ 24小時 37℃ 24小時 菌落計數(shù) 第二步 平板分離培養(yǎng) （取平均數(shù)報告） （轉(zhuǎn)種鑒別培養(yǎng)基） 37℃ 24小時 革蘭染色鏡檢 第三步 乳糖復(fù)發(fā)酵試驗 報告結(jié)果 ?樣品稀釋程序 ? （ 1）用 1mL滅菌吸管吸取 1： 10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有 9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成 1：100的稀釋液。 ? 9. 混合涂片染色 ? 10. 清理：實驗完畢，清潔顯微鏡。最后用吸水紙輕輕吸干。脫色時間一般為 20~30 s。 ? 5. 媒染：用典液沖去殘水，并用典液覆蓋 1 min，水洗。待玻片冷卻后再加染料。 （載玻片要潔凈無油跡；滴加生理鹽水和取菌不宜過多；涂片要均勻，不宜過厚） ? 2. 干燥：自然風(fēng)干。 ? 二、基本原理（略） ? 三、材料和器皿 ? 顯微鏡，香柏油，二甲苯，草酸銨結(jié)晶紫，沙黃或石炭酸復(fù)紅，革蘭氏染色液； ? 大腸桿菌，金黃色葡萄球菌； ? 四 、 操作步驟 ? 1．涂片：在潔凈無油膩的玻片中央放 — 小滴水(或用接種環(huán)桃 l2環(huán)水 )，用無菌的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜。 ? 4．因油鏡的工作距離甚短，故操作時要特別謹(jǐn)慎，切忌采用眼睛對
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