《動(dòng)物基因工程》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 有生長(zhǎng)因子才能生長(zhǎng) 接觸抑制性： 細(xì)胞與細(xì)胞接觸后，生長(zhǎng)便受到抑制 形態(tài)依賴(lài)性： 細(xì)胞呈扁平狀，并有長(zhǎng)纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 上述特征使得正常的哺乳動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)中，一般只能存活 50代 且在培養(yǎng)皿上以平面的形式生長(zhǎng)，即單層細(xì)胞生長(zhǎng)。 高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞的遺傳標(biāo)記 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞 含有胸腺嘧啶核苷激酶（ TK） 編碼基因缺陷的受體細(xì)胞（ tk ） 不能在含有 次黃嘌呤核苷 、 氨基喋呤 、 胸腺嘧啶核苷 的培養(yǎng)基 上（ HAT培養(yǎng)基 ）生長(zhǎng)，載體上的標(biāo)記基因 tk能與之遺傳互補(bǔ) 含有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HPRT） 編碼基因缺陷的受體細(xì)胞 （ hprt ） 不能在含有 次黃嘌呤核苷 、 氨基喋呤 、 胸腺嘧啶核苷 的培養(yǎng)基上（ HAT培養(yǎng)基 ）生長(zhǎng)，載體上的標(biāo)記基因 hprt與之遺傳互補(bǔ) 哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞常見(jiàn)的遺傳選擇標(biāo)記 遺傳標(biāo)記 編碼產(chǎn)物 篩選藥物 作用機(jī)理 APH 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 G418 APH滅活 G418 DHFR 二氫葉酸還原酶 氨甲喋呤 DHFR變體抗氨甲喋呤 HPH 潮霉素 B磷酸轉(zhuǎn)移酶 潮霉素 B HPH滅活潮霉素 B TK 胸腺嘧啶核苷激酶 氨基喋呤 TK合成 TMP XGPRT 黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 霉酚酸 XGPRT合成 GMP ADA 腺嘌呤核苷脫氨酶 腺嘌呤木酮糖苷 ADA滅活 XylA 常用的高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞 迄今為止，用于醫(yī)療用品（藥物、抗體、診斷試劑）大規(guī)模生產(chǎn) 的高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞主要還是 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 （ CHO）， 其優(yōu) 勢(shì)有如下幾個(gè)方面： 遺傳背景清楚，生理代謝穩(wěn)定 與人的親緣關(guān)系接近，外源蛋白修飾準(zhǔn)確 基因轉(zhuǎn)移和載體表達(dá)系統(tǒng)完善 耐受剪切力，便于大規(guī)模培養(yǎng) 被美國(guó) FDA確認(rèn)為安全的基因工程受體細(xì)胞（ GRAS） C 高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng) 人腺病毒 DNA 猴空泡病毒 DNA（ SV40） 人乳多瘤病毒 DNA（ BKV） 人牛痘病毒 DNA 人腺病毒 DNA 腺病毒科為線(xiàn)狀雙鏈 DNA病毒，無(wú)包膜，呈二十面體，共有 93個(gè) 成員，分哺乳動(dòng)物腺病毒和禽腺病毒兩個(gè)屬。 SV40感染猴細(xì)胞時(shí)呈裂解型，不致癌；但感染嚙齒類(lèi)動(dòng)物后， 便發(fā)生 非同源整合 而致癌。該載體曾被成功地用于在猴腎細(xì)胞中表達(dá)有生物活性的兔 β 珠蛋白 . 利用 SV40 DNA載體表達(dá)外源基因的程序 SV40 載體 病毒晚期基因啟動(dòng)子 篩選標(biāo)記 ori 缺陷的 SV40 輔助病毒 去除細(xì)菌序列 插入外源基因 重組分子 分離病毒 DNA 轉(zhuǎn)化 篩選 增殖 感染 基因表達(dá)好 外源基因能高效表達(dá) SV40 DNA載體的特點(diǎn) 基因重排高 病毒基因組和重組分子常發(fā)生重排和缺失現(xiàn)象 宿主范圍窄 只能轉(zhuǎn)染猴細(xì)胞 裝載量較小 人乳多瘤病毒 DNA（ BKV） 人乳多瘤 病毒（ BKV） 屬于 乳多瘤 病毒科乳頭瘤病毒屬，其基因 組為雙鏈 DNA， 感染宿主細(xì)胞后基因不發(fā)生整合，獨(dú)立于染色體而自 人乳多瘤病毒的生物學(xué)特性 主復(fù)制，每個(gè)宿主細(xì)胞最高可達(dá) 500個(gè)拷貝 人乳多瘤病毒表達(dá)載體的構(gòu)建 BKV 穿梭載體 BKV ori BKV gene DRE MMTP Ap r ori SV40 P Ne
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