動物基因工程ppt課件(完整版)
【正文】 外源基因多次傳代后不至于丟失，易于長期保存 合適的標(biāo)記 便于轉(zhuǎn)化株的篩選和維持 生長快且齊 分裂周期短，生長均一，便于控制 規(guī)模培養(yǎng) 大多數(shù)正常的高等哺乳動物細(xì)胞并不能同時具備上述條件，癌細(xì)胞能 安全性能好 不合成分泌致病物質(zhì)，不致癌 滿足上述前四項要求，但在安全性能上有欠缺。 Apr ori viral gene gpt SV40 ori pV2GPT pBR322 pBR322 SV40 pV2GPT是一種 SV40 DNA與大腸桿菌質(zhì)粒 DNA雜合的載體，其 中 gpt為細(xì)菌來源的 谷氨酸 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶基因 ，用于篩選重組子（霉酚酸）。 目前廣泛使用的牛痘病毒表達(dá)系統(tǒng)是一種預(yù)先構(gòu)建好的重組病毒 其基因組上插入了一個可表達(dá)的大腸桿菌 T7RNA聚合酶 編碼基因。 將待轉(zhuǎn)化的 DNA溶解受體細(xì)胞懸浮液中，然后加入電擊轉(zhuǎn)化儀的 樣品槽內(nèi)，兩端施加瞬時高壓電場，使細(xì)胞膜產(chǎn)生細(xì)小的縫隙，此時 電擊轉(zhuǎn)化法常用于對磷酸鈣共沉淀法無效的細(xì)胞類型，如生長在 懸浮液中的淋巴細(xì)胞等。當(dāng)上述外界條件消失后，紅細(xì)胞膜又可 恢復(fù)原來的通透性。更重要的是，擴(kuò)增的區(qū) 哺乳動物細(xì)胞內(nèi)的基因擴(kuò)增現(xiàn)象 域遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于 dhfr基因本身，即與 dhfr基因相鄰的 DNA區(qū)域同時被擴(kuò)增。 同樣采用 DHFRMTX系統(tǒng)表達(dá)，受體 細(xì)胞選用 CHO系統(tǒng)。 。 信號肽編碼序列 此外，人 tPA也可由重組大腸桿菌生產(chǎn)，但蛋白的重折疊效率低。先將帶有 GS編碼基因 的載體轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的哺乳動物細(xì) 中不必使用 GS缺陷型的受體細(xì)胞，而且在正常的 MSX濃度下就能篩 選到含有高拷貝外源基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這是 GSMSX系統(tǒng)比 DHFR 胞中，由于只有多拷貝的 GS編碼基因才能抗 MSX， 所以在轉(zhuǎn)染過程 MTX系統(tǒng)優(yōu)越之處。在 溶血過程中，紅細(xì)胞膜的通透性大增，在血紅蛋白溢出的 血影細(xì)胞與受體細(xì)胞在適當(dāng)條件下發(fā)生融合，從而將外源 DNA轉(zhuǎn)入受 體細(xì)胞。 將待轉(zhuǎn)化的 DNA溶解與天然或人工合成的磷脂混合，后者在表面 活性劑的存在下形成包埋水相 DNA的 脂質(zhì)體 結(jié)構(gòu)。 人囊狀纖維化基因就是采用這種戰(zhàn)略高效表達(dá)的。 安裝細(xì)胞色素 P450 dioxin介導(dǎo)的增強(qiáng) 子 DRE， 控制小鼠乳腺癌啟動子 MMTP， 由其帶動外源基因的表達(dá)。目前已鑒定的人腺病毒 腺病毒的生物學(xué)特性 有 6個亞屬，其中常用來構(gòu)建載體的主要是 C亞屬的 2型（ Ad2） 和 5型 （ Ad5） 病毒。 高等哺乳動物受體細(xì)胞的遺傳標(biāo)記 營養(yǎng)缺陷型的哺乳動物受體細(xì)胞 含有胸腺嘧啶核苷激酶（ TK） 編碼基因缺陷的受體細(xì)胞（ tk ） 不能在含有 次黃嘌呤核苷 、 氨基喋呤 、 胸腺嘧啶核苷 的培養(yǎng)基 上（ HAT培養(yǎng)基 ）生長，載體上的標(biāo)記基因 tk能與之遺傳互補(bǔ) 含有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HPRT） 編碼基因缺陷的受體細(xì)胞 （ hprt ） 不能在含有 次黃嘌呤核苷 、 氨基喋呤 、 胸腺嘧啶核苷 的培養(yǎng)基上（ HAT培養(yǎng)基 ）生長，載體上的標(biāo)記基因 hprt與之遺傳互補(bǔ) 哺乳動物受體細(xì)胞常見的遺傳選擇標(biāo)記 遺傳標(biāo)記 編碼產(chǎn)物 篩選藥物 作用機(jī)理 APH 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 G418 APH滅活 G418 DHFR 二氫葉酸還原酶 氨甲喋呤 DHFR變體抗氨甲喋呤
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