動(dòng)物基因工程ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 胞呈扁平狀，并有長(zhǎng)纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 上述特征使得正常的哺乳動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)中，一般只能存活 50代 且在培養(yǎng)皿上以平面的形式生長(zhǎng)，即單層細(xì)胞生長(zhǎng)。 SV40的基因組 DNA t / T基因編碼病毒的小抗原和大 SV40 DNA ori VP2 T VP3 VP1 t 抗原與病毒的致癌作用密切相關(guān) SV40在裂解宿主細(xì)胞前的晚期 狀態(tài)時(shí)，每個(gè) 宿主細(xì)胞含有 105個(gè)病 毒 DNA拷貝，因此十分適合用于高效 表達(dá)外源蛋白 SV40 DNA質(zhì)粒 DNA雜合載體的構(gòu)建 重組的 SV40 DNA分子必須經(jīng)過(guò) 包裝后才具有感染能力，因此插入的 外源 DNA片段不能太大。以前外源基因插在病毒基因組的非必需區(qū)內(nèi)，構(gòu)建 人牛痘病毒的生物學(xué)特性 出的重組病毒具有感染力，而且一經(jīng)轉(zhuǎn)染，外源基因即可在最鄰近的 病毒啟動(dòng)子的控制下高效表達(dá)。 如果在外源 DNA中摻入少量的受體細(xì)胞內(nèi)源性 DNA可以提高轉(zhuǎn)化 效率。 上述程序多用于動(dòng)物個(gè)體的轉(zhuǎn)基因過(guò)程，由于必須單細(xì)胞逐一操 顯微注射法 借助于顯微鏡將純化的 DNA溶液迅速注入到受精卵中變大了的雄 作，所以不太適用于基因的克隆和表達(dá)。 氨甲喋呤 （ MTX） 是動(dòng)物細(xì)胞中的關(guān)鍵代謝酶 二氫葉酸還原酶 數(shù)細(xì)胞死亡，但在極少數(shù)幸存下來(lái)的抗性細(xì)胞中， dhfr基因均得以擴(kuò) 增。重組抗 體采用 DHFRM TX系統(tǒng)表達(dá)。與 tPA 相似，人凝血因子 VIII也是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子，必須通過(guò)重組哺乳 動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)，但目前商品化了的重組人凝血因子 VIII尚不能滿足幾代 血友病人的大量需求。多年來(lái)，血友病 病人都是使用從人血中分離純化的凝血因子 VIII生物制品進(jìn)行治療，然 而由于人的血源污染乙肝病毒或愛滋病病毒，數(shù)千名使用這種血液制 品的血友病人慘遭感染，其中 10%的病人最終死于愛滋病而非血友病。有的還含有各種信號(hào)肽序列。這種方法具有定向性好、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性佳、導(dǎo) 入效率高等優(yōu)點(diǎn)，但也存在一定的缺陷，如目前常用的載體宿主范圍 有限，往往無(wú)法轉(zhuǎn)染一些具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的家禽和牲畜細(xì)胞等。 利用上述程序曾將外源基因成功地導(dǎo)入了小鼠的淋巴細(xì)胞和 HeLa 脂質(zhì)體介導(dǎo)法 將這種 脂質(zhì)體懸浮液加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，便會(huì)與受體細(xì)胞膜融 細(xì)胞。但 外源基因表達(dá) 盒進(jìn)入受體細(xì)胞后，往往以多拷貝的形式隨 機(jī)整合在染色體 DNA上，導(dǎo)致受體細(xì)胞基因滅活、外源基因不表達(dá)。 以此載體在人細(xì)胞系中表達(dá) b1干擾素和單純皰疹病毒 B蛋白獲得成功。 基因重排低 外源基因與病毒 DNA重組后能穩(wěn)定復(fù)制幾個(gè)周期 腺病毒 DNA載體的特點(diǎn) 安全性能好 不整合人的染色體 DNA， 不會(huì)導(dǎo)致惡性腫瘤 宿主范圍廣 對(duì)受體細(xì)胞是否處于分裂期要求不嚴(yán)格 使用效果好 外源基因在載體上容易高效表達(dá) 猴多瘤病毒 DNA（ SV40） SV40屬于乳多瘤病毒科多瘤病毒屬，呈小型二十面體，由 VP VP VP3三種衣殼蛋白包裝而成，基因組為 5224bp的雙鏈環(huán)狀 DNA SV40的生物學(xué)特性 SV40可以與所有哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的組蛋白 H H H4結(jié)合，從 而使其 DNA形成類似核小體的 微型染色體 結(jié)構(gòu)。有時(shí)，正常細(xì)胞 會(huì)改變某些特征而越過(guò)生理臨界點(diǎn)，繼續(xù)增殖并無(wú)限制分裂，這種狀 態(tài)稱為 細(xì)胞系形成 ，此時(shí)的細(xì)胞成為 細(xì)胞系 。為了盡量提 高 SV40的裝載量，必須刪除一些基因 片段，因此重組的 SV40分子必須與野 生型病毒共感染受體細(xì)胞，才能形成 有感染力的重組病毒顆粒。然而由于
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