基因工程制下ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 間二硫鍵的分子由于第二向電泳時(shí)被還原 ,分子變成小的肽鏈而位于對(duì)角線的下方。 （ 2） 氨基酸成分分析 ：蛋白質(zhì)在酸性或堿性條件下水解后，用氨基酸分析儀進(jìn)行組成分析。 （ 3）病毒的去除：色譜分離或過(guò)濾能去除病毒。 ： （ 1）溫度擴(kuò)增敏感型質(zhì)粒，對(duì)此類工程菌，先在較低溫度下培養(yǎng)，然后升溫，以大量增加質(zhì)?？截悢?shù)，誘導(dǎo)外源基因表達(dá)。 ： 由于基因工程菌的不穩(wěn)定性，連續(xù)培養(yǎng)很難做到。 采取各種方法，控制菌體的糖酵解速度，使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力，避免乙酰輔酶 A和乙酸的產(chǎn)生。第五節(jié) 基因工程菌的穩(wěn)定性 基因工程菌在 傳代 過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定現(xiàn)象，包括 分裂不穩(wěn)定 和 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定 。乙酸的產(chǎn)生是因?yàn)楣┠懿蛔悖w將乙酰輔酶 A轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴?lái)供能。 第七節(jié) 基因工程菌發(fā)酵 一、基因工程菌的培養(yǎng)方式 :為保持基因工程菌生長(zhǎng)所需的良好微環(huán)境，延長(zhǎng)生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，獲得高密度菌體，間歇連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的方法。 ：影響發(fā)酵的產(chǎn)量和發(fā)酵周期，接種量小，延長(zhǎng)菌體延遲期，不利于外源基因表達(dá)，采用大接種量，有利于縮短延遲期，并能減少污染。采用陰離子交換、疏水層析、或親和層析可去除熱源物質(zhì)。該法是檢測(cè)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中細(xì)微變化的最有效方法，蛋白質(zhì)降解形成的肽段可通過(guò)測(cè)定氨基酸組成、 N端序列或采用 HPLCMS或毛細(xì)管電泳等方法進(jìn)行鑒定并與標(biāo)準(zhǔn)品比較。存在鏈內(nèi)二硫鍵的分子位于對(duì)角線的上方 (第一向泳動(dòng)快 ,第二向泳動(dòng)慢 ) 。 （ 1） 目的蛋白質(zhì)含量測(cè)定 ：常用方法有還原或非還原SDSPAGE法、 HPLC、毛細(xì)管電泳等。 ：防止其在儲(chǔ)藏過(guò)程中的脫氨、氧化、磺?；?、聚合或降解等造成的分子變化。 （ 2）鑒別試驗(yàn)： ELISA法 （ 3）水分測(cè)定 （ 4）無(wú)菌試驗(yàn) （ 5）熱原試驗(yàn) （ 6）干擾素效價(jià)測(cè)定 （ 7）安全試驗(yàn)：豚鼠腹側(cè)皮下注射劑量為人每千克體重臨床使用最大量的 3倍，觀察 7天，局部無(wú)紅腫、壞死、總體重不下降即為合格； 5只小鼠尾靜脈注射劑量為人3倍藥物，觀察 7天，若動(dòng)物全部存活為合格。 第十節(jié) 基因工程藥物的制造流程 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和要求： （ 1）干擾素效價(jià)測(cè)定 （ 2）蛋白質(zhì)含量測(cè)定：福林 酚法 （ 3）比活性：干擾素效價(jià)的
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