【正文】 用加有還原劑的固體或半固體培養(yǎng)基裝入試管中，以培養(yǎng)相應(yīng)的厭氧菌。 : 用二氧氣碳驅(qū)代氧氣；用氮?dú)怛?qū)代氧氣；用真空驅(qū)代氧氣；用氫氣驅(qū)代氧氣；用混和氣體驅(qū)代氧氣。 微生物在培養(yǎng)時(shí)，不需要氧氣參加。 微生物在培養(yǎng)時(shí)，需要有氧氣加入，否則就不能生長良好。 七、超聲波 超聲波（頻率在 20220赫茲以上）具有強(qiáng)烈的生物學(xué)作用。 ?不同類群的微生物對鹽的耐受力不同，但 18~25%的鹽濃度才能完全抑制微生物的生長。當(dāng) Aw低于 。 (2)pH的控制： “ 治標(biāo) ” ：指根據(jù)表面現(xiàn)象而進(jìn)行直接 、 及時(shí) 、 快速但不持久的表面化調(diào)節(jié) 。 ? Aspergillus niger黑曲霉 － ：有利于合成檸檬酸 － ：菌體生長 7：合成草酸 ? Clostridium acetobutylicum丙酮丁醇梭菌 － ：菌體生長繁殖 － ：丙酮丁醇發(fā)酵 （ 4）微生物細(xì)胞內(nèi)的 pH多接近于中性。通常的乳酸菌屬于耐氧菌。 常見的有梭菌屬 、 梭桿菌屬 、 擬桿菌屬等 。 （ 2) 微好氧菌： 只能在較低的養(yǎng)分壓（ ~，正常大氣壓為 ）下才能正常生長的微生物，通過呼吸鏈并以氧為最終氫受體而產(chǎn)能。 ⑷ 基質(zhì)的因素： 水 、 脂肪 、 糖 、 蛋白質(zhì)等物質(zhì)含量 、 pH值 。 低溫對微生物的影響： (1) 在高于冰點(diǎn)的低溫條件下 ， 中溫及高溫微生物體內(nèi)的大量飽和脂肪酸會凝固 ， 造成生長代謝停止 ， 而低溫微生物仍能生長繁殖； (2) 在低于冰點(diǎn)的低溫條件下 ， 細(xì)胞內(nèi)水分凍結(jié) 、 生化反應(yīng)停止 ， 細(xì)胞因冰晶形成而脫水 ， 同時(shí)冰晶對細(xì)胞膜造成物理損傷 ，從而導(dǎo)致微生物死亡 。 專性低溫菌最適生長溫度為 15~18 ℃ ， 兼性低溫菌最適生長溫度為 25~30℃ 。 缺點(diǎn)： ①菌種易于退化；②容易污染；③營養(yǎng)物的利用率低于分批培養(yǎng)。 c. 適用：科研 恒濁法與恒化法 的比較： 裝置 控制對 象 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 流速 生長速率 產(chǎn)物 應(yīng)用范圍 恒濁器 菌體密度 （內(nèi)控制） 無限制生長因子 不恒定 最高 大量菌體及與菌體相平行的代謝產(chǎn)物 生產(chǎn)為主 恒化器 培養(yǎng)基流速 （外控制） 有限制生長因子 恒定 低于最高 不同生長速率的菌體 實(shí)驗(yàn)室為主 (2) 按培養(yǎng)器的級數(shù)分 — 單級連續(xù)培養(yǎng)器和多級連續(xù)培養(yǎng)器 多級連續(xù)培養(yǎng)以單級連續(xù)培養(yǎng)為基礎(chǔ)，主要用于產(chǎn)物生產(chǎn)與菌體生長不平行的培養(yǎng)類型上 連續(xù)培養(yǎng)的實(shí)踐意義： (1)連續(xù)培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： 高效 、 低耗 、 利于自控 、 產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定 。 —— 恒化器 是通過控制培養(yǎng)液恒定的流速 ， 來調(diào)節(jié)生長限制因子在營養(yǎng)液中的濃度 ， 使微生物始終在低于其最高生長速率條件下進(jìn)行生長繁殖的連續(xù)培養(yǎng)裝置 。 測定所培養(yǎng)微生物的光密度值 自動調(diào)節(jié)新鮮培養(yǎng)基流入和培養(yǎng)物流出培養(yǎng)室的流速 使培養(yǎng)物維持在某一恒定濁度 當(dāng)培養(yǎng)室中的濁度超過預(yù)期數(shù)值時(shí)，流速加快，使?jié)岫冉档停? 當(dāng)培養(yǎng)室中的濁度低于預(yù)期數(shù)值時(shí)，流速減慢，使?jié)岫壬撸? 恒濁培養(yǎng)器的工作精度是由光電控制系統(tǒng)的靈敏度來決定的 如果所用培養(yǎng)基中有過量的必需營養(yǎng)物，就可以使菌體維持最高的生長速率。 a. 裝置 —— 恒濁器： 指根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長密度 ， 并借光電控制系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液流速 ， 以取得菌體密度高 、 生長速率恒定的微生物細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)器 。 （ 二 ） 微生物在連續(xù)培養(yǎng)中的生長規(guī)律 連續(xù)培養(yǎng)： 指微生物接種到培養(yǎng)基里以后的整個(gè)生長期間 ， 微生物能持續(xù)地以比較恒定的生長速率常數(shù)進(jìn)行生長 ， 從而導(dǎo)致微生物的生長過程能 “ 不斷 ” 地進(jìn)行下去的一種培養(yǎng)方法 。生長主要表現(xiàn)在菌絲尖端的伸長和出現(xiàn)分支、斷裂等，此時(shí)期的菌體呼吸強(qiáng)度達(dá)到高峰，有的開始積累代謝產(chǎn)物。 延滯期 對數(shù)期 穩(wěn)定期 死亡期 特征 μ=0 μ= μmax μ=死亡率 μ﹤ 死亡率 群體動態(tài) 細(xì)胞數(shù)幾乎 不增 細(xì)胞數(shù)以指數(shù) 增加 活細(xì)胞數(shù)達(dá)最大，并保持恒定 活細(xì)胞數(shù)顯著下降 細(xì)胞生理狀態(tài) 代謝活躍，調(diào)整和適應(yīng)新環(huán)境 養(yǎng)分過剩，生長繁殖旺盛，生理均一 養(yǎng)分消耗大，代謝物積累，芽孢形成 細(xì)胞衰老，死亡并自溶 影響因素 菌株、遺傳、菌齡、接種量、培養(yǎng)條件 菌株遺傳性、培養(yǎng)條件 菌株遺傳性、培養(yǎng)條件 實(shí)際意義 影響發(fā)酵周 期 接種菌種，實(shí) 驗(yàn)材料 獲得代謝產(chǎn)物 絲狀微生物的群體生長規(guī)律 絲狀微生物的純培養(yǎng)采用孢子接種，在液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)或深層通氣加攪拌培養(yǎng)，菌絲體通過斷裂繁殖不形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。 4） 延長：補(bǔ)料 ， 調(diào) pH、 溫度等 。 1)特點(diǎn)： ； ； ； ； ； 。 固定環(huán)境條件，其他必需營養(yǎng)都過量，改變其中一特定生長必需底物的濃度，與比生長速度的關(guān)系可用 Monod公式表示： SKsSm??.??式中： m? 為最大比生長速度； S為限制生長底物濃度； Ks為比生長速度是最大比生長速度一半時(shí)的底物濃度； 當(dāng) SKs時(shí)， KsSm .?? ?當(dāng) KsS時(shí)， m?? ?生長限制因子： 凡是處于較低濃度范圍內(nèi)，可影響生長速率和菌體產(chǎn)量的營養(yǎng)物，就稱生長限制因子。受菌種、培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的影響。 2) 重要參數(shù)： n： 指數(shù)生長期愈長 ， n愈多 ， 則菌體產(chǎn)量愈高 。 4)實(shí)踐意義： 延滯期的長短直接影響發(fā)酵周期 ， 發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中要盡量縮短延滯期 ， 選擇對數(shù)期接種齡的細(xì)胞做種子 ， 增大接種量 ， 使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分與種子培養(yǎng)基成分接近 。 ， 核糖體 、 酶類和 ATP的合成加速 ， 易產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶 ； 。 意義：描述單細(xì)胞微生物從生長開始到衰老死亡的一般規(guī)律。 抑制一段時(shí)間再解除抑制 (2)機(jī)械篩選法：利用物理方法從不同步的細(xì)菌群體中選擇出同步的群體 。 (1)環(huán)境條件誘導(dǎo)法： 1） 溫度調(diào)整法：亞適生長溫度 最適生長溫度培養(yǎng) 。它可簡單地分為兩個(gè)相互延續(xù)的時(shí)期，即細(xì)胞分裂期和分裂間期。 直接計(jì)數(shù)法（全數(shù)） —— 血球計(jì)數(shù)板法 是測定一定容積中的細(xì)胞總數(shù)目的常規(guī)方法。 2) DNA含量測定法 采用適當(dāng)?shù)臒晒庵甘緞┗蛉旧珓┡c菌體 DNA作用，利用熒光比色或分光光度計(jì)法測得 DNA的含量。 —— 粗放 測干重：可用離心法或過濾法測定 ， 一般干重為濕重的 10%～20%。 多細(xì)胞：通過無性或有性孢子使個(gè)體數(shù)目增加的過程。 生長： 指細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律、不可逆增加的過程。 5. 了解常規(guī)的微生物培養(yǎng)方法，掌握常規(guī)固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法。第六章 微生物的生長及其控制 本章的學(xué)習(xí)目的與要求 ，熟練掌握血球計(jì)數(shù)板法和平板稀釋計(jì)數(shù)法的原理和基本操作過程。 4. 了解影響微生物生長的主要理化因素。 個(gè)體生長 → 個(gè)體繁殖 → 群體生長 群體生長＝個(gè)體生長＋個(gè)體繁殖 生長是一個(gè)逐漸發(fā)生的量變的過程，是繁殖的基礎(chǔ)；繁殖是一個(gè)質(zhì)變的過程，是生長的結(jié)果。 單細(xì)胞：由于細(xì)胞分裂引起個(gè)體數(shù)目的增加。 第一節(jié) 測定生長繁殖的方法 一、測生長量 （一）直接法 測體積：在刻度離心管中測沉降量。 蛋白含量越高 ， 說明菌體數(shù)和細(xì)胞物質(zhì)量越高 。 二、計(jì)繁殖數(shù) —— 測定單細(xì)胞微生物的個(gè)體數(shù)目、絲狀微生物的孢子數(shù)。 一、微生物的個(gè)體生長與同步生長 第二節(jié) 微生物的生長規(guī)律 （一）細(xì)胞周期： 指從一個(gè)新細(xì)胞的產(chǎn)生到分裂出兩個(gè)子細(xì)胞的全過程。 同步生長 ： 通過同步培養(yǎng)的手段而使細(xì)胞群體中各個(gè)體處于分裂步調(diào)一致的生長狀態(tài)，稱為同步生長。 4） 抑制 DNA合成法： DNA合成是細(xì)胞分裂前提 。在適宜條件下，其群體就會有規(guī)律地生長，定時(shí)取樣測定細(xì)胞含量，以細(xì)胞數(shù)目的對數(shù)值作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，就可以畫出一條有規(guī)律的曲線，這就是微生物的典型生長曲線。 ； RNA尤其是 rRNA含量增高 ， 原生質(zhì)呈嗜堿性 。 c. 培養(yǎng)基的成分：種子培養(yǎng)基盡量接近發(fā)酵培養(yǎng)基 。 1)特點(diǎn)：此時(shí)菌體細(xì)胞生長的速率常數(shù) R最大，分裂快，代時(shí)短，細(xì)胞進(jìn)行平衡生長，菌體內(nèi)酶系活躍，代謝旺盛，菌體數(shù)目以幾何級數(shù)增加，群體的