【正文】 在較低的溫度 (115℃ ， 即 ／ cm2)下維持 35分鐘的方法 。 ：在發(fā)酵行業(yè)里也稱 “ 連消法 ” 。 a) 適用范圍： 在大規(guī)模的發(fā)酵工廠中作培養(yǎng)基滅菌用 。 主要操作是將培養(yǎng)基在發(fā)酵罐外連續(xù)不斷地進行加熱 、維持和冷卻 ， 然后才進入發(fā)酵罐 。 b) 條件：在 135— 140℃ 下處理 5 — l 5秒鐘 。 c) 連消法的優(yōu)點： ① 因采用高溫瞬時滅菌，故既可殺滅微生物，又可最大限度減少營養(yǎng)成分的破壞，從而提高了原料的利用率 ； ② 由于總的滅菌時間較分批滅菌法明顯減少 ， 所以縮短了發(fā)酵罐的占用周期 ， 從而提高了它的利用率； ③ 由于蒸汽負荷均勻．故提高了鍋爐的利用率； ④ 適宜于自動化操作； ⑤ 降低了操作人員的勞動強度 。 (3) 利用溫度進行滅菌的定量指標： 1） 熱死時間 指在某一溫度下 ， 殺死某微生物水懸浮液群體所需的最短時間 。 2） 熱死溫度： 又稱熱死點 ， 指在一定時間內(nèi) （ 一般為 10min） ， 殺死某微生物水懸浮液群體所需的最低溫度 。 3） D值 利用一定溫度進行加熱，活菌數(shù)減少一個對數(shù)周期（即 90%的活菌數(shù)被殺死）時，所需要的時間（分）。測定 D值時的加熱溫度，即在 D的右下角表明。 4） Z值 如果在加熱致死曲線中 ， 時間降低一個對數(shù)周期 （ 即縮短90%的加熱時間 ） 所需要升高的溫度數(shù) 。 這所需要升高的溫度數(shù) ， 即為 Z值 。 5） F值 ： 在一定的基質(zhì)中 ， 其溫度為 ℃ ， 加熱殺死一定數(shù)量微生物所需要的時間 （ 分 ） ， 即為 F值 。 (4)影響加壓蒸汽滅菌效果的因素： 1)滅菌物體含菌量的影響； 2)滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度的影響； 3)滅菌對象 pH的影響； ， 微生物較不易死亡； pH＜ ， 易引起微生物死亡 。 4)滅菌對象的體積； 體積大小影響熱傳導速率 5)加熱與散熱速度 上磅速度：達到壓力所需要的時間 下磅速度：從規(guī)定壓力降到零的時間 維持時間 (5)高溫對培養(yǎng)基成分的有害影響及其防止： 1)有害影響； 2)消除措施； ； 分別單獨滅菌、低壓滅菌、間歇滅菌 a) 對易破壞的含糖培養(yǎng)基進行滅菌時 ， 應先將糖液與其他成分分別滅菌后再合并； b) 對含 ca2+或 Fe3+的培養(yǎng)基與磷酸鹽先作分別滅菌 ， 然后再混合 ， 就不易形成磷酸鹽沉淀； c) 對含有在高溫下易破壞成分的培養(yǎng)基可進行低壓滅菌 (在112℃ 即 ／ cm2或 8磅／英寸 2下滅菌 15分鐘 )或間歇滅菌； d) 在大規(guī)模發(fā)酵工業(yè)中 ， 可采用連續(xù)加壓滅菌法進行培養(yǎng)基的滅菌 。 b. 過濾除菌法： 各種濾器 濾膜過濾裝置、燒結(jié)玻璃板過濾器、石棉板過濾器、素燒瓷過濾器、硅藻土過濾器 缺點：無法去除病毒和噬菌體 。 避免發(fā)生沉淀： EDTA（ 乙二胺四乙酸） NTA（ 氮川三乙酸） 氣體滅菌劑：氧化乙烯 （二）過濾除菌：適用于血清、抗生素及糖液等的除菌。 過濾除菌 （ 三 ） 輻射滅菌： 紫外線、放射性同位素、微波等。 三 、 化學消毒滅菌法 是應用能抑制或殺死微生物的化學制劑進行消毒滅菌的方法 。 （ 一 ） 影響消毒與滅菌的因素： 化學藥品及濃度的高低； 處理微生物的時間長短； 微生物的種類； 微生物所處的環(huán)境 。 （ 二 ） 消毒滅菌效果的評價： 石炭酸系數(shù) (.) — 評價表面消毒劑的相對殺菌強度 指在一定時間內(nèi) ， 被試藥劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達到同效的石炭酸的最高稀釋度之比 。 最低抑制濃度 （ MIC） —— 評定某化學藥物藥效強弱 指在一定條件下 ， 某化學藥劑抑制特定微生物的最低濃度 。 半致死劑量 （ LD50） —— 評定某化學藥物毒性強弱 指在一定條件下 ， 某化學藥物能殺死 50%試驗動物時的劑量 。 最低致死劑量 （ MLD） —— 評定某化學藥物毒性強弱 指在一定條件下，某化學藥物能引起試驗動物群體100%死亡率的最低劑量。 （ 三 ） 常用的化學殺菌劑或制菌劑 表面消毒劑： 指對一切活細胞都有毒性 ， 不能用做活細胞內(nèi)的化學治療用的化學藥劑 。 理想的消毒劑：殺菌力強 ， 使用方便；價廉；對人 、 畜無害；能長期保存；溶解度大；無腐蝕性等 。 消毒劑種類：氧化劑 、 重金屬鹽 、 有機化合物 化學治療劑： 能直接干擾病原微生物的生長繁殖并可用于治療感染性疾病的化學藥物稱為化學治療劑 。 (1)抗代謝藥物 1) 什么是抗代謝藥物 ？ 又稱代謝拮抗物 、 代謝類似物 ， 是指在結(jié)構(gòu)上與生物體所必需的代謝物相似 ， 可以與正常代謝途徑中特定的酶發(fā)生競爭性反應 ， 從而阻礙酶的功能 、 干擾代謝的正常進行的物質(zhì) 。 2) 抗代謝藥物的種類 磺胺類 、 氨基葉酸 、 異煙肼 、 6巰基腺嘌呤 、 5氟代尿嘧啶 。 3) 抗代謝藥物的三種作用 ? 競爭酶的活性中心 ? 假冒正常代謝物 ? 代謝途徑終產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類似物的反饋調(diào)節(jié) 4） 抗代謝藥物的代表 — 磺胺類藥物的作用機制： ① 磺胺的作用機制： 磺胺是細菌的生長因子對氨基苯甲酸 （ PABA） 的結(jié)構(gòu)類似物 ， 它可以與細菌葉酸合成途徑中的二氫蝶酸合成酶發(fā)生競爭性反應 ， 生成 “ 假二氫葉酸 ” ， 使細菌的葉酸無法正常合成 ， 從而抑制其生長 。 ② 磺胺增效劑三甲基芐二氨嘧啶 TMP的作用機制： TMP能抑制細菌葉酸合成途徑中的二氫葉酸還原酶，使二氫葉酸無法還原成四氫葉酸，從而增強磺胺的抑制效果。 ③ 磺胺具有高度選擇毒力的原因 磺胺類藥物是氨苯磺胺衍生物，其結(jié)構(gòu)與對氨基苯甲酸（ PABA） 類似，而 PABA是葉酸分子組成。葉酸是輔酶，在氨基酸、維生素合成中起重要作用，許多細菌需自己合成葉酸，而人和動物無二氫蝶酸合成酶、二氫葉酸合成酶和二氫葉酸還原酶，只能利用現(xiàn)成葉酸，因此不受磺胺干擾。 ④如何解釋磺胺藥物的降效和失效現(xiàn)象 ? 磺胺藥物與 PABA濃度關(guān)系 ? 外源 PABA、 二氫蝶酸、二氫葉酸、嘌呤、嘧啶、核苷酸、絲氨酸、甲硫氨酸 ? 基因突變 (2) 抗生素 1) 定義 抗生素是生物在其生命活動中產(chǎn)生的一種次生代謝產(chǎn)物或其人工衍生物 ， 能對他種生物的生命活動產(chǎn)生抑制作用或致死作用 。 2) 抗生素的種類 、 效價與制菌譜 ① 種類：不下萬種 ? 放線菌產(chǎn)生的抗生素（半數(shù)） ? 細菌產(chǎn)生的抗生素 桿菌肽、短桿菌肽、多粘菌素 ? 真菌抗生素 ? 綠色植物抗生素 ? 動物抗生素 ② 效價 效價概念 Titre, titer 抗生素的活力 效價的測定方法 各種抗生素 1mg游離堿為 1000單位。 ? 物理方法： ? 化學方法： ? 生物方法：以供試菌的制菌強度為標準 稀釋法 比濁法 擴散法（管蝶法）：牛津杯 擴散法 ③ 抗菌譜 抗生素的作用范圍即抗菌譜 。 抗 G+菌 抗 G菌 兼抗 G+和 G細菌 抗 G+和 G細菌以及立克次氏體和衣原體 廣譜抗生素 抗真菌 抗病毒 3) 抗生素對微生物作用的機制（作用位點）： ① 抑制細胞壁合成：青霉素，多氧霉素 ② 影響細胞膜功能：多肽類，多烯類 ③ 干擾蛋白合成：抑制而非殺死 ④ 阻礙核酸合成：對細胞有毒 4) 半合成抗生素 天然抗生素的結(jié)構(gòu)改造。如氨芐青霉素。 5) 生物藥物素 具有多種生理活性的微生物次生代謝產(chǎn)物，如酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、受體拮抗劑和抗氧化劑。 (4) 干擾素： 作用于病毒的物質(zhì) ， 抑制病毒的復制 。 (5) 中草藥有效成分 。 (6) 微生物抗藥性 對藥物的適應性即是抗藥性 。 1) 產(chǎn)生抗藥性的途徑 遺傳途徑（基因突變、遺傳重組和質(zhì)粒轉(zhuǎn)移）。 2) 抗藥性的機理 ① 菌體內(nèi)產(chǎn)生鈍化或分解藥物的酶 ② 改變膜的透性而導致抗藥性產(chǎn)生 ③ 被藥物作用的部位發(fā)生改變 ④ 形成救護途徑 ⑤ 主動外排系統(tǒng) 。