微生物的生長(zhǎng)和純培養(yǎng)-全文預(yù)覽
【正文】 養(yǎng) 概念：以恒定流速使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定而保持細(xì)菌生長(zhǎng)速率恒定的方法。在發(fā)酵工業(yè)中可用中間補(bǔ)料或連續(xù)流加物料，使培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度保持在適合菌體生長(zhǎng)和有利于菌體積累代謝產(chǎn)物的環(huán)境中。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)時(shí)，可將菌種接種到固體、半固體培養(yǎng)基的深層進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)加入還原劑；也可將厭氧微生物放入真空干燥器，抽出空氣，并充入氮?dú)饣虻獨(dú)夂投趸嫉幕旌蠚怏w。 選擇性培養(yǎng)分離法 為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物，可以根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營(yíng)養(yǎng)、生理、生長(zhǎng)條件等，采用選擇培養(yǎng)的方法進(jìn)行分離。該方法要在顯微鏡下進(jìn)行。對(duì)于涂布平板的樣品菌落通常僅張?jiān)谄桨宓谋砻?，?duì)于與營(yíng)養(yǎng)瓊脂混合的樣品菌落通常出現(xiàn)在平板的表面和內(nèi)部。 分區(qū)劃線適用于濃度較大的樣品； 連續(xù)劃線適用于濃度較小的樣品； 連續(xù)劃線 劃線分離后平板上顯示的菌落照片 稀釋分離法 （ 1）液體稀釋法 （ 1）液體稀釋法 首先將待分離的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋 ,目的是得到高度稀釋的效果 ,使一支試管中分配不到一個(gè)微生物。 二、微生物的分離方法 平皿劃線分離法 將滅好菌的瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，凝固后用接種針取少量的需分離菌，在培養(yǎng)基的表面上進(jìn)行劃線，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。 無(wú)菌的環(huán)境 （ 1）在操作過(guò)程中的無(wú)菌要求：接種、分離過(guò)程的無(wú)菌效果（在火焰上部進(jìn)行操作）。 總生長(zhǎng)量：通過(guò)培養(yǎng)獲得的微生物總量與原來(lái)接種的微生物量之差值。在分批培養(yǎng)中，它們的形成高峰往往在微生物生長(zhǎng)穩(wěn)定期的后期或衰亡期。 產(chǎn)生原因：生長(zhǎng)條件的進(jìn)一步惡化，使細(xì)胞內(nèi)的分解代謝大大超過(guò)合成代謝，繼而導(dǎo)致菌體的死亡。 000ox x x xYc c c????? 四、衰亡期 特點(diǎn)： ①細(xì)胞死亡數(shù)增加，死亡數(shù)大大超過(guò)新增殖的細(xì)胞數(shù)，群體中的活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)所謂的負(fù)生長(zhǎng)。 產(chǎn)生原因： 營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)限制因子的耗盡； 營(yíng)養(yǎng)物的比例失調(diào)，如碳氮比不合適； 有害代謝廢物的積累（酸、醇、毒素等）； 物化條件（ pH、氧化還原勢(shì)等）不合適。 生長(zhǎng)限制因子 ：凡是處于較低濃度范圍內(nèi)，可影響生長(zhǎng)速率和菌體產(chǎn)量的營(yíng)養(yǎng)物就稱生長(zhǎng)限制因子。 代時(shí)在不同種微生物中的變化很大，多數(shù)微生物的代時(shí)為 1~3h,然而有些快速生長(zhǎng)的微生物的代時(shí)還不到 10min,而另一些微生物的代時(shí)卻可長(zhǎng)達(dá)幾小時(shí)或幾天； 另外，同一種微生物，在不同的生長(zhǎng)條件下其代時(shí)的長(zhǎng)短也不同；但是，在一定條件下，每一種微生物的代時(shí)是恒定的，因此它是微生物菌種的一個(gè)重要特征。 ＝ 12 借助于 n 和 t ，還可以計(jì)算出不同培養(yǎng)條件下的代時(shí) G， G ＝ t / n 在本例中， G ＝ 4 60 / 12 ＝ 20min ∴ 該種微生物的代時(shí)為 20分鐘。 接種量：一般來(lái)說(shuō)，接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用 1/10的接種量）。 現(xiàn)象：活菌數(shù)沒(méi)增加，曲線平行于橫軸。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌增長(zhǎng)數(shù)目的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制所得的曲線。一般可以將生長(zhǎng)曲線劃分為四個(gè)時(shí)期。從圖可見(jiàn)，每經(jīng)過(guò)一個(gè)代時(shí)，細(xì)胞數(shù)目就增加一倍，呈指數(shù)增加，因而被稱為指數(shù)生長(zhǎng)，這就是單細(xì)胞群體生長(zhǎng)的特征。物理方法，隨機(jī)選擇，不影響細(xì)胞代謝。 同步細(xì)胞群體在任何一時(shí)刻都處在細(xì)胞周期的同一相，彼此間形態(tài)、生化特征都很一致，因而是細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)和生物化學(xué)等研究的良好材料。 一般細(xì)菌含氮量為干重的 %，酵母菌為%，霉菌為 %，根據(jù)一定體積培養(yǎng)液中的含氮量再乘以 ，就可測(cè)得粗蛋白的含量。9 m l 9 m l 9 m l 9 m l1 m l 1 m l 1m l 3 3 31 ml 1 ml 1 ml 1 ml 薄膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法 常用該法測(cè)定含菌量較少的空氣和水中的微生物數(shù)目。因樣品的體積已知，故可以計(jì)算菌體的濃度，同時(shí)菌體的大小與電阻的大小成正比。 該法快速、簡(jiǎn)便，培養(yǎng)液中如有其他固體顆粒，則誤差較大。 缺點(diǎn)：不能反映菌絲的縱向生長(zhǎng)，不能計(jì)算菌落的厚度和培養(yǎng)集中的菌絲。 該法適合菌濃較高的樣品。直徑 9 cm 的培養(yǎng)皿平板上出現(xiàn)菌落數(shù)一般以 50~ 500 為宜。 特點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)便；但易受干擾。不適用于細(xì)菌等個(gè)體較小的細(xì)胞，因?yàn)椋?1）細(xì)菌細(xì)胞太小，不易沉降；（ 2）在油鏡下看不清網(wǎng)格線，超出油鏡工作距離。在工業(yè)上大規(guī)模的進(jìn)行微生物培養(yǎng)稱為微生物發(fā)酵。 群體生長(zhǎng) ——群體中個(gè)體數(shù)目的增加。第四章 微生物的生長(zhǎng)和純培養(yǎng) 生長(zhǎng)與繁殖的概念 生長(zhǎng) ——微生物細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，當(dāng)同化作用 異化作用時(shí)，生命個(gè)體的重量和體積不斷增大的過(guò)程。 個(gè)體生長(zhǎng) ——微生物細(xì)胞個(gè)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，原生質(zhì)與細(xì)胞組分的增加為個(gè)體生長(zhǎng)。 在微生物學(xué)中培養(yǎng)和發(fā)酵兩個(gè)概念是相同。 適用范圍：個(gè)體較大細(xì)胞或顆粒，如血球、酵母菌等。因此，借助于分光光度計(jì)，在一定波長(zhǎng)下測(cè)定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。將適當(dāng)稀釋的菌液傾注平板或涂布在平板表面，經(jīng)保溫培養(yǎng)后，以平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以稀釋度就可以計(jì)算出原菌液的含菌量。一般干重為濕重的 10%—20%，而一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞一般重約 1012—1013g。 方法：將真菌接種在固體培養(yǎng)基的平皿中央，定時(shí)測(cè)定菌落的直徑或面積，直到菌落覆蓋整個(gè)平皿。 細(xì)胞堆積體積測(cè)定法
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