【正文】 +、 FAD或 FMN等電子載體，再經(jīng)電子傳遞系統(tǒng)傳給外源電子受體，從而生成水或他還原型產(chǎn)物并釋放出能量的過程，稱為 呼吸作用 。 丙酮酸代謝的多樣性 （ 1）發(fā)酵 ? 發(fā)酵 (fermentation)是指微生物細胞將有機物氧化釋放的電子直接交給底物本身未完全氧化的某種中間產(chǎn)物，同時釋放能量并產(chǎn)生各種不同的代謝產(chǎn)物 。 ED途徑 ? 一分子葡萄糖經(jīng) ED途徑最后生成兩分了丙酮酸、一分子 ATP、 — 分子 NADH和 NADH。 ? 第二階段發(fā)生氧化還原反應(yīng)，合成 ATP并形成兩分子的丙酮酸。 發(fā)酵 在生物氧化或能量代謝中， 發(fā)酵是指在無氧條件下，底物脫氧后所產(chǎn)生的還原力［ H］不經(jīng)過呼吸鏈傳遞而直接交給某一內(nèi)源氧化性中間代謝產(chǎn)物 的一類低效產(chǎn)能反應(yīng)。 生物氧化的含義及形式 ? 生物氧化是指有機分子在機體內(nèi)氧化分解成CO2和 H2O并釋放出能量的過程。 分解代謝分為三個階段 ? 第一階段 是將蛋白質(zhì)、多糖及脂類等大分子營養(yǎng)物質(zhì) 降解成 氨基酸、單糖及脂肪酸等 小分子物質(zhì)； ? 第二階段 是將第一階段產(chǎn)物進一步 降解成更為簡單的乙酰輔酶 A、 丙酮酸以及能進入三羧酸循環(huán)的某些中間產(chǎn)物，在這個階段會產(chǎn)生一些ATP、 NADH及 FADH2； ? 第三階段 是通過三羧酸循環(huán)將第二階段產(chǎn)物 完全降解生成 CO2， 并產(chǎn)生 ATP、 NADH及FADH2。 ? 例 1： 培養(yǎng)基中加入適量的青霉素或鏈霉素，可抑制細菌和放線菌的生長，從而將真菌和酵母菌分離出來； ? 例 2： 在馬丁氏培養(yǎng)基中加入一定量的孟加拉紅染料、鏈霉素能較好地選擇培養(yǎng)真菌； ? 例 3： YEM(甘露醇酵母粉培養(yǎng)基 )加剛果紅或結(jié)晶紫可抑制 G+細菌的生長。 這些特殊營養(yǎng)物質(zhì)包括血液、血清、酵母浸膏、動植物組織液等。一般在 25℃以上即融化， 22℃ 以下凝固，所以不能作為常用的凝固劑 ? 少數(shù)微生物能分解利用使之液化，于是多用于 穿刺培養(yǎng) ；用量： 10%20%或更多。 ? ② 固體材料可看作是一種不加凝固劑的固體培養(yǎng)基。 半合成培養(yǎng)基 ? 采用天然有機物作為 N源和生長物質(zhì)，再添加一部分的化學藥品作為 C源和無機鹽來源的培養(yǎng)基。 如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基等。 ? 在配制培養(yǎng)基過程中， 泡沫 的存在對滅菌處理有何影響？ 三、培養(yǎng)基的類型以及應(yīng)用 (一 ) 按成分不同劃分 ? 天然培養(yǎng)基 (plex medium)： 。一般適用于表面滅菌或空氣滅菌，如：實驗室、接種室、接種箱等。 ?ⅳ 巴斯德消毒法 ： 63℃ ， 30min； 或70℃ ， 15min。 因為 ： ? ①濕熱 情況下，菌體吸水，使蛋白質(zhì)易于凝固； ? ②濕熱的穿透力更強； ? ③蒸汽與被滅菌物接觸冷凝成水時，放出熱量，使其溫度迅速升高，從而增強了殺菌能力。是一種最有效、使用最廣泛的滅菌方法。 ? 干燥熱空氣滅菌 (常稱 干熱滅菌 )：把待滅菌的物品均勻地放在電熱恒溫干燥箱內(nèi)，加熱至 160170℃ ，持續(xù) 2hr。 消毒 ：采用物理或化學的方法殺死一定環(huán)境中部份的部微生物。 ? 有些微生物，如乳酸菌能大量產(chǎn)酸，磷酸緩沖系統(tǒng)就難以起到緩沖作用，此時可在培養(yǎng)基中 添加難溶的碳酸鹽 (如 CaCO3)來進行調(diào)節(jié) ， CaCO3難溶于水，不會使培養(yǎng)基 pH過度升高，但它可以不斷中和微生物產(chǎn)生的酸，同時釋放出 CO2， 將培養(yǎng)基 pH控制在一定范圍內(nèi)。 ? （如何控制生長過程中的 PH值？） pH緩沖劑 ? 維持培養(yǎng)基 pH的相對恒定，通常在培養(yǎng)基中加入 pH緩沖劑， ? 常用的緩沖劑 是 一氫和二氫磷酸鹽 (如KH2PO4和 K2HPO4)組成的混合物 。 二、營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適 營養(yǎng)物質(zhì) 濃度 過低 時不能滿足微生物正常生長所需， 濃度過高 時則可能對微生物生長起抑制作用， 例如 高濃度 糖類物質(zhì)、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長，反而起到抑菌或殺菌作用。 第三節(jié) 培養(yǎng)基 一、什么是培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 (culture medium)： 是人工配制的，適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。 ? 紅螺屬的一些細菌就是這一營養(yǎng)類型的代表 ? 光能有機營養(yǎng)型細菌在生長時通常需要外源的生長因子。 ? 不同微生物對生長因子的需要量和種類不同 。 (3)分子態(tài)氮： 少數(shù)固氮微生物能利用，如固氮菌。 碳源物質(zhì)的種類及微生物的利用 ? (1) 有機碳化合物： ? 簡單有機碳化合物： ? 復(fù)雜有機碳化合物： ? (2) 無機碳化合物 ： ? (3) 特殊和有毒碳化合物： (二 )、氮源 ? 定義： 凡是可以被微生物用來 構(gòu)成細胞物質(zhì) 的或代謝產(chǎn)物中 氮素來源 的營養(yǎng)物質(zhì)。 通過控制流速可以得到生長速率不同但密度基本恒定的培養(yǎng)物 多用于科研 遺傳學：突變株分離； 生理學：不同條件下的代謝變化； 生態(tài)學：模擬自然營養(yǎng)條件建立實驗?zāi)Ｐ停? 第六章微生物的營養(yǎng)和產(chǎn)能代謝 第一節(jié) 微生物的營養(yǎng)物質(zhì) 微生物的營養(yǎng)物質(zhì)按其在機體中的生理作用可區(qū)分為： 碳源、氮源、無機鹽、生長因子和水五大類。 連續(xù)培養(yǎng) (Continous culture ） 在微生物的整個培養(yǎng)期間，通過一定的方式使微生物能以恒定 的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法。 以同步培養(yǎng)方法使群體細胞能處于同一生長階段，并同時 進行分裂的生長。 穩(wěn)定生長期又稱恒定期或最高生長期，此時培養(yǎng)液中活細菌數(shù) 最高并維持穩(wěn)定。 對數(shù)生長期 (Log phase)： 又稱指數(shù)生長期 (Exponential phase) 以最大的速率生長和分裂，細菌數(shù)量呈對數(shù)增加， 細菌內(nèi)各成分按比例有規(guī)律地增加，表現(xiàn)為平衡生長。 遲緩期的特點 ： 分裂遲緩、代謝活躍 ? 細胞形態(tài)變大或增長，例如巨大芽孢桿菌，在遲緩期末，細胞 的平均長度比剛接種時長 6倍。 對細菌群體生長規(guī)律的了解是對其進行研究與利用的基礎(chǔ) 一、生長曲線 生長曲線 (Growth Curve)： 細菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，定時取樣測定細胞數(shù)量， 以培養(yǎng)時間為橫座標，以菌數(shù)為縱座標作圖，得到的一條反映細 菌在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。 生理指標法 微生物的生理指標，如呼吸強度，耗氧量、酶活性、 生物熱等與其群體的規(guī)模成正相關(guān)。 顯微鏡直接計數(shù)法 1）常規(guī)方法： 缺點： 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對運動細