微生物學實驗講義-wenkub
2023-04-19 23:23:40 本頁面
【正文】 五、注意事項1．檢查細菌運動的載玻片和蓋玻片都要潔凈無油，否則將影響細菌的運動2．制水封片時菌液不可加得太多，過多的菌液會在蓋玻片下流動，因而在視野內(nèi)只見大量的細菌朝一個方向運動，從而影響了對細菌正常運動的觀察。5．先用低倍鏡找到懸滴邊緣，再用高倍鏡觀察。(510個取平均)(二) 懸滴法觀察細菌運動性1．在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。2．校正目鏡測微尺 (1) 將物鏡測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上 (2) 先用低倍鏡觀察，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當清晰地看到鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺刻度與物鏡測微尺的刻度平行。觀察時，要適當減弱光線，增加反差，如果光線很強，細菌和周圍的液體就難以辨別。 物鏡測微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格， mm，即10 pm，它不直接用于測量細胞大小，而是用于校正目鏡測微尺的每格的相對長度。實驗四 顯微測微技術及細菌運動性觀察一、目的要求1．了解測微尺的構造和使用，學會測量微生物細胞大小的方法。 mm的圓形玻片，其中央有精確的等分刻度(有50格和100格兩種)測量時，需將其放人接目鏡中的隔板上，用以測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象。 三、實驗器材1．活材料：培養(yǎng)1216h的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母2．試劑：香柏油、二甲苯、凡士林等。利用移動器移動物鏡測微尺，使兩尺的第一條刻度線相重合，再向右尋找另外兩條重合的刻度線，分別數(shù)出兩重合線之間物鏡測微尺和目鏡測微尺所占的格數(shù)，由下列公式算出目鏡測微尺每格所代表的長度。2．在蓋玻片中央滴一小滴菌液，或用接種環(huán)取12環(huán)菌液置于中央。觀察時光線要調(diào)得暗一些。六、實驗結果 1．報告測微計算過程與結果。3．學會區(qū)別死活菌的方法。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小格(即1625)，另一種是一個大方格分成25個中方格，每個中方格又分為16個小方格(即2516)，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個，每一個大方格邊長為1 mm，則每一個大方格的面積為1 mm2，蓋上蓋玻片后， mm3。2．加菌懸液樣品：將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液。2．取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下(以免產(chǎn)生氣泡)，使其蓋在菌液上，將多余菌液用吸水紙吸干。2．報告計數(shù)結果。放線菌生長到一定階段，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，通過橫割分列的方式產(chǎn)生成串的分生孢子。 放線菌的菌落早期絨狀同細菌菌落月牙狀相似，后期形成孢子菌落呈粉狀、干燥，有各種顏色呈同心圓放射狀。 3．器皿：培養(yǎng)皿，載玻片、蓋玻片、無菌滴管、鑷子、接種環(huán)、小刀(或刀片)水浴鍋，顯微鏡，超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱。4．取無菌蓋玻片，傾斜的插入培養(yǎng)基中，每皿插入58片。8．鏡檢。2．取菌懸液一環(huán)，在平板培養(yǎng)基上劃線67次，置于2830 ℃的溫箱中培養(yǎng)3 d。6．鏡檢。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。載玻片培養(yǎng)觀察法：此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。三、實驗器材 曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp.），根霉（Rhizopus sp.），乳酸石炭酸棉藍染色液，查氏培養(yǎng)基平板，無菌吸管，載玻片，蓋玻片，解剖針，鑷子，濾紙等。 2．將67 ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后， cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。 五、實驗結果 繪圖說明你所觀察到的霉菌形態(tài)特征。二、實驗原理人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的混合營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。良好的培養(yǎng)基能充分發(fā)揮菌種的生物合成能力，以達到最佳的生產(chǎn)效果；相反，若培養(yǎng)基成分、配比或原料不合適，菌種的生長繁殖及發(fā)酵效果就差。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。2．試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等。配制固體培養(yǎng)基時，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完全融化。3．過濾。已過濾的培養(yǎng)基應進行分裝。分裝時，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。5．加棉塞。制作棉塞時，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(二) 干熱滅菌裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物。打開電源開關，調(diào)節(jié)升溫旋鈕，使其緩慢升溫至6070℃時，開動鼓風開關，鼓風510min，以促使器皿上及干燥箱空間的水氣排除。紅燈是加熱升溫的信號，綠燈是切
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