微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義-wenkub
2023-04-19 23:23:40 本頁(yè)面
【正文】 五、注意事項(xiàng)1．檢查細(xì)菌運(yùn)動(dòng)的載玻片和蓋玻片都要潔凈無(wú)油，否則將影響細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)2．制水封片時(shí)菌液不可加得太多，過(guò)多的菌液會(huì)在蓋玻片下流動(dòng)，因而在視野內(nèi)只見(jiàn)大量的細(xì)菌朝一個(gè)方向運(yùn)動(dòng)，從而影響了對(duì)細(xì)菌正常運(yùn)動(dòng)的觀察。5．先用低倍鏡找到懸滴邊緣，再用高倍鏡觀察。(510個(gè)取平均)(二) 懸滴法觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性1．在潔凈蓋玻片周?chē)可僭S凡士林。2．校正目鏡測(cè)微尺 (1) 將物鏡測(cè)微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺(tái)上 (2) 先用低倍鏡觀察，將鏡臺(tái)測(cè)微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當(dāng)清晰地看到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使目鏡測(cè)微尺刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度平行。觀察時(shí)，要適當(dāng)減弱光線，增加反差，如果光線很強(qiáng)，細(xì)菌和周?chē)囊后w就難以辨別。 物鏡測(cè)微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格， mm，即10 pm，它不直接用于測(cè)量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺的每格的相對(duì)長(zhǎng)度。實(shí)驗(yàn)四 顯微測(cè)微技術(shù)及細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性觀察一、目的要求1．了解測(cè)微尺的構(gòu)造和使用，學(xué)會(huì)測(cè)量微生物細(xì)胞大小的方法。 mm的圓形玻片，其中央有精確的等分刻度(有50格和100格兩種)測(cè)量時(shí)，需將其放人接目鏡中的隔板上，用以測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。 三、實(shí)驗(yàn)器材1．活材料：培養(yǎng)1216h的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母2．試劑：香柏油、二甲苯、凡士林等。利用移動(dòng)器移動(dòng)物鏡測(cè)微尺，使兩尺的第一條刻度線相重合，再向右尋找另外兩條重合的刻度線，分別數(shù)出兩重合線之間物鏡測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺所占的格數(shù)，由下列公式算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。2．在蓋玻片中央滴一小滴菌液，或用接種環(huán)取12環(huán)菌液置于中央。觀察時(shí)光線要調(diào)得暗一些。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1．報(bào)告測(cè)微計(jì)算過(guò)程與結(jié)果。3．學(xué)會(huì)區(qū)別死活菌的方法。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成25個(gè)小格(即1625)，另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分為16個(gè)小方格(即2516)，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)，每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1 mm，則每一個(gè)大方格的面積為1 mm2，蓋上蓋玻片后， mm3。2．加菌懸液樣品：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液。2．取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下(以免產(chǎn)生氣泡)，使其蓋在菌液上，將多余菌液用吸水紙吸干。2．報(bào)告計(jì)數(shù)結(jié)果。放線菌生長(zhǎng)到一定階段，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，通過(guò)橫割分列的方式產(chǎn)生成串的分生孢子。 放線菌的菌落早期絨狀同細(xì)菌菌落月牙狀相似，后期形成孢子菌落呈粉狀、干燥，有各種顏色呈同心圓放射狀。 3．器皿：培養(yǎng)皿，載玻片、蓋玻片、無(wú)菌滴管、鑷子、接種環(huán)、小刀(或刀片)水浴鍋，顯微鏡，超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱。4．取無(wú)菌蓋玻片，傾斜的插入培養(yǎng)基中，每皿插入58片。8．鏡檢。2．取菌懸液一環(huán)，在平板培養(yǎng)基上劃線67次，置于2830 ℃的溫箱中培養(yǎng)3 d。6．鏡檢。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類(lèi)霉菌的重要依據(jù)。載玻片培養(yǎng)觀察法：此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。三、實(shí)驗(yàn)器材 曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp.），根霉（Rhizopus sp.），乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，查氏培養(yǎng)基平板，無(wú)菌吸管，載玻片，蓋玻片，解剖針，鑷子，濾紙等。 2．將67 ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后， cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 繪圖說(shuō)明你所觀察到的霉菌形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱(chēng)為培養(yǎng)基。良好的培養(yǎng)基能充分發(fā)揮菌種的生物合成能力，以達(dá)到最佳的生產(chǎn)效果；相反，若培養(yǎng)基成分、配比或原料不合適，菌種的生長(zhǎng)繁殖及發(fā)酵效果就差。由于各類(lèi)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同，因而培養(yǎng)基的種類(lèi)很多。2．試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等。配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱(chēng)好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完全融化。3．過(guò)濾。已過(guò)濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。5．加棉塞。制作棉塞時(shí)，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握，就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(二) 干熱滅菌裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物。打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)升溫旋鈕，使其緩慢升溫至6070℃時(shí)，開(kāi)動(dòng)鼓風(fēng)開(kāi)關(guān)，鼓風(fēng)510min，以促使器皿上及干燥箱空間的水氣排除。紅燈是加熱升溫的信號(hào)，綠燈是切
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