【正文】 第一部分 概述體內(nèi)藥物分析是對體內(nèi)樣本（包括生物體液、器官或組織）中的藥物、代謝物或內(nèi)源性物質(zhì)的定量分析。體內(nèi)藥物分析是藥代動力學研究和治療藥物監(jiān)測（TDM）的重要手段。藥物在臨床前研究階段，首先在試驗動物體內(nèi)進行藥代動力學和毒代動力學研究；在臨床研究階段，要對藥物作用于人體的安全性與有效性作出評價。這些研究中，建立有效的體內(nèi)藥物分析方法是首要任務。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的不斷進步，精準醫(yī)療和個體化治療成為新的理念。TDM就是采用靈敏可靠的方法，檢測患者體內(nèi)的藥物濃度，指導個體化用藥方案的制定，保證用藥的有效性與安全性。另外，監(jiān)測和研究體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)的濃度變化，對于某些疾病的診斷及治療具有重要意義；對于麻醉藥品和精神藥品濫用的檢測和運動員體內(nèi)違禁藥物的監(jiān)測，也必須依據(jù)體內(nèi)藥物分析手段和技術(shù)才能完成。藥物產(chǎn)生藥理作用的強度與其在體內(nèi)作用部位（受體組織）的濃度直接相關，而藥物在體內(nèi)主要依靠血液輸送至作用部位，因此血藥濃度可作為藥物在作用部位濃度的表觀指標，即血液是體內(nèi)藥物分析的主要樣品。另外，尿液、唾液、頭發(fā)和臟器組織等也可作為體內(nèi)樣品。藥物在體內(nèi)的某些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活性，它們在體內(nèi)的變化規(guī)律對母體藥物的藥理學與毒理學評價極為重要；機體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)往往參與機體重要的生理過程，其變化規(guī)律的異常改變也與某些疾病的發(fā)病機制密切相關。所以，體內(nèi)特定藥物代謝物和機體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)也是體內(nèi)藥物分析的目標。在測定體內(nèi)藥物及其特定代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定外，通常在測定之前要對體內(nèi)樣品進行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內(nèi)樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境與條件。體內(nèi)樣品大都具有以下性質(zhì)特點：①采樣量少，采樣量一般為數(shù)毫升至數(shù)十微升，且在特定條件下采集，不易重新獲得。②待測物濃度低，通常在109~106g/ml級，甚至低至1012g/ml。③干擾物質(zhì)多，血樣中含有蛋白質(zhì)、脂肪、尿素等有機物和Na+、K+等大量內(nèi)源性物質(zhì)通常對測定構(gòu)成干擾；且體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)可與藥物結(jié)合，也能干擾測定。因此，體內(nèi)藥物分析的特點是：①體內(nèi)樣品需經(jīng)分離與濃集，或經(jīng)適當?shù)奶幚砗蟛拍苓M行分析；②對分析方法的靈敏度及專屬性要求較高；③分析工作量大，測定數(shù)據(jù)的處理和結(jié)果的闡明繁瑣費時。生物樣本中所含藥物或其特定代謝產(chǎn)物的濃度大多較低（1010~106g/ml），且難以通過增加體內(nèi)樣品量提高方法靈敏度。目前，體內(nèi)藥物分析常用的檢測方法主要有色譜分析法、免疫分析法和生物學方法。1.色譜分析法主要包括氣相色譜法、高效液相色譜法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等，可用于大多數(shù)小分子藥物的體內(nèi)檢測。目前色譜分析法，尤其是HPLC及其聯(lián)用技術(shù)LCMS與LCMSMS已經(jīng)成為體內(nèi)樣品中藥物及其代謝產(chǎn)物分析檢測的首選方法，并逐步應用于蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子類藥物或內(nèi)源性物質(zhì)的檢測與分析。2.免疫分析法主要有放射免疫分析法（RIA）、酶免疫分析法（EIA）、熒光免疫分析法（FIA）等，多用于蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子類物質(zhì)的檢測。3.生物學方法微生物學方法常能反映藥效學的本質(zhì)，可用于抗生素類藥物的體內(nèi)分析。但生物學方法一般特異性較差，常需采用特異性高的方法（如色譜分析法）進行平行監(jiān)測。第二部分 體內(nèi)樣品的制備與貯藏一、體內(nèi)樣品的種類體內(nèi)樣品包括各種體液與組織。但是，在體內(nèi)藥物分子中最為常用的樣本是血液，它能較為準確地反應藥物在體內(nèi)的狀況。尿液中含有豐富的藥物代謝物，也被較多地使用。唾液因采集便利且有時與血漿游離藥物濃度具有相關性而時有使用。而臟器組織，除非特別需要，在治療藥物監(jiān)測（TDM）中很少使用。二、體內(nèi)樣品的采集與制備（一）血樣血樣包括全血（wholeblood）、血漿（plasma）和血清（serum），是最為常用的體內(nèi)樣品。血藥濃度檢測，除非特別說明外，通常指血漿或血清的藥物濃度測定。當藥物在體內(nèi)達到穩(wěn)態(tài)狀態(tài)時，血漿中藥物濃度能夠反應藥物在靶器官的狀況，因而血漿藥物濃度可作為體內(nèi)藥物濃度的可靠指標。1．全血的采集人體采血，通常采集靜脈血，有時從毛細血管采血（成人多從手指或耳垂取血，小兒多從腳趾取血）用于臨床化驗。根據(jù)分析方法靈敏度的要求，一般每次采血量1~5ml；動物實驗時，可直接從動脈或心臟取血。全血采集后，置含有抗凝劑（肝素、EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽等）的試管中，混合均勻，但不經(jīng)離心操作，保持血漿和血細胞處于均相，即為全血樣品。2．血漿的制備將采集的全血置含有抗凝劑的試管中，混勻后，以約1000180。g離心力，離心5~10分鐘，促進血紅細胞沉降分離，所得淡黃色上清液即為血漿。最常用的抗凝劑是肝素（heparin）。肝素是體內(nèi)正常生理成分，因此不致改變血樣的化學組成或引起藥物的變化，一般不會干擾藥物的測定。3.血清的制備采集的全血不加抗凝劑，室溫放置至少30分鐘~1小時，待血液凝固后，以約1000180。g離心力，離心10~20分鐘，上層淡黃色澄清液體即為血清。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原。因藥物與纖維蛋白幾乎不結(jié)合，所以血漿與血清中的藥物濃度通常是相同的。作為血藥濃度測定的樣品，血漿和血清可任意選用。但無論是采用血漿還是血清，現(xiàn)有的文獻、資料所列的血藥濃度，均系指血漿或血清中藥物的總濃度（游離+與血漿蛋白結(jié)合）。血漿比血清分離得快，而且制取的量約為全血的50％~60％（血清只為全血的20％~40％），多數(shù)研究者使用血漿。若血漿中含有的抗凝劑對藥物濃度測定有影響時，則應使用血清樣品。若需專門測定平均分布于血細胞內(nèi)、外的藥物濃度，則應使用全血樣品；某些情況下由于血漿內(nèi)藥物濃度波動太大，且又難以控制，或因血漿藥物濃度很低而影響測定，