【正文】 hole1．全血的采集全血采集后，置含有抗凝劑（肝素、EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽等）的試管中，混合均勻，但不經(jīng)離心操作，保持血漿和血細胞處于均相，即為全血樣品。g離心力，離心5~10分鐘，促進血紅細胞沉降分離，所得淡黃色上清液即為血漿。血清的制備在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原。血漿比血清分離得快，而且制取的量約為全血的50％~60％（血清只為全血的20％~40％），多數(shù)研究者使用血漿。（二）尿樣體內(nèi)藥物清除主要通過腎臟排泄，經(jīng)尿液排出。健康人排出的尿液是淡黃色或黃褐色的，~。保存時間為24~36小時，可置冰箱（4℃）中；長時間保存時，應冰凍（?20℃或?80~?70℃）。測定尿液中藥物的總量時，應收集服藥后一定時間內(nèi)（如24小時）各時間段排泄的全部尿液，記錄體積；量取一部分測定尿液藥物濃度，乘以尿液量，計算尿藥排泄總量。正常成年人唾液分泌量每天約為1～。放置后分成泡沫部分、透明部分及乳白色沉淀部分三層。（四）組織在藥物的動物試驗及臨床上由于過量服用藥物而引起的中毒死亡時，藥物在臟器組織中的分布情況可為藥物的體內(nèi)動力學過程提供重要信息。第三部分 體內(nèi)樣品的前處理去除蛋白和液液萃取法在測定體內(nèi)藥物及其代謝物時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后直接測定外，一般在測定之前要對樣品進行適當?shù)念A處理，為藥物的測定創(chuàng)造良好條件。如采用HPLC法測定，為防止蛋白質(zhì)在色譜柱上的沉積、堵塞，需要除去血漿蛋白質(zhì)。（一）蛋白沉淀法在測定血樣時，首先應去除蛋白質(zhì)。上清液偏堿性，~。g）約5分鐘便可將析出的蛋白質(zhì)沉淀完全。常用的中性鹽有飽和硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸鈉等。因加入了強酸，上清液呈強酸性（pH當待測物熱穩(wěn)定性好時，可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質(zhì)沉淀。extraction，LLE）液液萃取法是傳統(tǒng)的分離、濃集方法。揮去提取溶劑的常用方法是直接通入氮氣流吹干；對于易隨氣流揮發(fā)或遇熱不穩(wěn)定的藥物，可采用減壓法揮去溶劑。 一般有機相與水相（體內(nèi)樣品）體積比為1∶1～5∶1。對于堿性藥物最佳pH為高于pKa提取操作液液提取法的優(yōu)點在于它的選擇性和低廉的運行成本，以及可對樣品進行凈化和濃集的特點。SPE技術亦稱液固萃取技術，它的應用大大縮短了樣品處理時間，同時可避免乳化現(xiàn)象，而且便于自動化操作。SPE的填料種類繁多，可分成親脂型（大孔吸附樹脂、親脂性鍵合硅膠）、親水型（硅膠、硅藻土、棉纖維）和離子交換型三類，其中親脂型用得最多。C1BondElut（2）SPE操作步驟使用親脂性鍵合相硅膠SPE柱的一般操作步驟如下。②溶劑交換（平衡）③加樣選擇適當?shù)南疵撊軇┫疵摯郎y物，收集洗脫液，揮干溶劑備用或直接進行在線分析。③萃取堿性藥物時，洗脫劑中常需加酸、有機胺或氨水、醋酸銨或離子對試劑。超濾法超濾法（ultrafiltration）是以多孔性半透膜（超濾膜）作為分離介質(zhì)的一種膜分離技術。與通常的分離方法相比，超濾具有不引入化學試劑，沒有相態(tài)變化，對待測藥物的破壞性小等優(yōu)點。內(nèi)源性物質(zhì)有葡萄糖醛酸、硫酸、甘氨酸、谷胱甘肽和醋酸等，特別是前兩種為最重要的內(nèi)源性物質(zhì)。為了測定尿液中藥物總量，需對綴合物進行水解，將綴合物中的藥物釋出。酸的用量和濃度、反應時間及溫度等條件，隨藥物的不同而異。實際應用中最常用的是葡萄糖醛酸苷酶硫酸酯酶的混合酶。盡管如此，酶水解仍被優(yōu)先選用。綴合物（主要是硫酸酯）往往可通過加入的溶劑在萃取過程中被分解，稱作溶劑解（solvolysis）?；瘜W衍生化某些藥物或代謝物極性大、揮發(fā)性低或?qū)z測器不夠靈敏，使用常規(guī)的HPLC或GC難以有效測定，需要先進行衍生化反應，然后測定衍生物。二、體內(nèi)分析方法的驗證體內(nèi)分析方法驗證的內(nèi)容包含分析方法的效能指標、樣品穩(wěn)定性及提取回收率。sample，QC）在空白生物介質(zhì)中加入已知量待測物標準物質(zhì)制成的系列濃度的樣品，用于建立標準曲線，計算質(zhì)控（QC）樣品和未知樣品中待測物的濃度。分別測定待測藥物、活性代謝物的標準物質(zhì)溶液，及6個不同個體的空白生物介質(zhì)和QC樣品，比較圖譜或檢測信號，確證內(nèi)源性物質(zhì)對分析方法無干擾。測定QC樣品和6個不同個體用藥后的實際體內(nèi)樣品，比較圖譜或檢測信號，確證其他代謝產(chǎn)物對分析方法無干擾。測定待測藥物及伍用藥物標準物質(zhì)溶液、QC樣品和添加有伍用藥物的干擾樣品，比較圖譜或檢測信號，確證伍用藥物對分析方法無干擾。curve），反映了體內(nèi)分析所測定藥物的濃度與儀器響應值（如HPLC峰面積）的關系，一般用回歸方程來評價。squares）。在此系列中，若體內(nèi)平均達峰濃度為50，其1/，考慮到個體差異，設定最高濃度為100，最低濃度為1，可覆蓋全部待測體內(nèi)樣品中的藥物濃度。limitof測定方法是取同一生物介質(zhì)，制備至少5個獨立的標準樣品，其濃度應使信噪比（S/N）大于5，依法進行精密度與準確度驗證。run）內(nèi)難以完成全部體內(nèi)樣品的分析。recovery,測定法在測定批內(nèi)RSD時，每一濃度至少制備并測定5個樣品。QC樣品濃度用回歸方程計算。（五）樣品穩(wěn)定性樣品穩(wěn)定性驗證內(nèi)容包括在1個分析批內(nèi)的短期穩(wěn)定性和在整個樣品分析期間的長期穩(wěn)定性。5%以內(nèi)。1．測定法將測得的QC樣品的信號強度（如HPLC峰面積）與標準對照樣品測得的信號強度比較，按下式計算提取回收率： 為QC樣品經(jīng)制備處理后的信號強度（如HPLC峰面積）；AS為標準對照樣品的信號強度（同AT）。在分析過程質(zhì)控中，推薦由獨立的人員隨行配制不同濃度的QC樣品對分析方法進行