【正文】 的不對稱性微孔膜、按照截留分子量的大小，可分離30一些含羥基、羧基、氨基和巰基的藥物，可與內(nèi)源性物質(zhì)葡萄糖醛酸形成葡萄糖醛酸苷綴合物；還有一些含酚羥基、芳胺及醇類藥物與內(nèi)源性物質(zhì)硫酸形成硫酸酯綴合物。這些條件應(yīng)通過實(shí)驗來確定。~，37℃培育數(shù)小時進(jìn)行水解。例如尿中的甾體硫酸酯在pH分析方法的效能指標(biāo)包括特異性、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍、定量下限、精密度與準(zhǔn)確度。（一）特異性方法的特異性，又稱選擇性，用以證明該方法所測定的物質(zhì)是預(yù)期的待測物（原形藥物或特定的活性代謝物），而體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)、降解產(chǎn)物及其他共同使用的藥物（伍用藥物）不干擾樣品的測定。必要時可通過HPLCDAD和LCMS（或LCMS/MS）確證被測定色譜峰的純度。最常用的回歸分析法為最小二乘法（least內(nèi)標(biāo)溶液的濃度一般選擇與系列“標(biāo)準(zhǔn)溶液”的幾何平均濃度，即標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間濃度（如系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為50和100時，中間濃度為10）相當(dāng)。of在藥代動力學(xué)與生物利用度研究中，LLOQ應(yīng)能滿足3~5個消除半衰期時體內(nèi)樣品中的藥物濃度或Cmax的1/20～1/10的藥物濃度的測定。RR）或相對偏差（relative為獲得批間RSD，應(yīng)在不同天（一般為3天）連續(xù)制備并測定QC樣品，至少有連續(xù)3個分析批，不少于45個樣品的分析結(jié)果。 （六）提取回收率提取回收率（extraction 在藥代動力學(xué)和生物利用度研究中，高、中、低QC樣品的提取回收率應(yīng)一致、精密和可重現(xiàn)。2．限度要求 另取空白生物介質(zhì)，照QC樣品同法處理后，加入等量的標(biāo)準(zhǔn)溶液（必要時除去溶劑），同法制備相同的高、中、低3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)對照樣品，同法測定。測定法方法是取高、低兩個濃度的QC樣品，于適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，在上述規(guī)定條件下存放不同時間后測定，每個QC樣品重復(fù)測定3次，其平均值的偏差應(yīng)在零時測定值的177。精密度一般要求RSD不超過15%，在LLOQ附近RSD應(yīng)不超過20%。每個QC樣品測定1次。準(zhǔn)確度（accuracy）是指在確定的分析條件下測得的體內(nèi)樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度，通常用QC樣品的實(shí)測濃度與標(biāo)示濃度的相對回收率（relative（三）定量下限定量下限（LLOQ）是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示方法的靈敏度，即測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量范圍要能覆蓋全部待測的體內(nèi)樣品濃度范圍，定量上限（upper濃度系列一般為等比梯度模式，通常比例常數(shù)約為2，如50、100。curve）或工作曲線（workingsample）第四部分 體內(nèi)分析方法的建立與方法驗證一、體內(nèi)分析方法建立的一般程序取待測藥物或其特定的活性代謝產(chǎn)物、內(nèi)標(biāo)等的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，進(jìn)行條件試驗，通過調(diào)整色譜條件，使待測藥物與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)具有良好的色譜參數(shù)及峰面積，并有效避開內(nèi)源性物質(zhì)的干擾；同時選擇適當(dāng)?shù)臋z測器，以獲得足夠的檢測靈敏度。前者可專一地水解藥物的葡萄糖醛酸苷綴合物，后者水解藥物的硫酸酯綴合物。酸水解時，可加入適量的鹽酸溶液。綴合物水解藥物或其代謝物與體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合生成的產(chǎn)物稱為綴合物（conjugate）。全自動化儀器是通過柱切換技術(shù)實(shí)現(xiàn)的，利用切換閥使固相萃取小柱直接聯(lián)入流路中。④淋洗用甲醇潤濕小柱，活化填料，以使固相表面易于和待測組分發(fā)生分子間相互作用，同時可以除去填料中可能存在的干擾物質(zhì)。常見的商品SPE柱有SepPakextraction，SPE）技術(shù)。這樣，就可使得90%的藥物以非電離形式存在，而更易溶于有機(jī)溶劑中。溶劑的選擇（二）液液萃取法（liquidliquid含藥物血清與強(qiáng)酸的比例為1∶，高速離心約2分鐘，就可以除去90%以上的蛋白質(zhì)。加入中性鹽，溶液的離子強(qiáng)度發(fā)生變化，部分蛋白質(zhì)的電性被中和，蛋白質(zhì)因分子間電排斥作用減弱而凝聚。含藥物的血漿或血清與水溶性有機(jī)溶劑的體積比為1:（2~3）時，可以將90%以上的蛋白質(zhì)除去。特殊情況下需進(jìn)行綴合物水解、化學(xué)衍生化等。滿足測定方法的要求勻漿化操作系將組織樣品中加入一定量的水或緩沖液，在刀片式勻漿機(jī)中勻漿，使待測藥物釋放、溶解，分取上清液測定。唾液樣品采集后，應(yīng)立即測量其除去泡沫部分的體積。但由于易受食物種類、飲水多少、排汗情況等影響，常使尿藥濃度變化較大，故測定尿液中藥物濃度時，一般采用時間尿（一定時間區(qū)間的尿液），以某一時間段或單位時間內(nèi)尿中藥物的總量（排泄量或排泄率）表示。尿樣包括隨時尿、晨尿、白天尿、夜間尿及時間尿幾種。但無論是采用血漿還是血清，現(xiàn)有的文獻(xiàn)、資料所列的血藥濃度，均系指血漿或血清中藥物的總濃度（游離+與血漿蛋白結(jié)合）。3.根據(jù)分析方法靈敏度的要求，一般每次采血量1~5ml；動物實(shí)驗時，可直接從動脈或心臟取血。而臟器組織，除非特別需要，在治療藥物監(jiān)測（TDM）中很少使用。生物學(xué)方法體內(nèi)樣品大都具有以下性質(zhì)特點(diǎn)：①采樣量少，采樣量一般為數(shù)毫升至數(shù)十微升，且在特定條件下采集，不易重新獲得。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷進(jìn)步，精準(zhǔn)醫(yī)療和個體化治療成為新的理念。這些研究中，建立有效的體內(nèi)藥物分析方法是首要任務(wù)。在測定體內(nèi)藥物及其特定代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定外，通常在測定之前要對體內(nèi)樣品進(jìn)行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內(nèi)樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境與條件。色譜分析法3.唾液因采集便利且有時與血漿游離藥物濃度具有相關(guān)性而時有使用。人體采血，通常采集靜脈血，有時從毛細(xì)血管采血（成人多從手指或耳垂取血，小兒多從腳趾取血）用于臨床化驗。肝素是體內(nèi)正常生理成分，因此不致改變血樣的化學(xué)組成或引起藥物的變化