質(zhì)粒酶切鑒定ppt課件(已修改)
2025-06-07 00:15 本頁面
【正文】 質(zhì)粒 DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?學(xué)習(xí)和掌握限制性內(nèi)切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳的操作方法，并理解限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具，瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定 DNA片段的有效方法。 2. 相關(guān)基礎(chǔ)知識 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能識別雙鏈 DNA分子特異性核酸序列的 DNA水解酶。是體外剪切基因片段的重要工具，所以常常與核酸聚合酶、連接酶以及末端修飾酶等一起稱為工具酶。限制性核酸內(nèi)切酶不僅是 DNA重組中重要的工具，而且還可以用于基因組酶切圖譜的鑒定。1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象2) 核酸限制性內(nèi)切酶的類型3) 核酸限制性內(nèi)切酶的基本特性4) 同裂酶和同尾酶5) 核酸限制性內(nèi)切酶的命名法6) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素1) 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象限制與修飾系統(tǒng)是細(xì)胞的一種防衛(wèi)手段 。 各種細(xì)菌都能合成一種或幾種能夠切割 DNA雙鏈的核酸內(nèi)切酶， 它們以此來限制外源 DNA存在于自身細(xì)胞內(nèi)，但合成 這種酶的細(xì)胞自身的 DNA不受影響，因?yàn)檫@種細(xì)胞還合成了一種修飾酶，對自身的 DNA進(jìn)行了修飾，限制性酶對修飾過的 DNA不能起作用。 這種現(xiàn)象被稱為寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象。2)限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系 以及 切斷核酸的情況不同，分為三類 ： Ⅰ 型 Ⅱ 型 * Ⅲ 型第一類（ I型）限制性內(nèi)切酶 能識別專一的核苷酸順序，并在識別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割 DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨機(jī)的。這類限制性內(nèi)切酶在 DNA重組技術(shù)或基因工程中用處不大，無法用于分析 DNA結(jié)構(gòu)或克隆基因。這類酶如 EcoB、 EcoK等。 第二類 (II型 )限制性內(nèi)切酶 能識別專一的核苷酸順序，并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈。由于這類限制性內(nèi)切酶的識別和切割的核苷酸都是專一的。因此，這種限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一。這種酶識別的專一核苷酸順序最常見的是4個(gè)或 6個(gè)核苷酸，少數(shù)也有識別 5個(gè)核苷酸以及 7個(gè)、 8個(gè)、 9個(gè)、 10個(gè)和 11個(gè)核苷酸的。 II 型限制性內(nèi)切酶的識別順序是一個(gè)回文對稱順序，即有一個(gè)中心對稱軸，從這個(gè)軸朝二個(gè)方向 “ 讀 ” 都完全相同。這種酶的切割可以有兩種方式
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