酯酶與氧化酶ppt課件(已修改)
2025-06-07 00:30 本頁面
【正文】 Esterase 一、基本概念 1. 定義： 酯酶 (Esterase), 催化作用于酯類物質(zhì)的酯健 ,使之水解的酶的總稱 ,包括磷酸酶 , 羧酸酯水解酶 , 硫酸酯水解酶等。 羧酸酯水解酶 (Carboxylic ester hydrolase)，是所有能催化羧酸酯水解的酶的總稱（或稱酯酶），其作用是水解脂肪族酯和芳香族酯，催化的反應(yīng)式： R C O O R,+ H 2 O R C O O H + R,O H水解酶酯化酯 脂肪酸 醇羧酸 2. 酯和酯鍵 酯由來自 羧酸的?；?和來自 醇的烴氧基 組成，是羧酸與醇反應(yīng) 失水 而生成，即羧基上羥基和醇羥基上的氫共同脫水。通式 RCOOR`，結(jié)構(gòu)上可看作羧酸中的羥基被 烴氧基（ OR`） 取代的產(chǎn)物，亦可看作醇中羥基的氫原子被 酰基（ RCO） 取代的產(chǎn)物。 R C O O R,+ H 2 O R C O O H + R,O H水解酶酯化酯 脂肪酸 醇羧酸 酰基 （ RCO）是含氧酸分子（ RCOOH）中 去掉酸性O(shè)H后（即能離解出 H+的 OH基）余下的基團(tuán)。包括丙?；?(丙酸）、苯甲酰基（苯甲酸）、草?；ú菟幔?、苯磺?；ū交撬幔?、亞硝?；▉喯跛幔?、亞硫?；▉喠蛩幔⒘柞；姿幔? COO R 1酯鍵?；?烴氧基RA R COO A R 1酯鍵酰基 烴氧基 3. 酯酶與水解反應(yīng) 羧酸酯酶 水解 羧酸酯 為 醇 和 羧酸 芳香酯酶 水解 乙酸苯酯 為 酚 和 乙酸 脂肪酶水解甘油三酯為甘油二酯和脂肪酸 乙酰酯酶水解乙酰酯為醇和乙酸 乙酰膽堿酯酶 水解 乙酰膽堿 為 膽堿 和 乙酸 膽堿酯酶 水解 酯酰膽堿 為 膽堿 和 羧酸 根據(jù)酶對(duì)底物、 pH、激活劑、抑制劑的反應(yīng)特點(diǎn)，可將酯酶分為 20余種，在生物化學(xué)上統(tǒng)稱為酯酶，只有一部分可用組化的方法證明。通常根據(jù)對(duì)底物是否具有特異性，可分為 特異性 與 非特異性酯酶 兩種。分解 短鏈 （ C2～ C4）低級(jí)脂肪酸酯 多為非特異性酯酶，如芳香基酯酶、羧酸酯酶和乙酰酯酶。特異性酯酶據(jù)其底物特異性可分為，分解 長鏈 (C8以上）高級(jí)脂肪酸酯 的酶稱 酯酶 (Lipase)， 分解乙酰膽堿的 乙酰膽堿酯酶 ，分解酯酰膽堿的 膽堿酯酶 。 二、酯酶的分類 （一）非特異性酯酶 (nonspecific esterase)： 無底物特異性。根據(jù) E600, DFP, PCMB對(duì)它們的抑制作用不同，分為 3類 . 1. 芳香 \基酯酶 (Aromesterase)，即 A酯酶，亦稱有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 I。 （１）底物： ?－萘酚乙酯 萘酚ＡＳ乙酸酯類 吲哚酚乙酸酯類 O C O C H 3O C O C H 3C O N H C 6 H 5NO C O C H 3H（２）完全抑制 ① 10mmol/L 磷酸二乙基對(duì)硝基苯酯 (E 600) ② 1mmol/L CuSO4 ③ 1mmol/L Pb(NO3)2 ④ 10mmol/L AgNO3 ⑤ 100 ?mol/L 對(duì)氯高汞苯甲酸 (PCMB) （３）激活 １ mmol/L 半胱氨酸 (Cysteine) ２、脂肪族酯酶（ aliesterase),即 B酯酶， 亦稱有機(jī)磷酸敏感性酯酶 （１）底物 ?－萘酚乙酯； 萘酚ＡＳ乙酸酯類； 吲哚酚乙酸 酯類。 （２）完全抑制 10?mol/L 磷酸二乙基對(duì)硝基苯酯 (E600) 100?mol/L 毒扁豆堿 (Eserine) 10mmol/L AgNO3 ３ .乙酰酯酶 (acetylesterase)：即 C酯酶， 又稱有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ （１）底物 吲哚酚乙酸酯類 萘酚 AS乙酸酯類 （２）完全抑制 10mmol/L ?苯丙酸 10mmol/L AgNO3 1mmol/L CuSO4 （３） 激活 100?mol/L 對(duì)氯高汞苯甲酸 (PCMB) 100?mol/L 苯氯化汞 非特異性酯酶 A酯酶 B酯酶 C酯酶 別稱 芳香 /芳基酯酶 , 有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅰ 羧酸酯酶 , 芳香族酯酶 , 有機(jī)磷酸敏感性酯酶 乙酰酯酶 , SH抑制性抵抗性酯酶 , 有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ E600 (104mol/L) 抑制 PCMB (104mol/L) 抑制 激活 （二）特異性酯酶 (Specific esterase) 根據(jù)底物的特異性分為三種 : １、脂酶 (Lipase) 底物：高級(jí)脂肪酸 抑制劑：毒扁豆堿 (eserine) 激活劑： %?；悄懰徕c ２ 、 膽堿酯酶 (cholinesterase) 特異性底物：丁酰硫代膽堿 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 乙酰膽堿酯酶 (Acetylcholinesterase) 底物： 乙酰－ ?－甲基硫代膽堿 乙酰硫代膽堿 ３－乙酰基－５－吲哚重氮鹽 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 酯酶的鑒別 １、根據(jù)底物特異性 選擇特異底物配制孵育液 ２、選擇一定濃度的抑制劑或激活劑 通常使用抑制劑的方法是向底物液中加抑制劑或?qū)⑶衅谝种埔褐薪n。 （一）顯示法 １、反應(yīng)原理 在酶作用下，從底物游離出來的 ?萘酚 AS與 重氮鹽 偶聯(lián)形成 偶氮色素 ，同時(shí)沉著于酶的存在部位，通過偶氮色素顯色，間接證明酶的存在部位。 ?萘酚系統(tǒng) 可用重氮鹽堅(jiān)牢藍(lán)Ｂ，堅(jiān)牢藍(lán) RR，堅(jiān)牢紅 RC鹽。 萘酚 AS系統(tǒng) 用柘榴石（黃色）、 GB鹽、堅(jiān)牢紅 RC、堅(jiān)牢紅紫 LC鹽。 三、非特異性酯酶 O C OC H3C O N H C 6 H 5酯酶C OO HC6H5N H+ C H3C O O H萘酚 A S 醋酸萘酚 A S乙酸C OO HC6H5N H+萘酚 A SN HC OC LO C H3N N C LNO C H3C LC ON HN
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