酯酶與氧化酶ppt課件(已修改)
2025-06-07 00:30 本頁面
【正文】 Esterase 一、基本概念 1. 定義： 酯酶 (Esterase), 催化作用于酯類物質的酯健 ,使之水解的酶的總稱 ,包括磷酸酶 , 羧酸酯水解酶 , 硫酸酯水解酶等。 羧酸酯水解酶 (Carboxylic ester hydrolase)，是所有能催化羧酸酯水解的酶的總稱（或稱酯酶），其作用是水解脂肪族酯和芳香族酯，催化的反應式： R C O O R,+ H 2 O R C O O H + R,O H水解酶酯化酯 脂肪酸 醇羧酸 2. 酯和酯鍵 酯由來自 羧酸的?；?和來自 醇的烴氧基 組成，是羧酸與醇反應 失水 而生成，即羧基上羥基和醇羥基上的氫共同脫水。通式 RCOOR`，結構上可看作羧酸中的羥基被 烴氧基（ OR`） 取代的產物，亦可看作醇中羥基的氫原子被 酰基（ RCO） 取代的產物。 R C O O R,+ H 2 O R C O O H + R,O H水解酶酯化酯 脂肪酸 醇羧酸 酰基 （ RCO）是含氧酸分子（ RCOOH）中 去掉酸性OH后（即能離解出 H+的 OH基）余下的基團。包括丙酰基 (丙酸）、苯甲酰基（苯甲酸）、草酰基（草酸）、苯磺?；ū交撬幔?、亞硝?；▉喯跛幔喠蝓；▉喠蛩幔?、磷?；姿幔? COO R 1酯鍵?；?烴氧基RA R COO A R 1酯鍵?；?烴氧基 3. 酯酶與水解反應 羧酸酯酶 水解 羧酸酯 為 醇 和 羧酸 芳香酯酶 水解 乙酸苯酯 為 酚 和 乙酸 脂肪酶水解甘油三酯為甘油二酯和脂肪酸 乙酰酯酶水解乙酰酯為醇和乙酸 乙酰膽堿酯酶 水解 乙酰膽堿 為 膽堿 和 乙酸 膽堿酯酶 水解 酯酰膽堿 為 膽堿 和 羧酸 根據酶對底物、 pH、激活劑、抑制劑的反應特點，可將酯酶分為 20余種，在生物化學上統稱為酯酶，只有一部分可用組化的方法證明。通常根據對底物是否具有特異性，可分為 特異性 與 非特異性酯酶 兩種。分解 短鏈 （ C2～ C4）低級脂肪酸酯 多為非特異性酯酶，如芳香基酯酶、羧酸酯酶和乙酰酯酶。特異性酯酶據其底物特異性可分為，分解 長鏈 (C8以上）高級脂肪酸酯 的酶稱 酯酶 (Lipase)， 分解乙酰膽堿的 乙酰膽堿酯酶 ，分解酯酰膽堿的 膽堿酯酶 。 二、酯酶的分類 （一）非特異性酯酶 (nonspecific esterase)： 無底物特異性。根據 E600, DFP, PCMB對它們的抑制作用不同，分為 3類 . 1. 芳香 \基酯酶 (Aromesterase)，即 A酯酶，亦稱有機磷酸抵抗性酯酶 I。 （１）底物： ?－萘酚乙酯 萘酚ＡＳ乙酸酯類 吲哚酚乙酸酯類 O C O C H 3O C O C H 3C O N H C 6 H 5NO C O C H 3H（２）完全抑制 ① 10mmol/L 磷酸二乙基對硝基苯酯 (E 600) ② 1mmol/L CuSO4 ③ 1mmol/L Pb(NO3)2 ④ 10mmol/L AgNO3 ⑤ 100 ?mol/L 對氯高汞苯甲酸 (PCMB) （３）激活 １ mmol/L 半胱氨酸 (Cysteine) ２、脂肪族酯酶（ aliesterase),即 B酯酶， 亦稱有機磷酸敏感性酯酶 （１）底物 ?－萘酚乙酯； 萘酚ＡＳ乙酸酯類； 吲哚酚乙酸 酯類。 （２）完全抑制 10?mol/L 磷酸二乙基對硝基苯酯 (E600) 100?mol/L 毒扁豆堿 (Eserine) 10mmol/L AgNO3 ３ .乙酰酯酶 (acetylesterase)：即 C酯酶， 又稱有機磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ （１）底物 吲哚酚乙酸酯類 萘酚 AS乙酸酯類 （２）完全抑制 10mmol/L ?苯丙酸 10mmol/L AgNO3 1mmol/L CuSO4 （３） 激活 100?mol/L 對氯高汞苯甲酸 (PCMB) 100?mol/L 苯氯化汞 非特異性酯酶 A酯酶 B酯酶 C酯酶 別稱 芳香 /芳基酯酶 , 有機磷酸抵抗性酯酶 Ⅰ 羧酸酯酶 , 芳香族酯酶 , 有機磷酸敏感性酯酶 乙酰酯酶 , SH抑制性抵抗性酯酶 , 有機磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ E600 (104mol/L) 抑制 PCMB (104mol/L) 抑制 激活 （二）特異性酯酶 (Specific esterase) 根據底物的特異性分為三種 : １、脂酶 (Lipase) 底物：高級脂肪酸 抑制劑：毒扁豆堿 (eserine) 激活劑： %?；悄懰徕c ２ 、 膽堿酯酶 (cholinesterase) 特異性底物：丁酰硫代膽堿 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 乙酰膽堿酯酶 (Acetylcholinesterase) 底物： 乙酰－ ?－甲基硫代膽堿 乙酰硫代膽堿 ３－乙?；担胚嶂氐} 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 酯酶的鑒別 １、根據底物特異性 選擇特異底物配制孵育液 ２、選擇一定濃度的抑制劑或激活劑 通常使用抑制劑的方法是向底物液中加抑制劑或將切片在抑制液中浸漬。 （一）顯示法 １、反應原理 在酶作用下，從底物游離出來的 ?萘酚 AS與 重氮鹽 偶聯形成 偶氮色素 ，同時沉著于酶的存在部位，通過偶氮色素顯色，間接證明酶的存在部位。 ?萘酚系統 可用重氮鹽堅牢藍Ｂ，堅牢藍 RR，堅牢紅 RC鹽。 萘酚 AS系統 用柘榴石（黃色）、 GB鹽、堅牢紅 RC、堅牢紅紫 LC鹽。 三、非特異性酯酶 O C OC H3C O N H C 6 H 5酯酶C OO HC6H5N H+ C H3C O O H萘酚 A S 醋酸萘酚 A S乙酸C OO HC6H5N H+萘酚 A SN HC OC LO C H3N N C LNO C H3C LC ON HN
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