酯酶與氧化酶ppt課件-wenkub
2023-06-10 00:30:07 本頁(yè)面
【正文】 鉀 (%) 5ml ②亞鐵氰化鉀 (%) 5ml ③ ④ 2%CaCL2 10ml ⑤蒸餾水 10ml 3. 操作步驟 (1)新鮮組織恒冷箱切片； (2)切片入孵育液， 37℃ 或室溫 5120min； (3)蒸餾水洗； (4)甘油明膠封固。 ?醋酸萘酚酯 萘酚 AS乙酸酯 堅(jiān)牢藍(lán) B鹽 堅(jiān)牢藍(lán) BB鹽 1. 反應(yīng)原理 在非特異性酯酶作用下， 醋酸吲哚酚酯 被水解為吲哚酚 和 醋酸 ，吲哚酚與 六氮鹽 偶聯(lián)成 偶氮色素 。堅(jiān)牢紅 TR為紫紅色，堅(jiān)牢紅 RC為暗紅色，堅(jiān)牢藍(lán) RR為青銅色。 萘酚 AS系統(tǒng) 用柘榴石（黃色）、 GB鹽、堅(jiān)牢紅 RC、堅(jiān)牢紅紫 LC鹽。 （１）底物： ?－萘酚乙酯 萘酚ＡＳ乙酸酯類 吲哚酚乙酸酯類 O C O C H 3O C O C H 3C O N H C 6 H 5NO C O C H 3H（２）完全抑制 ① 10mmol/L 磷酸二乙基對(duì)硝基苯酯 (E 600) ② 1mmol/L CuSO4 ③ 1mmol/L Pb(NO3)2 ④ 10mmol/L AgNO3 ⑤ 100 ?mol/L 對(duì)氯高汞苯甲酸 (PCMB) （３）激活 １ mmol/L 半胱氨酸 (Cysteine) ２、脂肪族酯酶（ aliesterase),即 B酯酶， 亦稱有機(jī)磷酸敏感性酯酶 （１）底物 ?－萘酚乙酯； 萘酚ＡＳ乙酸酯類； 吲哚酚乙酸 酯類。分解 短鏈 （ C2～ C4）低級(jí)脂肪酸酯 多為非特異性酯酶，如芳香基酯酶、羧酸酯酶和乙酰酯酶。 R C O O R,+ H 2 O R C O O H + R,O H水解酶酯化酯 脂肪酸 醇羧酸 酰基 （ RCO）是含氧酸分子（ RCOOH）中 去掉酸性O(shè)H后（即能離解出 H+的 OH基）余下的基團(tuán)。Esterase 一、基本概念 1. 定義： 酯酶 (Esterase), 催化作用于酯類物質(zhì)的酯健 ,使之水解的酶的總稱 ,包括磷酸酶 , 羧酸酯水解酶 , 硫酸酯水解酶等。包括丙酰基 (丙酸）、苯甲?；ū郊姿幔?、草酰基（草酸）、苯磺?；ū交撬幔?、亞硝酰基（亞硝酸）、亞硫?；▉喠蛩幔?、磷?；姿幔?。特異性酯酶據(jù)其底物特異性可分為，分解 長(zhǎng)鏈 (C8以上）高級(jí)脂肪酸酯 的酶稱 酯酶 (Lipase)， 分解乙酰膽堿的 乙酰膽堿酯酶 ，分解酯酰膽堿的 膽堿酯酶 。 （２）完全抑制 10?mol/L 磷酸二乙基對(duì)硝基苯酯 (E600) 100?mol/L 毒扁豆堿 (Eserine) 10mmol/L AgNO3 ３ .乙酰酯酶 (acetylesterase)：即 C酯酶， 又稱有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ （１）底物 吲哚酚乙酸酯類 萘酚 AS乙酸酯類 （２）完全抑制 10mmol/L ?苯丙酸 10mmol/L AgNO3 1mmol/L CuSO4 （３） 激活 100?mol/L 對(duì)氯高汞苯甲酸 (PCMB) 100?mol/L 苯氯化汞 非特異性酯酶 A酯酶 B酯酶 C酯酶 別稱 芳香 /芳基酯酶 , 有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅰ 羧酸酯酶 , 芳香族酯酶 , 有機(jī)磷酸敏感性酯酶 乙酰酯酶 , SH抑制性抵抗性酯酶 , 有機(jī)磷酸抵抗性酯酶 Ⅱ E600 (104mol/L) 抑制 PCMB (104mol/L) 抑制 激活 （二）特異性酯酶 (Specific esterase) 根據(jù)底物的特異性分為三種 : １、脂酶 (Lipase) 底物：高級(jí)脂肪酸 抑制劑：毒扁豆堿 (eserine) 激活劑： %牛磺膽酸鈉 ２ 、 膽堿酯酶 (cholinesterase) 特異性底物：丁酰硫代膽堿 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 乙酰膽堿酯酶 (Acetylcholinesterase) 底物： 乙酰－ ?－甲基硫代膽堿 乙酰硫代膽堿 ３－乙?；担胚嶂氐} 抑制劑：四異丙基氨基焦酰胺 (ISOOMPA) 酯酶的鑒別 １、根據(jù)底物特異性 選擇特異底物配制孵育液 ２、選擇一定濃度的抑制劑或激活劑 通常使用抑制劑的方法是向底物液中加抑制劑或?qū)⑶衅谝种埔褐薪n。 三、非特異性酯酶 O C OC H3C O N H C 6 H 5酯酶C OO HC6H5N H+ C H3C O O H萘酚 A S 醋酸萘酚 A S乙酸C OO HC6H5N H+萘酚 A SN HC OC LO C H3N N C LNO C H3C LC ON HNN H C6H5O HC O可林思 L B 鹽偶氮色素2. 孵育液 （萘酚 AS乙酸酯法 Pearse,1972） 1%萘酚 AS醋酸鹽（丙酮溶液） (底物） (pH ) 10ml（緩沖液） 堅(jiān)牢藍(lán) B鹽 30mg（重氮鹽） 攪拌過濾使用 3. 操作步驟 (1)新鮮組織恒冷箱切片； (2)入孵液，室溫或 37℃ 20 30min； (3)流水沖洗 2min； (4)2%甲基綠 復(fù)染細(xì)胞核； (5)流水沖洗 35min； (6)甘油明膠封固。 5. 組織處理說明 非特異性酯酶類對(duì)固定的抵抗性較強(qiáng)，可用醛類固定液固定后冰凍切片。 NO C O RH+ H 2 OHNO H+ R C O O H酯酶吲哚酚酯 吲哚酚 羧酸 + 六氮鹽 偶氮色素 2. 孵育液 醋酸吲哚酚 3mg 二甲基甲酰胺 六氮化副薔薇苯胺緩沖液 10ml （ 六氮化副薔薇苯胺 [pH56],用 1
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