限制性核酸內(nèi)切酶的命名(已修改)
2025-02-01 12:53 本頁面
【正文】 第一章 工具酶 主要內(nèi)容 ? 一．限制性核酸 內(nèi)切酶 ? 二． 其它工具酶 ? 1． DNA連接酶 ? 2．聚合酶 ? 3． DNA修飾酶 ? 4. 細(xì)胞裂解酶 一．限制性核酸 內(nèi)切酶 ? 定義 與 特點(diǎn) ? 核酸內(nèi)切酶的 發(fā)現(xiàn) ? 3. 限制和修飾作用的分子機(jī)制 ? ? ? 6. II型限制性核酸內(nèi)切酶的基本識別特性 ? ? 8. II 型限制性核酸內(nèi)切酶酶解反應(yīng)的操作 ? 酶活性的 因素及解決方法 ? star活性 ? ? ? 定義 ： 一類能識別雙鏈 DNA中特殊核苷酸序列，并使每條鏈的一個磷酸二酯鍵斷開的內(nèi)脫氧核糖核苷酸酶。 ? 特點(diǎn)： ? ▲ 存在 于任何一種 原核細(xì)菌 中 . ? ▲ 在 特異位點(diǎn) 上催化雙鏈 DNA分子的 斷裂 ,產(chǎn) ? 生相應(yīng)限制性片段 . ? ▲ 各種生物呈現(xiàn)特征性的限制性內(nèi)切酶酶切圖 ? 譜 . ? ▲ 在生物分類 ,基因定位 ,基因重組 ,疾病診斷 ,刑 ? 事偵察領(lǐng)域極為重要 . 限制性 內(nèi)切酶的 發(fā)現(xiàn) ： 宿主細(xì)胞的限制和修飾作用 ? 1. 兩種不同來源的 λ噬菌體 , λK； λB . ? 2. 能高頻感染各自大腸桿菌宿主細(xì)胞（ λK→ K株 , λB → B 株） ? 3. 當(dāng)它們分別與其它宿主菌交叉混合培養(yǎng)時，感染下降數(shù)千倍。 ? 4. 一但 λK 噬菌體在 B 株成功，由 B 株繁殖出 λK 后代，能感染 B 株 , λK → B 株 .不能感染原來 K株 . ? λK K株 限制 和修飾作用的分子機(jī)制 ? 1． 大腸桿菌宿主細(xì)胞 K株 B 株 , 有各自的限制和修飾系統(tǒng) 。 ? 2. λ噬菌體長期生長在大腸桿菌宿主細(xì)胞 K株， B株 中 . ? 3．細(xì)菌利用限制和修飾系統(tǒng)來區(qū)分自身 DNA與外DNA。 ? 4. C 株 不能產(chǎn)生限制性內(nèi)切酶，其它來源 λ 噬菌體可以感 染 C 株，而在 C 株繁殖 λ 噬菌體則在 K株和 B 株 ,受到嚴(yán)格的限制作用。 問題 ? 1. 關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有（）不太恰當(dāng)。 ? A。由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成 ? B. 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是 II類限制性內(nèi)切酶 ? C. 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對 DNA進(jìn)行修飾 ? D. 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制－修飾系統(tǒng) ? ? 限制與修飾現(xiàn)象是宿主的一種保護(hù)體系，它是通過外源 DNA的修飾和對自身 DNA的限制實(shí)現(xiàn)的。 ? 1）它們均有三個連續(xù)的基因位點(diǎn)控制， hsdR。 hsdM。 hsdS. ? 2） hsdR 編碼限制性核酸內(nèi)切酶 識別 DNA 分子特定位 點(diǎn)， 將雙鏈 DNA 切斷 。 ? （注意： DNA分子轉(zhuǎn)化細(xì)胞：受體細(xì)胞去掉 hsdR 基因位點(diǎn)） ? 3） hsdM 編碼產(chǎn)物是 DNA甲基化酶 催化 DNA 分子特定位點(diǎn)的 堿基甲基化 反應(yīng)。 ? 4） hsdS 表達(dá)產(chǎn)物的功能是 協(xié)助 限制性核酸內(nèi)切酶和甲基化酶， 識別特殊的作用位點(diǎn) 。 限制 和修飾作用的分子機(jī)制 ? 1）宿主細(xì)胞甲基化酶，將染色體 DNA 和噬菌體 DNA特異性保護(hù) ,封閉自身所產(chǎn)生的核酸內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)。（ 修飾 ） ? 2) 當(dāng)外來 DNA 入侵時，遭到宿主限制性內(nèi)切酶的特異降解。 （ 限制 ） 限制 和修飾作用的分子機(jī)制 ? 3) 由于降解不完全，外來少數(shù) DNA 分子在宿主細(xì)胞中繁殖過程中被宿主細(xì)胞的甲基化酶修飾，雖然是外來卻不被降解。 ? 4) 外來少數(shù) DNA 分子 ,雖然是外來卻不被降解。但喪失在原宿主細(xì)胞中的存活能力，因?yàn)榻邮芰诵滤拗骶谆揎椀耐瑫r喪失了原宿主菌修飾的標(biāo)記 , 一但 λK 噬菌體在 B 株成功，由 B 株繁殖出 λK 后代 能感染 B 株 , 不能感染原來 K株 . 限制性 內(nèi)切酶的分類：（三大類） ? I． I 類， II 類 , III 類 . ? 2． I 類， III 類為限制 修飾酶。 ? 限制性內(nèi)切活性和甲基化活性，都作為亞基的功能單位包含在 同一酶分子中。 ? 3 ． II類限制性內(nèi)切酶與甲基化酶是分離的， ? 切割位點(diǎn)專 一，適合于 DNA重組。 限制性核酸內(nèi)切酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶的分類 ? 主要類型 I型 II型 III型 ? 限制修飾
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