菌種的傳代與保藏ppt課件(已修改)
2025-04-03 05:51 本頁面
【正文】 菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種 .微生物具有生命活力， 在傳代過程中易發(fā)生變異甚至死亡，因此菌種保藏是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工作，是微生物學(xué)基礎(chǔ)工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容，也是藥品微生物工作中的一項(xiàng)常用技術(shù)。 一、菌種保藏的意義 如藥品中的控制菌檢查使用的陽性對(duì)照菌須防止因多次傳代而使陽性對(duì)照菌的典型生物學(xué)特征發(fā)生變化及菌株的死亡，保證達(dá)到菌種長期正確的形態(tài)； 如藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)過程中，檢出的可疑致病菌須妥善保藏，以達(dá)到進(jìn)一步鑒定的目的，保證用藥安全。 許多國家都已建立了專門的菌種保藏機(jī)構(gòu)，如美國標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ ATCC）、英國的國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ NCTC）、還有全球性的世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)（ WFCC）。 二、菌種代號(hào)的意義 ? 國內(nèi)藥品微生物檢驗(yàn)所用的菌種代號(hào)是 ? CMCC（ F） 或 CMCC（ B） ? CMCC —— 中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心 ? B (Bacteria)代表細(xì)菌 ， F (Fungi)代表真菌 。 ? 大腸埃希菌 [CMCC (B) 44102] ? 乙型副傷寒沙門桿菌 [CMCC (B) 50094] ? 銅綠假單胞菌 [CMCC (B)10104] ? 金黃色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] ? 生孢梭菌 [CMCC(B)64941] ? 枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63501] ? 短小芽孢桿菌 [CMCC(B)63202] ? 白色念珠菌 [CMCC(F)98001] ? 黑曲霉 [CMCC(F)98003] 三、常用菌種保藏方法 (一 ) 菌種保藏的原理 ? 根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞基本處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。 ? 低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。 選擇保藏方法時(shí) ， 首先應(yīng)考慮方法能否長期地保持菌種原有的特性 ， 同時(shí)也應(yīng)兼顧到方法的經(jīng)濟(jì)和簡(jiǎn)便 。 在實(shí)際工作中 ， 往往多種條件同時(shí)使用 ,以提高保藏效果 。 （ 二 ） 菌種保藏步驟 ① 挑選特征典型的單個(gè)菌落； ② 確定保藏的合適菌體形態(tài)； ③ 選擇最適宜的保藏方法； ④ 定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查 ， 觀察是否發(fā)生變化 ， 若有變化 ， 須改變保藏方法 。 保藏期滿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種 。 ? （ 1）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞，以減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長保藏時(shí)間。放在 4℃ 左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年 至 一年，有的甚至更長時(shí)間。 ? （ 2） 適用范圍：細(xì)菌 、 霉菌 、 酵母菌保藏 。 大腸桿菌斜面 藤黃微球菌斜面 生孢梭菌 白色念珠菌 需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面不同培養(yǎng)時(shí)間的生長形態(tài) 黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面典型斜面正面為黑褐色厚絨狀，色澤均一，不應(yīng)有雜色；斜面?zhèn)让鏌o色，接近菌層培養(yǎng)基略帶黃色。黑曲霉孢子相當(dāng)穩(wěn)定，可以保存于 4 ℃ %氯化鈉溶液中較長時(shí)間，作為孢子懸液儲(chǔ)備液使用。由此可以減少菌液制備工作量和反
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