菌種的傳代與保藏ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 營(yíng)養(yǎng)肉湯復(fù)蘇 （ 1代 ） → 接種（ 斜面或肉湯 2代 ） → 菌種傳代 （ 5代 ） → 5代后銷毀 ? 檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種 ， 由中國(guó)藥品生物檢定所提供 ，為冷凍干燥菌種 。 2 菌種的傳代與保存 方法 （ 1） ： 菌斜面 菌斜面 （ 保存 ） ? 培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備 ， 如斜面已無(wú)冷凝水者 ， 不宜再使用 。 取出后放人冰箱保存 ， 一般 3個(gè)月轉(zhuǎn)種一次 。 1min后，用水沖洗，并傾去玻片上的余水。染色中應(yīng)特別注意掌握好脫色時(shí)間，不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，否則結(jié)果不準(zhǔn)確。 因工作變動(dòng)時(shí) ， 必須做好交接工作 。從事微生物檢查的工作人員也應(yīng)該注意個(gè)人防護(hù)，避免由操作不當(dāng)而導(dǎo)致的生物危險(xiǎn)。 全部保存菌種應(yīng)具備清單 ， 并定期向部門負(fù)責(zé)人報(bào)告 。用平板計(jì)數(shù)。 ? ，水流不宜直接沖在菌膜上。目的使菌體粘附更牢，并使染料更容易進(jìn)入菌體。 ? 取出接種棒 ， 在火焰旁將培養(yǎng)基管管塞堵上 ， 然后將接種過(guò)細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌 。 ? 取出培養(yǎng)物，接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面于 35～37℃ 培養(yǎng) 22～ 24h，取出后仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種 3 代即可應(yīng)用。 一般以高出斜面 1 ㎝ 為宜 。 ? 取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中 ， 每管10~15ml， 加塞 ， 瓶口包上紙 ， 121℃ 高壓滅菌 30min， 取出置 37℃ 溫箱或 110~ 170 ℃ 烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分 。 ? 生孢梭菌可用庖肉培養(yǎng)基或硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 （ 前者效果更佳 ） 。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年 至 一年，有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間。 ? 低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。 一、菌種保藏的意義 如藥品中的控制菌檢查使用的陽(yáng)性對(duì)照菌須防止因多次傳代而使陽(yáng)性對(duì)照菌的典型生物學(xué)特征發(fā)生變化及菌株的死亡，保證達(dá)到菌種長(zhǎng)期正確的形態(tài)； 如藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)過(guò)程中，檢出的可疑致病菌須妥善保藏，以達(dá)到進(jìn)一步鑒定的目的，保證用藥安全。 （ 二 ） 菌種保藏步驟 ① 挑選特征典型的單個(gè)菌落； ② 確定保藏的合適菌體形態(tài)； ③ 選擇最適宜的保藏方法； ④ 定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查 ， 觀察是否發(fā)生變化 ， 若有變化 ， 須改變保藏方法 。黑曲霉孢子相當(dāng)穩(wěn)定，可以保存于 4 ℃ %氯化鈉溶液中較長(zhǎng)時(shí)間，作為孢子懸液儲(chǔ)備液使用。 ? 保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無(wú)糖 ， 若含糖 ，一般小于 2 %為宜 ， 以免產(chǎn)酸過(guò)多 ，影響菌種存活 。 液體石蠟對(duì)各類菌種保藏效果 菌 種 菌株數(shù) 保存時(shí)間（年） 存活率（ %） 細(xì)菌 霉菌 酵母菌 放線菌 87 586 400 380 5 5 2 4 各類菌種保藏條件及時(shí)間 菌種 保存方法 溫度 傳種時(shí)間 大腸桿菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個(gè)月 1年 乙型副傷寒沙門菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個(gè)月 2年 金黃色葡萄球菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個(gè)月 4年 滕黃微球菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個(gè)月 4年 銅綠假單胞菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 液體石蠟覆蓋保存法 室溫 室溫 2～ 3個(gè)月 2年 枯草
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