菌種的傳代與保藏ppt課件(存儲版)
【正文】 營養(yǎng)肉湯復(fù)蘇 （ 1代 ） → 接種（ 斜面或肉湯 2代 ） → 菌種傳代 （ 5代 ） → 5代后銷毀 ? 檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種 ， 由中國藥品生物檢定所提供 ，為冷凍干燥菌種 。 2 菌種的傳代與保存 方法 （ 1） ： 菌斜面 菌斜面 （ 保存 ） ? 培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備 ， 如斜面已無冷凝水者 ， 不宜再使用 。 取出后放人冰箱保存 ， 一般 3個月轉(zhuǎn)種一次 。 1min后，用水沖洗，并傾去玻片上的余水。染色中應(yīng)特別注意掌握好脫色時間，不宜過長或過短，否則結(jié)果不準(zhǔn)確。 因工作變動時 ， 必須做好交接工作 。從事微生物檢查的工作人員也應(yīng)該注意個人防護(hù)，避免由操作不當(dāng)而導(dǎo)致的生物危險。 全部保存菌種應(yīng)具備清單 ， 并定期向部門負(fù)責(zé)人報告 。用平板計數(shù)。 ? ，水流不宜直接沖在菌膜上。目的使菌體粘附更牢，并使染料更容易進(jìn)入菌體。 ? 取出接種棒 ， 在火焰旁將培養(yǎng)基管管塞堵上 ， 然后將接種過細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌 。 ? 取出培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面于 35～37℃ 培養(yǎng) 22～ 24h，取出后仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種 3 代即可應(yīng)用。 一般以高出斜面 1 ㎝ 為宜 。 ? 取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中 ， 每管10~15ml， 加塞 ， 瓶口包上紙 ， 121℃ 高壓滅菌 30min， 取出置 37℃ 溫箱或 110~ 170 ℃ 烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分 。 ? 生孢梭菌可用庖肉培養(yǎng)基或硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 （ 前者效果更佳 ） 。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年 至 一年，有的甚至更長時間。 ? 低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。 一、菌種保藏的意義 如藥品中的控制菌檢查使用的陽性對照菌須防止因多次傳代而使陽性對照菌的典型生物學(xué)特征發(fā)生變化及菌株的死亡，保證達(dá)到菌種長期正確的形態(tài)； 如藥品微生物學(xué)檢驗過程中，檢出的可疑致病菌須妥善保藏，以達(dá)到進(jìn)一步鑒定的目的，保證用藥安全。 （ 二 ） 菌種保藏步驟 ① 挑選特征典型的單個菌落； ② 確定保藏的合適菌體形態(tài)； ③ 選擇最適宜的保藏方法； ④ 定期對保藏菌種進(jìn)行檢查 ， 觀察是否發(fā)生變化 ， 若有變化 ， 須改變保藏方法 。黑曲霉孢子相當(dāng)穩(wěn)定，可以保存于 4 ℃ %氯化鈉溶液中較長時間，作為孢子懸液儲備液使用。 ? 保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無糖 ， 若含糖 ，一般小于 2 %為宜 ， 以免產(chǎn)酸過多 ，影響菌種存活 。 液體石蠟對各類菌種保藏效果 菌 種 菌株數(shù) 保存時間（年） 存活率（ %） 細(xì)菌 霉菌 酵母菌 放線菌 87 586 400 380 5 5 2 4 各類菌種保藏條件及時間 菌種 保存方法 溫度 傳種時間 大腸桿菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個月 1年 乙型副傷寒沙門菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個月 2年 金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個月 4年 滕黃微球菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 0℃ 以下 2～ 3個月 4年 銅綠假單胞菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 液體石蠟覆蓋保存法 室溫 室溫 2～ 3個月 2年 枯草
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