菌種的傳代與保藏ppt課件-wenkub
2023-04-06 05:51:41 本頁(yè)面
【正文】 2～ 3個(gè)月 4年 銅綠假單胞菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 液體石蠟覆蓋保存法 室溫 室溫 2～ 3個(gè)月 2年 枯草芽孢桿菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 半固體 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 4～ 6℃ 0℃ 以下 6～ 12個(gè)月 1～ 2年 4年以上 短小芽孢桿菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 半固體 營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 4～ 6℃ 0℃ 以下 6～ 12個(gè)月 1～ 2年 4年以上 生孢梭菌 庖肉培養(yǎng)基 液體石蠟覆蓋保存法 4～ 6℃ 4～ 6℃ 6個(gè)月 2年 白色念珠菌 改良馬丁斜面 4～ 6℃ 6個(gè)月 （ 3） 特點(diǎn)： 本方法簡(jiǎn)便易行 ， 是實(shí)驗(yàn)室常用的一種保藏方法 ， 該法主要使菌種與空氣隔絕 。 （ 1）方法： ? 將菌種接種于斜面或穿刺于 ~ %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中 ， 培養(yǎng)好備用 。 ? 保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無(wú)糖 ， 若含糖 ，一般小于 2 %為宜 ， 以免產(chǎn)酸過(guò)多 ，影響菌種存活 。 （ 4） 注意事項(xiàng)： ? 實(shí)驗(yàn)用的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物 ， 至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物 。黑曲霉孢子相當(dāng)穩(wěn)定，可以保存于 4 ℃ %氯化鈉溶液中較長(zhǎng)時(shí)間，作為孢子懸液儲(chǔ)備液使用。每隔 2~3個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。 （ 二 ） 菌種保藏步驟 ① 挑選特征典型的單個(gè)菌落； ② 確定保藏的合適菌體形態(tài)； ③ 選擇最適宜的保藏方法； ④ 定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查 ， 觀察是否發(fā)生變化 ， 若有變化 ， 須改變保藏方法 。低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。 一、菌種保藏的意義 如藥品中的控制菌檢查使用的陽(yáng)性對(duì)照菌須防止因多次傳代而使陽(yáng)性對(duì)照菌的典型生物學(xué)特征發(fā)生變化及菌株的死亡，保證達(dá)到菌種長(zhǎng)期正確的形態(tài)； 如藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)過(guò)程中，檢出的可疑致病菌須妥善保藏，以達(dá)到進(jìn)一步鑒定的目的，保證用藥安全。 許多國(guó)家都已建立了專門(mén)的菌種保藏機(jī)構(gòu)，如美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ ATCC）、英國(guó)的國(guó)立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所（ NCTC）、還有全球性的世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)（ WFCC）。 ? 低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。 保藏期滿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種 。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年 至 一年，有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間。由此可以減少菌液制備工作量和反復(fù)操作黑曲霉的風(fēng)險(xiǎn)。 ? 生孢梭菌可用庖肉培養(yǎng)基或硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 （ 前者效果更佳 ） 。 ? 保藏溫度和時(shí)間都不是絕對(duì)的 ， 個(gè)別菌種不宜低溫保存 。 ? 取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中 ， 每管10~15ml， 加塞 ， 瓶口包上紙 ， 121℃ 高壓滅菌 30min， 取出置 37℃ 溫箱或 110~ 170 ℃ 烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分 。 （ 4） 注意事項(xiàng)： 1. 保藏時(shí) ， 用新鮮培養(yǎng)物接種 ， 應(yīng)檢查純度和特征 后 ， 方可進(jìn)行保藏 。 一般以高出斜面 1 ㎝ 為宜 。 1 菌種的復(fù)蘇 參考流程： ?把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺(tái)。 ? 取出培養(yǎng)物，接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面于 35～37℃ 培養(yǎng) 22～ 24h，取出后仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種 3 代即可應(yīng)用。 至冰箱取出的菌種斜面 ， 應(yīng)在室溫放置約 30分鐘 ， 待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺(tái) 。 ? 取出接種棒 ， 在火焰旁將培養(yǎng)基管管塞堵上 ， 然后將接種過(guò)細(xì)菌的接種棒在火焰上
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