菌種的傳代與保藏ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 芽孢桿菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 半固體 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 4～ 6℃ 0℃ 以下 6～ 12個(gè)月 1～ 2年 4年以上 短小芽孢桿菌 營養(yǎng)瓊脂斜面 半固體 營養(yǎng)肉湯菌懸液 4～ 6℃ 4～ 6℃ 0℃ 以下 6～ 12個(gè)月 1～ 2年 4年以上 生孢梭菌 庖肉培養(yǎng)基 液體石蠟覆蓋保存法 4～ 6℃ 4～ 6℃ 6個(gè)月 2年 白色念珠菌 改良馬丁斜面 4～ 6℃ 6個(gè)月 （ 3） 特點(diǎn)： 本方法簡便易行 ， 是實(shí)驗(yàn)室常用的一種保藏方法 ， 該法主要使菌種與空氣隔絕 。 ? 菌種的復(fù)蘇與保存在專用無菌室或超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行 。 標(biāo)簽上著名菌名及接種日期 。 斜面接種時(shí)的無菌操作 (1)接種滅菌 (2)開啟試管塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好試管塞 方法 2：菌斜面 營養(yǎng)肉湯 分離平板 菌斜面 如果菌落形態(tài)不典型可純化 ， 按下列方法傳代（ 分離菌落 ） ： 用接種環(huán)取上述菌管 （ 斜面 ） 菌苔少許接種置營養(yǎng)肉湯中 (已滅菌 ), 置 35~37℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí)后 ，再用接種環(huán)取培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液 （ 濃菌液 ） ，接種于分離平板 ， 置 35~37℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí) ， 用接種針選典型菌落劃線于營養(yǎng)瓊脂斜面 ， 置 35~37℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí) 。 ? ：加革蘭氏碘液 1～ 2滴于菌膜上， 1min后，用水沖洗，傾去玻片上余水。一般選用 16～ 24h培養(yǎng)物為宜。 ? 菌種應(yīng)有詳細(xì)登記本 ， 包括名稱 、 分離日期 、鑒定日期 、 鑒定者 、 主要鑒定性能 ， 并注意記錄使用 、 轉(zhuǎn)移及銷毀情況和原因 。除生物危險(xiǎn)外，還應(yīng)加強(qiáng)微生物檢查的安全管理。 ? 購置菌種 ， 應(yīng)有介紹信 。 4 對照用菌液制備 ? 取上述培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液（濃菌液） 1ml，加到 9ml %無菌氯化鈉溶液混勻，為 101，再取另一只吸管吸取 101菌液 1 ml加到9ml %無菌氯化鈉溶液混勻，為102 …… 以此類推，稀釋至含活菌數(shù)在 50 ~ 100 cfu。 ? 注意事項(xiàng)： ? ，菌膜應(yīng)薄而均勻。 ? ：手持玻片一端，標(biāo)本面向上，在外層火焰上以鐘擺速度來回通過３次。 ? 堵上管塞 ， 左手將菌種管放下 ， 取營養(yǎng)瓊脂斜面 1支 ， 照上述操作打開棉塞 ， 將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部 ， 由底向上 ， 將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動(dòng) ， 使細(xì)菌劃在斜面的表面上 。 ? 取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取 1支滅菌滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，接種至營養(yǎng)肉湯內(nèi)，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營養(yǎng)肉湯置 35~37℃ 培養(yǎng) 22~24 h。 4. 液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴(yán)格控制 ， 如太多 ， 會影響菌種交換氣體 ， 使保藏效果不好；如太少 ， 斜面容易干燥 ， 將縮短保藏期 。 （ 1）方法： ? 將菌種接種于斜面或穿刺于 ~ %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中 ， 培養(yǎng)好備用 。 （ 4） 注意事項(xiàng)： ? 實(shí)驗(yàn)用的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物 ， 至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物 。每隔 2~3個(gè)
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