菌種分離篩選ppt課件-wenkub
2023-05-19 12:07:34 本頁(yè)面
【正文】 ↓確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的 ↓定性或半定量快速檢出法 平板 分離 ↓ ? 原種斜面 ↓確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)條件 篩選 ↓ 初篩（ 1株 1瓶） ↓ 復(fù)篩（ 1株 3～ 5瓶） ↓結(jié)合初步工藝條件摸索 再?gòu)?fù)篩（ 1株 3～ 5瓶） ↓ 3～ 5株 ↓ 單株純種 分離 ↓ 生產(chǎn)性能試驗(yàn) ↓→毒性試驗(yàn) 菌種鑒定 第二節(jié) 分離樣本的 采樣 一、采樣對(duì)象以采集土壤為主。 ? 采土方式：在選好適當(dāng)?shù)攸c(diǎn)后 ， 用小鏟子除去表土 ， 取離地面 515cm處的土約 10g， 盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中 ， 扎好 ， 標(biāo)記 ， 記錄采樣時(shí)間 、 地點(diǎn) 、 環(huán)境條件等 ， 以備查考 。 這樣對(duì)下階段的純種分離就會(huì)順利得多 。在這 — 步 ， 增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進(jìn)一步應(yīng)用 ， 而且控制得細(xì)一點(diǎn) ， 好一點(diǎn) 。 據(jù)有的國(guó)家規(guī)定 ，微生物中除啤酒酵母 、 脆壁酵母 、 黑曲霉 、 米曲霉和枯草桿菌作為食用無(wú)須作毒性試驗(yàn)外 ，其他微生物作為食用 ， 均需通過(guò)兩年以上的毒性試驗(yàn) 。 ? 因此 ， 建立一更為科學(xué)的和針對(duì)性不強(qiáng)的分離方法是必要的 。 ? 樣本采集時(shí)所需的工具通常有無(wú)菌刮鏟 、 土樣采集器 、 鑷子 、 解剖刀 、 手套 、 無(wú)菌小塑料袋和塑料瓶等 。 加入培養(yǎng)基中的天然提取物 ， 部分培養(yǎng)基中則應(yīng)含有多種碳 、 氮源 ， 如幾丁質(zhì) 、 纖維素或果膠 。 二、 分離 ? 目的微生物不純，需 分離 純化。如可溶性淀粉、碳酸鈣等。 用剛果紅染色法鑒定篩選降解纖維素的菌株 羧甲基纖維素鈉作培養(yǎng)物 抗生素篩選 檢定菌培養(yǎng)，加上發(fā)酵液 五、放線(xiàn)菌的分離培養(yǎng)基的組成原則 ? 大多數(shù)放線(xiàn)菌的分離培養(yǎng)是在貧脊或復(fù)雜底物的瓊脂平板上進(jìn)行的 。 ? 分離瓊脂平板制備好后 ， 一般皆應(yīng)在 37℃ 培養(yǎng)箱中存放 3天 。 ? 水中放線(xiàn)菌的分離： 為使所要分離的放線(xiàn)菌的數(shù)量種類(lèi)增多，一般將水樣離心或?yàn)V紙過(guò)濾，取 離心沉積或?yàn)V紙表面沉積 進(jìn)行系列稀釋和涂布。 ? 將分離平板上所形成的菌落用經(jīng)火焰灼燒滅菌的鉤形針或無(wú)菌牙簽挑取 ， 點(diǎn)接到瓊脂平板上進(jìn)行影印培養(yǎng) ， 以進(jìn)一步篩選和分離 。 有時(shí) ， 真菌子實(shí)體形成必須有光線(xiàn) ， 這在分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加以考慮 。 真菌的分離方法 ? 土中真菌的分離：稀釋法 ， 混入法 ， 壓貼法 ，粘附法 ， 土過(guò)篩法 ， 庶糖密度梯度離心法 。 ? 子實(shí)體直接分離培養(yǎng)擔(dān)子菌：新采集的子實(shí)體組織植入平板內(nèi)或在放于液體培養(yǎng)基表面放一小塊無(wú)菌濾紙上培養(yǎng) 。 實(shí)驗(yàn)原理 纖維素與纖維素酶 ? 纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為至少包含三部分，C1,Cx,和葡萄糖苷酶組成。 ? 方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，缺點(diǎn)是由于實(shí)驗(yàn)材料和瓊脂都含有淀粉類(lèi)物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)所用的器材 ： ? 培養(yǎng)皿， 250mL錐形瓶，無(wú)菌稱(chēng)量瓶，濾紙，藥匙、 1 mL和 10 mL的移液管、電子秤、無(wú)菌培養(yǎng)皿、涂布器、解剖鏡、顯微鏡、接種針、溫箱等 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)
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