熒光定量pcr在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用(已修改)
2025-01-18 08:24 本頁面
【正文】 熒光定量 PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 內(nèi)容提要 一、基因診斷技術(shù)簡介 二、乙型肝炎的病原檢測 三、丙型肝炎的病原檢測 四、性病相關(guān)病原體的檢測 基因診斷技術(shù)簡介 4 基因診斷 3 免疫學(xué)診斷 臨床診斷 細(xì)胞膜 細(xì)胞核 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 1 形態(tài)學(xué)診斷 2 生化診斷 概念 PCR與基因診斷技術(shù) ? 基因診斷即通過核酸的分子生物學(xué)檢測直接檢測基因的存在狀態(tài)或缺陷對疾病作出診斷的方法。 ? Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種 DNA的快速擴(kuò)增技術(shù)。 PCR技術(shù)通過兩個(gè)短的稱為引物的 DNA小片段和一種耐熱酶的作用，可在 3個(gè)小時(shí)內(nèi)把特定的 DNA片段擴(kuò)增 1000萬倍。 ? 九十年代中期 PCR臨床應(yīng)用在國內(nèi)全面開展， 1998年，熒光定量 PCR技術(shù)開始在中國應(yīng)用于臨床檢測。 熒光定量 PCR技術(shù) ? 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)檢測整個(gè) PCR過程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對 PCR終產(chǎn)物的分析，最終實(shí)現(xiàn)對未知的起始模版進(jìn)行定量分析的一種技術(shù)，是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法。 熒光染料： SYBR Green I、 EVA Green 熒光探針： TaqMan、 Hybridization Probes 、 Molecular Beacon 熒光定量 PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn) ? 特異性強(qiáng)：直接擴(kuò)增病原體的特異 DNA或異常基因片段 ? 靈敏度高：可檢測到極少量的 DNA，有效降低漏診率 ? 高效省時(shí)：擴(kuò)增周期短，有利于快速診斷 ? 取材范圍廣：血清、痰液、體液、毛發(fā)等多種樣本 ? 全封閉反應(yīng)：無需 PCR后處理，降低污染 ? 定量準(zhǔn)確：利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，采用對數(shù)期分析 ? 自動(dòng)化程度高：操作安全，避免人為判斷 Roche LightCycler 熒光定量 PCR技術(shù)的臨床應(yīng)用 ? 病毒性 肝炎 （ HBV、 HBVYMDD、 HCV）的基因檢測 ? 性病相關(guān)病原體（ CT、 NG、 UU、 HPV）的基因檢測 ? 優(yōu)生優(yōu)育項(xiàng)目診斷：人巨細(xì)胞病毒（ HCMV） 、單純皰疹病毒 II型（ HSV） 、弓形蟲（ TOX）、風(fēng)疹病毒 ? 其它病原體檢測：結(jié)核桿菌、肺炎支原體、 EB病毒、傷寒桿菌、幽門螺旋桿菌等 乙型肝炎的病原檢測 乙肝病毒 P a rt i a l l y doub l e s t ra nded D N AA ( n)附著和侵入？( ) DNA分泌？m R N Acc cD NA 的形成？D N A polRT核心包裝？H B V移行？外膜裝配？ HBV的感染過程 乙肝如何傳染？ 慢性 HBV感染 病毒持續(xù) 6個(gè)月未被清除者 ? 免疫耐受期： HBV復(fù)制活躍 ? 免疫清除期 ? 非活動(dòng)或低復(fù)制期 慢性乙型肝炎 ? HBeAg陽性慢性乙型肝炎 ? HBeAg陰性慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化 ? 代償期肝
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