【正文】 重約 1012— 1013g。 該法適合菌濃度較高的樣品。 舉例：大腸桿菌一個細(xì)胞一般重約 10–12~10–13g，液體培養(yǎng)物中細(xì)胞濃度達到 2 109個 /ml時 ，100ml培養(yǎng)物可得 10~90mg干重的細(xì)胞 。 原理： 是在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌數(shù)越多，光密度越大。因此，借助于分光光度計，在一定波長下測定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。 特點：快速、簡便；但易受干擾。 ?測含氮量 蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要物質(zhì)，含量穩(wěn)定，而氮是蛋白質(zhì)的主要成分，通過測含氮量就可推知微生物的濃度。 一般細(xì)菌含氮量為干重的 %，酵母菌為 %，霉菌為%，根據(jù)一定體積培養(yǎng)液中的含氮量再乘以 ，就可測得粗蛋白的含量。 ?其他方法 含碳、磷、 DNA、 RNA、 耗氧量、消耗底物量、產(chǎn)二氧化碳、產(chǎn)酸、產(chǎn)熱、粘度等，都可用于生長量的測定。 第二節(jié) 微生物的生長曲線 一、微生物培養(yǎng) ： 研究群體生長規(guī)律，首先應(yīng)對微生物進行培養(yǎng)。培養(yǎng)的方法有： 分批培養(yǎng) 和 連續(xù)培養(yǎng) 這兩種方法既可用于純種培養(yǎng)，也可用于混合 1 分批培養(yǎng) （ batch culture） ： 分批培養(yǎng) （ batch culture） ：將微生物置于一定容積的定量的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基一次性加入。不再補充和更換，最后一次性收獲。 (P116) 2 連續(xù)培養(yǎng) （ continuous culture） ? 連續(xù)培養(yǎng) （ continuous culture） ：在微生物培養(yǎng)的過程中，不斷地供給新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)，同時排除含菌體及代謝產(chǎn)物的發(fā)酵液，讓培養(yǎng)的微生物長時間地處于對數(shù)生長期，以利于微生物的增殖速度和代謝活性處于某種穩(wěn)定狀態(tài)。 ? 類型： 恒濁連續(xù)培養(yǎng)和恒化連續(xù)培養(yǎng) (P119) 原理：當(dāng)微生物在單批培養(yǎng)方式下生長達到對數(shù)期后期時，一方面以一定的速度流進新鮮培養(yǎng)基并攪拌，另一方面以溢流方式流出培養(yǎng)液，使培養(yǎng)物達到動態(tài)平衡，其中的微生物就能長期保持對數(shù)期的平衡生長狀態(tài)和穩(wěn)定的生長速率。 單批培養(yǎng) 恒濁法 恒化法 單批培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng) 時間 連續(xù)流入 新鮮培養(yǎng)液 lg細(xì)胞數(shù)（個/ml） 連續(xù)培養(yǎng) （ 1）連續(xù)培養(yǎng)原理 恒化連續(xù)培養(yǎng) 概念 ：以恒定流速使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定而保持細(xì)菌生長速率恒定的方法。 原理： 通過控制某一種營養(yǎng)物濃度（如碳、氮源、生長因子等） ，使其始終成為生長限制因子，而達到控制培養(yǎng)液流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長速率條件下進行生長繁殖。 特點： 維持營養(yǎng)成分的 亞適量 ，控制微生物生長速率。菌體生長速率恒定，菌體均一、密度穩(wěn)定，產(chǎn)量低于最高菌體產(chǎn)量。 應(yīng)用范圍： 實驗室科學(xué)研究及污水生物處理。 恒化器 Chemostat 或 bactogen 概念： 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基流速，使培養(yǎng)液濁度保持恒定的連續(xù)培養(yǎng)方法。 原理 ：通過調(diào)節(jié)新鮮培養(yǎng)基流入的速度和培養(yǎng)物流出的速度來 維持菌濃度不變 ,即濁度不變 。主要采用恒濁器，當(dāng)濁度高時，使新鮮培養(yǎng)基的流速加快，濁度降低，則減慢培養(yǎng)基的流速。 特點： 基質(zhì)過量，微生物始終以最高速率進行生長，并可在允許范圍內(nèi)控制不同的菌體密度；但工藝復(fù)雜，煩瑣。 恒濁連續(xù)培養(yǎng) 使用范圍： 用于生產(chǎn)大量菌體、生產(chǎn)與菌體生長相平行的某些代謝產(chǎn)物，如乳酸、乙醇等。 裝置 控制對象 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基流速 生長速率 產(chǎn)物 應(yīng)用范圍 恒濁器 菌體密度（內(nèi)控制） 無限制生長因子 不恒定 最高 大量菌體或與菌體形成相平行的產(chǎn)物 生產(chǎn)為主 恒化器 培養(yǎng)基流速（外控制） 有限制生長因子 恒定 低于最高 不同生長速率的菌體 實驗室為主 恒濁器與恒化器的比較 二、細(xì)菌的純培養(yǎng)生長曲線 ? 將少量細(xì)菌接種到一種新鮮的、定量的液體培養(yǎng)基中進行分批培養(yǎng)，定時取樣計數(shù)，以細(xì)菌個數(shù)或細(xì)菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，連接坐標(biāo)紙上各點成一條曲線即細(xì)菌的生長曲線。 ? 生長曲線可以細(xì)分為 六個階段 、 四個時期 ： 延遲期（停滯期）、加速期 、 對數(shù)生長期、 減速期、 穩(wěn)定期（靜止期） 、 衰亡期（或死亡期）。 (P116) 典型的生長曲線 （ Growth curve） 延滯期 對數(shù)期 穩(wěn)定期 衰亡期 時期的劃分：按照生長速率常數(shù)（ growth race constant）不同 加速期 減速期 其它名稱：遲滯期、調(diào)整期、適應(yīng)期 ： 活菌數(shù)沒增加，曲線平行于橫軸。 ： P117 ?生長速率 = 0 ?細(xì)胞形態(tài)變大或增長 ?細(xì)胞內(nèi) RNA特別是 rRNA含量增高 ?合成代謝活躍（核糖體、酶類、 ATP合成加快），易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶 ?對外界不良條件敏感，（如氯化鈉濃度、溫度、抗生素等化學(xué)藥物） ：適應(yīng)新的環(huán)境條件，合成新的酶，積累必要的中間產(chǎn)物 ① .停滯期（ lag phase） ◆ 菌種 ： 繁殖速度較快 (世代時間短 )的菌種的延遲期一般較短； ◆接種物菌齡 ： 用對數(shù)生長期的菌種接種時，其延遲期較短，甚至檢查不到延遲期； ◆ 接種量： 一般來說， 接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用 1/10的接種量）； ◆營養(yǎng)： 培養(yǎng)基成分 ◇在營養(yǎng)成分豐富的天然培養(yǎng)基上生長的延滯期比在合成培養(yǎng)基上生長時短；◇接種后培養(yǎng)基成分有較大變化時，會使延滯期加長，所以發(fā)酵工業(yè)上盡量使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分與種子培養(yǎng)基接近。 ★ 影響延遲期長短的因素： P116117 認(rèn)識延遲期的特點及形成原因?qū)嵺`的指導(dǎo)意義： ◆ 在工業(yè)上需設(shè)法盡量縮短延遲期； P117 采取的 縮短 lag phase 的 措施 有： ①增加接種量； （群體優(yōu)勢 適應(yīng)性增強） ②采用對數(shù)生長期的健壯菌種； ③ 調(diào)整培養(yǎng)基的成分，在種子基中加入發(fā)酵培養(yǎng)基的某些成分。 ④選用繁殖快的菌種 ② .對數(shù)期（ logarithmic phase） 其他名稱：指數(shù)期 現(xiàn)象： 細(xì)胞數(shù)目以幾何級數(shù)增加，其對數(shù)與時間呈直線關(guān)系。 特點： 生長速率最大，即代時最短 菌體大小、形態(tài)、生理特征等比較一致 代謝最旺盛 細(xì)胞對理化因素較敏感 影響因素： 菌種 代謝產(chǎn)物 營養(yǎng)物濃度 ﹡ 氧氣 延長措施： 定時定量加入營養(yǎng)物質(zhì)，同時排出代謝產(chǎn)物，或使用連續(xù)培養(yǎng)。 應(yīng)用意義 ： ① 由于此時期的菌種比較健壯，增殖噬菌體的最適菌齡；生產(chǎn)上用作接種的最佳菌齡； ② 發(fā)酵工業(yè)上盡量延長該期，以達到較高的菌體密度 ③ 食品工業(yè)上盡量使有害微生物不能進入此期 ④是生理代謝及 遺傳研究或進行染色、形態(tài)觀察等 的良好材料 。 ③ . 靜止