【正文】 長的微生物， ★誤差： 多次稀釋造成的誤差是主要來源，其次還有由于樣品內(nèi)菌體分布不均勻、以及不當(dāng)操作 ★ A standard plate count (viable count) reflects the number of viable microbes and assumes that each bacterium grows into a single colony。 薄膜過濾計數(shù)法 常用該法測定含菌量較少的空氣和水中的微生物數(shù)目。 將一定量的菌液中的菌體通過離心或過濾分離出來 ,然后烘干 (干燥溫度可采用 105℃ 、 100℃或 80℃) 、稱重。 該法適合菌濃度較高的樣品。 原理： 是在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌數(shù)越多，光密度越大。 特點：快速、簡便；但易受干擾。 一般細(xì)菌含氮量為干重的 %，酵母菌為 %，霉菌為%，根據(jù)一定體積培養(yǎng)液中的含氮量再乘以 ，就可測得粗蛋白的含量。 第二節(jié) 微生物的生長曲線 一、微生物培養(yǎng) ： 研究群體生長規(guī)律，首先應(yīng)對微生物進(jìn)行培養(yǎng)。不再補充和更換，最后一次性收獲。 ? 類型： 恒濁連續(xù)培養(yǎng)和恒化連續(xù)培養(yǎng) (P119) 原理：當(dāng)微生物在單批培養(yǎng)方式下生長達(dá)到對數(shù)期后期時，一方面以一定的速度流進(jìn)新鮮培養(yǎng)基并攪拌，另一方面以溢流方式流出培養(yǎng)液，使培養(yǎng)物達(dá)到動態(tài)平衡，其中的微生物就能長期保持對數(shù)期的平衡生長狀態(tài)和穩(wěn)定的生長速率。 原理： 通過控制某一種營養(yǎng)物濃度（如碳、氮源、生長因子等） ，使其始終成為生長限制因子，而達(dá)到控制培養(yǎng)液流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長速率條件下進(jìn)行生長繁殖。菌體生長速率恒定，菌體均一、密度穩(wěn)定，產(chǎn)量低于最高菌體產(chǎn)量。 恒化器 Chemostat 或 bactogen 概念： 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基流速，使培養(yǎng)液濁度保持恒定的連續(xù)培養(yǎng)方法。主要采用恒濁器，當(dāng)濁度高時，使新鮮培養(yǎng)基的流速加快，濁度降低，則減慢培養(yǎng)基的流速。 恒濁連續(xù)培養(yǎng) 使用范圍： 用于生產(chǎn)大量菌體、生產(chǎn)與菌體生長相平行的某些代謝產(chǎn)物，如乳酸、乙醇等。 ? 生長曲線可以細(xì)分為 六個階段 、 四個時期 ： 延遲期（停滯期）、加速期 、 對數(shù)生長期、 減速期、 穩(wěn)定期（靜止期） 、 衰亡期（或死亡期）。 ： P117 ?生長速率 = 0 ?細(xì)胞形態(tài)變大或增長 ?細(xì)胞內(nèi) RNA特別是 rRNA含量增高 ?合成代謝活躍（核糖體、酶類、 ATP合成加快），易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶 ?對外界不良條件敏感，（如氯化鈉濃度、溫度、抗生素等化學(xué)藥物） ：適應(yīng)新的環(huán)境條件，合成新的酶，積累必要的中間產(chǎn)物 ① .停滯期（ lag phase） ◆ 菌種 ： 繁殖速度較快 (世代時間短 )的菌種的延遲期一般較短； ◆接種物菌齡 ： 用對數(shù)生長期的菌種接種時，其延遲期較短，甚至檢查不到延遲期； ◆ 接種量： 一般來說， 接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用 1/10的接種量）； ◆營養(yǎng)： 培養(yǎng)基成分 ◇在營養(yǎng)成分豐富的天然培養(yǎng)基上生長的延滯期比在合成培養(yǎng)基上生長時短；◇接種后培養(yǎng)基成分有較大變化時，會使延滯期加長，所以發(fā)酵工業(yè)上盡量使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分與種子培養(yǎng)基接近。 ④選用繁殖快的菌種 ② .對數(shù)期（ logarithmic phase） 其他名稱：指數(shù)期 現(xiàn)象： 細(xì)胞數(shù)目以幾何級數(shù)增加，其對數(shù)與時間呈直線關(guān)系。 應(yīng)用意義 ： ① 由于此時期的菌種比較健壯，增殖噬菌體的最適菌齡；生產(chǎn)上用作接種的最佳菌齡； ② 發(fā)酵工業(yè)上盡量延長該期，以達(dá)到較高的菌體密度 ③ 食品工業(yè)上盡量使有害微生物不能進(jìn)入此期 ④是生理代謝及 遺傳研究或進(jìn)行染色、形態(tài)觀察等 的良好材料 。 ②細(xì)胞分裂速度下降， 開始積累內(nèi)含物 ， 產(chǎn)芽孢的細(xì)菌開始產(chǎn)芽孢。若目標(biāo)是菌體，則在靜止期初期就要及時收獲菌體。 溶解氧供應(yīng)不足 應(yīng)用意義： 發(fā)酵生產(chǎn)形成的重要時期（抗生素、氨基酸等），生產(chǎn)上應(yīng)盡量延長此期，提高產(chǎn)量，措施如下： ? 補充營養(yǎng)物質(zhì)（補料） ? 調(diào) pH ? 調(diào)整溫度 ④ . 衰亡期（ decline phase） 特點： ① 細(xì)胞死亡數(shù)增加，死亡數(shù)大大超過新增殖的細(xì)胞數(shù)，群體中的活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)“負(fù)生長”。 ③ 因菌體本身產(chǎn)生的酶及代謝產(chǎn)物的作用，使菌體死亡。 產(chǎn)生原因： 生長條件的進(jìn)一步惡化，使細(xì)胞內(nèi)的分解代謝大大超過合成代謝，繼而導(dǎo)致菌體的死亡 三 .絲狀微生物的群體生長（不講） 絲狀微生物的純培養(yǎng)采用孢子接種，在液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)或深層通氣加攪拌培養(yǎng)，菌絲體通過斷裂繁殖不形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。 可分為三個階段： 生長停滯期 迅速生長期 衰退期 生長停滯期 : 造成生長停滯的原因一是孢子萌發(fā)前真正的停滯狀態(tài)，另一種是生長已經(jīng)開始，但還無法測定。生長主要表現(xiàn)在菌絲尖端的伸長和出現(xiàn)分支、斷裂等，此時期的菌體呼吸強度達(dá)到高峰，有的開始積累代謝產(chǎn)物。大多數(shù)次級代謝產(chǎn)物在此期合成，大多數(shù)細(xì)胞都出現(xiàn)大的空泡。 四、活性污泥中的微生物生長規(guī)律 ? 廢水中微生物種類復(fù)雜，生長情況也復(fù)雜得多，但生長曲線的形態(tài)基本上是相似的。 生長上升階段 生長下降階段 內(nèi)源呼吸階段 五、 微生物的生長曲線在廢水處理中的應(yīng)用 P120 ? 在生物處理中，控制了 — 定的 F／ M值就可得出不同的微生物生長率、微生物的活性和處理效果。利用對數(shù)期進(jìn)行廢水生物處理，雖然反應(yīng)速率快，但想取得穩(wěn)定的出水及較高的處理效果亦比較困難。 在活性污泥法的推流式曝氣池進(jìn)口附近，食料與微生物之比一般總是比較高的，但隨著水流向出口處流動，此值將逐漸減小 （ 補充 ） 第二部分：環(huán)境因子 微生物與所處的環(huán)境之間具有復(fù)雜的相互影響和相互作用 :一方面 ,各種各樣的環(huán)境因素對微生物的生長和繁殖有影響 ,另一方面 ,微生物生長繁殖也會影響和改變環(huán)境 .研究環(huán)境因素與微生物之間的關(guān)系 ,可以通過控制環(huán)境條件來利用微生物有益的一面 ,同時防止它有害的一面。 溫度對微生物的影響具體表現(xiàn)在： ? 影響酶活性。 ? 影響細(xì)胞膜的流動性。 ? 影響物質(zhì)的溶解度。 最低生長溫度 : 指微生物能進(jìn)行繁殖的最低溫度界限。 最高生長溫度： 指微生物生長繁殖的最高溫度界限。 ? 超過最低生長溫度時，微生物不生長，溫度過低，甚至?xí)劳觥? 根據(jù)微生物的最適生長溫度分類 嗜冷微生物 嗜溫微生物 嗜熱微生物 超嗜熱或嗜高溫微生物 微生物類型 最低溫度 oC 最適溫度 oC 最高溫度 oC 嗜冷微生物 50 510 2030