【正文】 一定容積的定量的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基一次性加入。 ?其他方法 含碳、磷、 DNA、 RNA、 耗氧量、消耗底物量、產(chǎn)二氧化碳、產(chǎn)酸、產(chǎn)熱、粘度等，都可用于生長(zhǎng)量的測(cè)定。 ?測(cè)含氮量 蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要物質(zhì)，含量穩(wěn)定，而氮是蛋白質(zhì)的主要成分，通過(guò)測(cè)含氮量就可推知微生物的濃度。因此，借助于分光光度計(jì)，在一定波長(zhǎng)下測(cè)定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。 舉例：大腸桿菌一個(gè)細(xì)胞一般重約 10–12~10–13g，液體培養(yǎng)物中細(xì)胞濃度達(dá)到 2 109個(gè) /ml時(shí) ，100ml培養(yǎng)物可得 10~90mg干重的細(xì)胞 。一般干重為濕重的 10%— 20%，而一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞一般重約 1012— 1013g。 將定量的樣品通過(guò)薄膜（硝化纖維素薄膜、醋酸纖維薄膜）過(guò)濾，菌體被阻留在濾膜上，取下濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，然后計(jì)算菌落數(shù)，可求出樣品中所含菌數(shù)。 plate counts are reported as number of colonyforming units (CFU) per ml (CFU/ml) or per g (CFU/g) of sample. 4。 應(yīng)用： 可同時(shí)計(jì)數(shù)不同微生物的菌數(shù)，適于土壤、牛奶中細(xì)菌計(jì)數(shù)。不適用于細(xì)菌等個(gè)體較小的細(xì)胞，因?yàn)椋?1）細(xì)菌細(xì)胞太小，不易沉降；（ 2）在油鏡下看不清網(wǎng)格線，超出油鏡工作距離。 間接法 （比濁法，碳、氮含量法， DNA測(cè)定法等） 原理： 將 1mm2 400小格，從中均勻分布地選取 80小格，計(jì)數(shù)其中的細(xì)胞數(shù)目，換算成單位體積中的細(xì)胞數(shù)。 活菌數(shù)的測(cè)定 （平板計(jì)數(shù)法、 液體稀釋法、膜過(guò)濾法 ） （二）微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定 1。 二、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定方法 （一）微生物細(xì)胞數(shù)目的檢測(cè)法 1。 顯微操作儀： 用顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。該方法要在顯微鏡下進(jìn)行。 分區(qū)劃線（適用于 濃度較大 的樣品） 連續(xù)劃線（適用于 濃度較小 的樣品） An inoculating loop is used to thin out anisms on the surface of the agar. （ 3） 平板涂布分離法（ Spread Plate） 簡(jiǎn)單易行，但易造成機(jī)械損傷 Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod. （ 4） 選擇性培養(yǎng)分離法 為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物，可以根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營(yíng)養(yǎng)、生理、生長(zhǎng)條件等，采用選擇培養(yǎng)的方法進(jìn)行分離。 （由于微生物的個(gè)體極小，所以常用群體生長(zhǎng)來(lái)反映個(gè)體生長(zhǎng)的狀況） 個(gè)體生長(zhǎng) ?個(gè)體繁殖 ? 群體生長(zhǎng) 群體生長(zhǎng) = 個(gè)體生長(zhǎng) + 個(gè)體繁殖 通常把一個(gè)細(xì)胞分裂成兩個(gè)細(xì)胞所需要的時(shí)間，稱(chēng)為 代時(shí) 。 群體生長(zhǎng) —— 群體中個(gè)體數(shù)目的增加。 發(fā)育 —— 從生長(zhǎng)到繁殖，是生物的構(gòu)造和機(jī)能從簡(jiǎn)單到復(fù)雜、 從量變到質(zhì)變的發(fā)展變化過(guò)程，這一過(guò)程稱(chēng)為發(fā)育。第六章微生物的生長(zhǎng)與環(huán)境因子 Microbial Growth 生長(zhǎng) —— 微生物細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，當(dāng)同化作用 異化作用時(shí)，生命個(gè)體的重量和體積不斷增大的過(guò)程。 繁殖 —— 生命個(gè)體生長(zhǎng)到一定階段，通過(guò)特定方式產(chǎn)生新的生命個(gè)體，即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過(guò)程。 第一部分：微生物的生長(zhǎng) 個(gè)體生長(zhǎng)與群體生長(zhǎng) 個(gè)體生長(zhǎng) —— 微生物細(xì)胞個(gè)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行新陳代謝，原生質(zhì)與細(xì)胞組分的增加為個(gè)體生長(zhǎng)?？梢杂弥亓俊Ⅲw積、密度或濃度來(lái)衡量。 一些細(xì)菌的代時(shí) 菌名 培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度 代時(shí) E. coli（大腸桿菌） 肉湯 37℃ 17min E. coli 牛奶 37 Enterobacter aerogenes（產(chǎn)氣腸細(xì)菌） 肉湯或牛奶 37 16~18 E. aerogenes 組合 37 29~44 B. Cereus（蠟狀芽孢桿菌） 肉湯 30 18 B. thermophilus（嗜熱芽孢桿菌） 肉湯 55 Lactobacillus acidophilus（嗜酸乳桿菌） 牛奶 37 66~87 Streptococcus lactis（乳酸鏈球菌） 牛奶 37 26 S. lactis 乳糖肉湯 37 48 Salmonella typhi（傷寒沙門(mén)氏菌） 肉湯 37 Azotobacter chroococcum（褐球固氮菌） 葡萄糖 25 344~46 Mycobacterium tuberculosis（結(jié)核分枝桿菌）組合 37 792~93 Nitrobacter agilis（活躍硝化桿菌） 組合 27 1200 第一節(jié) 微生物純培養(yǎng)分離及生長(zhǎng)測(cè)定方法 一、 獲得純培養(yǎng)的方法 純培養(yǎng) (pure culture) 微生物學(xué)中把從一個(gè)細(xì)胞或一群相同的細(xì)胞經(jīng)過(guò)培養(yǎng)繁殖而得到的后代 ,稱(chēng)純培養(yǎng) . （ 1） 液體稀釋法 （ 2） 平板劃線分離法（ Streak Plate） （ 3） 平板涂布分離法（ Spread Plate） （ 4） 選擇性培養(yǎng)分離法 （ 5）單細(xì)胞（單孢子）分離法 首先將待分離的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋 ,目的是得到高度稀釋的效果 ,使一支試管中分配不到一個(gè)微生物 .如果經(jīng)過(guò)稀釋后的大多數(shù)試管中沒(méi)有微生物生長(zhǎng) ,那么有微生物生長(zhǎng)的試管得到的培養(yǎng)物可能就是由一個(gè)微生物個(gè)體繁殖而來(lái)的純培養(yǎng)物 . 這種方法適合于細(xì)胞較大的微生物 . （ 1） 液體稀釋法 （ 2） 平板劃線分離法（ Streak Plate） 特點(diǎn)：快速、方便。 ＊ 利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離 ＊富集培養(yǎng) （ 5）單細(xì)胞（單孢子）分離法 采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)的方法。 毛細(xì)管法： 用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體，適合于較大微生物。 小液滴法： 將經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含一個(gè)細(xì)胞的液滴來(lái)進(jìn)行純培養(yǎng)物的分離。 總菌數(shù)的測(cè)定 （計(jì)數(shù)器直接計(jì)數(shù)，染色涂片計(jì)數(shù)，比濁法） 2。 直接法 (干重法，體積法 ) 2。 適用范圍： 個(gè)體較大細(xì)胞或顆粒，如血球、酵母菌等。 特點(diǎn)： 快速，準(zhǔn)確，對(duì)酵母菌可同時(shí)測(cè)定出芽率，或在菌懸液中加入少量美藍(lán)可以區(qū)分死活細(xì)胞。 方法： 用鏡臺(tái)測(cè)微尺計(jì)算出視野面積；取 1cm2面積上，計(jì)數(shù)后代入公式： 每 ml原菌液含菌數(shù) =視野中平均菌數(shù) 涂布面積 /視野面積 10稀釋倍數(shù) ★ 技術(shù)要求 ：樣品充分混勻，操作熟練快速（ 15~20min完成操作），嚴(yán)格無(wú)菌操作； ★注意事項(xiàng)： 每一支吸管只能用于一個(gè)稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度； ★適用范圍： 中溫、好氧和兼性厭氧、能在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生