第七章微生物的生長與控制-文庫吧
2025-07-17 12:46 本頁面
【正文】 however. A pair, chain or cluster of cells which 39。land39。 on the medium in close proximity to each other can multiply and produce a single colony. Thus, we use the term colonyforming unit when we consider the mon origin for the cells of any colony. This term is usually abbreviated CFU. ColonyForming Unit 20 液體稀釋法對(duì) 樣品做 10 倍連續(xù)稀釋，從適宜的 3 個(gè)連續(xù)稀釋度中各取 5 ml 試樣，接種 3 組共 9 支裝有培養(yǎng)液的試管中（每管接入 1 ml ）。 經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù)，然后查 .N. 表（ m o s t proba ble nu m ber ， 最大可能數(shù)），根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)就可計(jì)算處其中的活菌含量。9 m l 9 m l 9 m l 9 m l1 m l 1 m l 1m l 3 3 31 ml 1 ml 1 ml 1 ml10n 10n2 10n1 21 常用該法測(cè)定含菌量較少的空氣和水中的微生物數(shù)目。 將定量的樣品通過薄膜（硝化纖維素薄膜、醋酸纖維薄膜）過濾，菌體被阻留在濾膜上，取下濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，然后計(jì)算菌落數(shù)，可求出樣品中所含菌數(shù)。 22 將一定量的菌液中的菌體通過離心或過濾分離出來 ,然后烘干 (干燥溫度可采用 105℃ 、 100℃或 80℃) 、稱重。一般干重為濕重的 10%— 20%，而一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞一般重約 1012— 1013g。 該法適合菌濃較高的樣品。 舉例：大腸桿菌一個(gè)細(xì)胞一般重約 10–12~10–13g， 液體培養(yǎng)物中細(xì)胞濃度達(dá)到 2 109個(gè) /ml時(shí) ， 100ml培養(yǎng)物可得 10~90mg干重的細(xì)胞 。 23 原理是在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌數(shù)越多，光密度越大。因此，借助于分光光度計(jì)，在一定波長下測(cè)定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。 特點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)便；但易受干擾。 24 ?測(cè)含氮量 蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要物質(zhì)，含量穩(wěn)定，而氮是蛋白質(zhì)的主要成分，通過測(cè)含氮量就可推知微生物的濃度。 一般細(xì)菌含氮量為干重的 %，酵母菌為 %，霉菌為%，根據(jù)一定體積培養(yǎng)液中的含氮量再乘以 ，就可測(cè)得粗蛋白的含量。 ?其他方法 含碳、磷、 DNA、 RNA、 耗氧量、消耗底物量、產(chǎn)二氧化碳、產(chǎn)酸、產(chǎn)熱、粘度等，都可用于生長量的測(cè)定。 25 Table 1. Some Methods used to measure bacterial growth Method Application Comments Direct microscopic count Enumeration of bacteria in milk or cellular vaccines Cannot distinguish living from nonliving cells Viable cell count (colony counts) Enumeration of bacteria in milk, foods, soil, water, laboratory cultures, etc. Very sensitive if plating conditions are optimal Turbidity measurement Estimations of large numbers of bacteria in clear liquid media and broths Fast and nondestructive, but cannot detect cell densities less than 107 cells per ml Measurement of total N or protein Measurement of total cell yield from very dense cultures only practical application is in the research laboratory Measurement of Biochemical activity . O2 uptake CO2 production, ATP production, etc. Microbiological assays Requires a fixed standard to relate chemical activity to cell mass and/or cell numbers Measurement of dry weight or wet weight of cells or volume of cells after centrifugation Measurement of total cell yield in cultures probably more sensitive than total N or total protein measurements 26 第二節(jié) 微生物的生長規(guī)律 27 由于微生物細(xì)胞極其微小，研究其個(gè)體生長存在著技術(shù)上的困難。 ?同步生長 的概念：一個(gè)細(xì)胞群體中各個(gè)細(xì)胞都在同一時(shí)間進(jìn)行分裂的狀態(tài)，稱為同步生長（ synchronous growth） ，進(jìn)行同步分裂的細(xì)胞稱為同步細(xì)胞。 ?同步細(xì)胞群體在任何一時(shí)刻都處在細(xì)胞周期的同一相，彼此間形態(tài)、生化特征都很一致，因而是細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)和生物化學(xué)等研究的良好材料。 一、微生物的個(gè)體生長和同步生長 28 化學(xué)誘導(dǎo)物理誘導(dǎo)誘導(dǎo)法過濾法區(qū)帶密度梯度離心法膜洗脫法篩選法同步培養(yǎng)法獲得同步生長的方法： 獲得同步生長的方法主要有兩類： 環(huán)境條件誘導(dǎo)法：變換溫度、光線、培養(yǎng)基等。造成與正常細(xì)胞周期不同的周期變化。 選擇法：選擇性過濾、梯度離心。物理方法，隨機(jī)選擇，不影響細(xì)胞代謝。 29 HelmstetterCummings 法 原理：一些細(xì)菌細(xì)胞會(huì)緊緊粘附于硝酸纖維微孔濾膜上。 步驟：菌懸液通過微孔濾膜，細(xì)胞吸附其上；反置濾膜，以新鮮培養(yǎng)液通過濾膜，洗掉浮游細(xì)胞；除去起始洗脫液后就可以得到剛剛分裂下來的新生細(xì)胞，即為同步培養(yǎng)。 30 Figure 5. The synchronous growth of a bacterial population. By careful selection of cells that have just divided, a bacterial population can be synchronized in t
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