【正文】 用于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。 [配法] ，枸櫞酸鎂(或枸櫞酸鈉) ，甘油12ml，蒸餾水600ml，馬鈴薯淀粉30g，新鮮雞卵液1L，2%孔雀綠水溶液20ml。先將磷酸鹽、硫酸鎂、枸櫞酸鎂、天門(mén)冬素及甘油，加熱溶解于600ml蒸餾水中。再添放馬鈴薯粉，邊放邊攪，并繼續(xù)置沸水中加熱30min，待冷卻至60℃左右時(shí)，加入雞卵液1L及孔雀綠溶液20ml，充分混勻后，用無(wú)菌操作分裝于滅菌試管，每支5~6ml，塞緊橡皮塞（最好是翻口塞），置于血清凝固器內(nèi)制成斜面，經(jīng)85℃1h間歇滅菌2次(或高壓滅菌115℃20min)，待凝固后經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)，4℃冷藏備用。[用法] 取晨咳痰或其它體液標(biāo)本，（約2滴）滴種于培養(yǎng)基的斜面上，盡量搖晃，置35℃5%~10%二氧化碳溫箱內(nèi)培養(yǎng)1~4周，觀察結(jié)果。凡在1周內(nèi)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)的菌落，一般不可能是結(jié)核分枝桿菌；在2周后生長(zhǎng)的菌落，奶油狀，略呈黃色，粗糙突起，不透明，即取菌進(jìn)行涂片染色鏡檢及鑒定。[質(zhì)量控制]用結(jié)核分枝桿菌菌株作陽(yáng)性培養(yǎng)試驗(yàn)。[保存]置4℃冰箱內(nèi)2~4周有效。注：⑴ 本培養(yǎng)基由LowensteinJenden設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上改良。（2），一般無(wú)須校正。 （3）間歇滅菌的溫度不宜超過(guò)90℃。 (呂氏血清斜面)[用途] 用于白喉棒狀桿菌培養(yǎng)。[配法]1%葡萄糖肉湯(pH )100ml，無(wú)菌動(dòng)物血清(牛、羊、豬、兔) 300ml。將上述成分混合后，分裝于試管內(nèi)，每管約4~5ml。斜插在血清凝固器內(nèi)（或蒸籠）加熱80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷卻后放4℃冰箱內(nèi)。取出后采用間歇滅菌法，85℃滅菌30min，連續(xù)3天，經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)證明無(wú)雜菌生長(zhǎng)即可應(yīng)用。[用法] 將喉拭子直接接種于上述斜面上，置35℃培養(yǎng)16~24h。白喉?xiàng)U菌在上述培養(yǎng)基上，菌落呈圓形，表面光滑、完整，9g/L氯化鈉溶液中易乳化，用阿爾培脫染色，兩極異染顆粒明顯。注：⑴ 所用血清不能含有防腐劑。 ⑵ 該培養(yǎng)基不能高熱滅菌，以防破壞其中營(yíng)養(yǎng)成分。⑶ 配制時(shí)所有器皿、棉塞等均應(yīng)高壓滅菌。 [用途] 用于分離白喉?xiàng)U菌。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g，葡萄糖2g，1%亞碲酸鉀45ml，脫纖維羊血100ml，瓊脂2g，蒸餾水900ml。 先將蛋白胨、氯化鈉、牛肉浸膏、葡萄糖和胱氨酸加水加熱溶解，加入瓊脂，高壓滅菌115℃15min備用。待冷至50℃左右，用無(wú)菌操作加入已滅菌的亞碲酸鉀溶液及羊血，混勻傾注平板。[用法]將標(biāo)本直接接種于亞碲酸鉀平板上。置35℃孵箱，經(jīng)24~48h培養(yǎng)，觀察結(jié)果。白喉?xiàng)U菌能使亞碲酸鉀還原成金屬碲而形成黑色和灰黑色的菌落。 二、革蘭陰性桿菌分離培養(yǎng)基 (一)弧菌分離培養(yǎng)基 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉膏3g，脂20g，蒸餾水1L。 將前4種成分混合于水中，加熱溶解，校正pH至 ，分裝后121℃滅菌15min，傾注平板。[用法] 凡急性患有水樣便標(biāo)本做增菌培養(yǎng)的同時(shí)，應(yīng)直接取標(biāo)本接種到堿性瓊脂平板或亞碲酸鉀瓊脂平板上。置35℃培養(yǎng)12~16h，觀察結(jié)果。霍亂弧菌生長(zhǎng)較快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑濕潤(rùn)。在亞碲酸鉀瓊脂上菌落呈灰黑色。[質(zhì)量控制] 各實(shí)驗(yàn)室凡自配培養(yǎng)基或商品培養(yǎng)基,在使用前可用標(biāo)準(zhǔn)菌株生長(zhǎng)對(duì)照，臨床實(shí)驗(yàn)室可送防疫部門(mén)所設(shè)立的專門(mén)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行目的菌監(jiān)測(cè),質(zhì)量可靠者方可使用。ELTor弧菌生長(zhǎng)良好；大腸埃希菌ATCC 25922 生長(zhǎng)抑制。[保存] 置4℃冰箱，1周內(nèi)用完。 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。 [配法]蛋白胨10g，牛肉膏 5g， 氯化納5g~10g，瓊脂 20g，膽鹽（牛、豬），蒸餾水1L。將上述成分稱量混合于水中加熱溶解，分裝121℃滅菌15min，傾注平板。[用法] 取糞便標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物1接種環(huán)接種平板，置35℃溫箱培養(yǎng)16~18h?；魜y弧菌迅速生長(zhǎng)，其它細(xì)菌生長(zhǎng)較緩慢。在16~18h后，霍亂弧菌的菌落，直徑可達(dá)2mm左右，呈扁平，青灰色，半透明，光滑濕潤(rùn)，易挑起。其它細(xì)菌菌落小而凸起，不透明，或有色素。[質(zhì)量控制] 同堿性瓊脂。[保存] 置冰箱，1周內(nèi)用完。 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。 [配法]蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，氯化鈉5g，枸櫞酸鈉10g，無(wú)水亞硫酸鈉3g，蔗糖(或白糖)10g，瓊脂15~20g，慶大霉素、多粘菌素B“雙抗液”2ml，蒸餾水1L。 將上述成分(除“雙抗液”外)稱量混合于水中，加熱溶解，分裝滅菌121℃15min，待冷卻至50℃后，每100ml內(nèi)加“雙抗液”，另加5g/，再傾注平板。 U，多粘菌素B6 U。[用法] 將糞便標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物劃線接種到該平板上，置35℃培養(yǎng)16~18h。 由于該培養(yǎng)基抑制性強(qiáng)，其它非弧菌科細(xì)菌被抑制，而霍亂弧菌生長(zhǎng)迅速，16h菌落可達(dá)2mm，菌落青灰色，半透明，扁平，光滑濕潤(rùn)。若培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，菌落略黃色、隆起，中心厚而不透明。[質(zhì)量控制]霍亂弧菌(小川、稻葉)生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)18~~；大腸埃希菌和變形桿菌生長(zhǎng)抑制。[保存] 置4℃冰箱內(nèi)，1周內(nèi)用完。注：⑴ 該培養(yǎng)基國(guó)內(nèi)有商品出售，多數(shù)產(chǎn)品已加入慶大霉素，使用時(shí)，應(yīng)詳閱說(shuō)明書(shū)。⑵“雙抗液”配制：98ml滅菌蒸餾水中加慶大霉素(25 000 U/ml)1ml,多粘菌B或抗敵E(300 000 U/ml)1ml。4℃冰箱保存，1月用完。 [用途]用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g，亞硫酸鈉(無(wú)水)3g，枸櫞酸鈉10g，豬膽汁粉5g，十二烷硫酸鈉20g，利凡諾（雷佛奴爾）3g，瓊脂粉12g，慶大霉素亞碲酸鉀混合液 1ml，蒸餾水1L。將前8種成分放入玻璃或搪瓷容器內(nèi)(嚴(yán)禁用鋁制容器等金屬容器)，加入蒸餾水，加熱溶解混合后，,%加入瓊脂，煮沸至瓊脂溶化后，冷至60℃左右，按每100ml瓊脂加入慶大霉素亞碲酸鉀混合液(1ml 40 000 U慶大霉素加79ml蒸餾水混合后，每毫升含500 U慶大霉素和10g/L亞碲酸鉀)，搖勻，傾注平板。[用法] 取待檢標(biāo)本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)過(guò)夜。 8h后即可初步觀察結(jié)果。24h培養(yǎng)后，霍亂弧菌呈中心黑色、較大而扁平的菌落。[質(zhì)量控制] 配成的培養(yǎng)基呈亮黃色透明；ELTor弧菌稻葉型生長(zhǎng)良好；ELTor弧菌小川型生長(zhǎng)良好；大腸埃希菌ATCC25922抑制生長(zhǎng)。注：⑴ 慶大和亞碲酸鉀混合液應(yīng)新鮮配制并置冰箱保存。⑵ 雷佛奴爾應(yīng)避光保存，而且每批均應(yīng)預(yù)試后方可使用。成品培養(yǎng)基應(yīng)避光保存。(二)腸桿菌分離培養(yǎng)基 [用途]分離腸道菌的弱選擇性培養(yǎng)基。 [配法]肉膏湯瓊脂()1L，10g/L中國(guó)藍(lán)溶液(滅菌)10ml，乳糖10g，10g/L薔薇紅酸乙醇溶液10ml。取乳糖10g置于已滅菌的肉膏湯瓊脂瓶?jī)?nèi)，加熱溶解瓊脂并混勻。待冷卻至50℃左右，加入中國(guó)藍(lán)、薔薇紅酸乙醇溶液混勻，立即傾注平板，凝固后備用。[用法] 將標(biāo)本接種平板，置35℃18～24h。分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌，其菌落呈藍(lán)色；不分解乳糖的細(xì)菌，菌落為淡紅色的透明菌落。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌ATCC 25922菌落呈藍(lán)色；痢疾志賀菌Ⅰ型ATCC 13313和鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC 13311菌落呈淡紅色。[保存] 4℃冰箱保存，1周內(nèi)用完。注：(1)中國(guó)藍(lán)溶液需煮沸或115℃滅菌15min后應(yīng)用。薔薇紅酸乙醇溶液無(wú)需滅菌，但加熱時(shí)應(yīng)避開(kāi)火焰。 (2)薔薇紅酸能抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌生長(zhǎng)，但對(duì)大腸埃希菌沒(méi)有抑制作用，標(biāo)本接種量不宜太多。(3)此培養(yǎng)基pH ，應(yīng)呈淡紅色。若過(guò)堿呈鮮紅色，過(guò)酸則呈藍(lán)色，均不適用。 、賴氨酸、去氧膽酸鹽(XLD)培養(yǎng)基[用途] 為腸道菌選擇性培養(yǎng)基。 [配法] 酵母浸膏3g,L賴氨酸5g,氯化鈉5g,,1%酚紅溶液8ml,蒸餾水1L。將上述成分(酚紅除外)混合，加熱溶解，,再加入酚紅溶液混勻。121℃高壓滅菌15min，傾注平板備用。[用法] 將標(biāo)本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)18～24h。大腸埃希菌、腸桿菌屬、克雷伯菌屬、枸櫞酸桿菌屬細(xì)菌可形成黃色、不透明菌落；大多數(shù)沙門(mén)菌屬細(xì)菌因不利用糖類，為半透明紅色或無(wú)色菌落。[質(zhì)量控制]大腸埃希菌呈黃色菌落；宋內(nèi)志賀菌呈無(wú)色菌落；傷寒沙門(mén)菌 呈紅色菌落有黑心；金黃色葡萄球菌 抑制生長(zhǎng)。[保存] 貯存于4℃有效期5天。 [用途]沙門(mén)菌屬和志賀菌屬(SalmonellaShigella)的分離培養(yǎng)。 [配法] 月示胨 5g，牛肉膏5g，乳糖10g，瓊脂15~20g，膽鹽()，，枸櫞酸鐵1g，1% ，% ，蒸餾水1L。將上述成分(除中性紅、煌綠外)混合于水中，加熱煮沸溶解，~，然后加入中性紅和煌綠溶液，充分混勻冷卻至50℃時(shí)傾注平板。[用法] 將標(biāo)本接種平板，置35℃培養(yǎng)18~24h。沙門(mén)菌屬菌落呈無(wú)色半透明，產(chǎn)生硫化氫者菌落中心呈黑色；志賀菌屬的菌落呈無(wú)色半透明；大腸菌屬呈紅色渾濁；宋內(nèi)志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h后可以出現(xiàn)紅色菌落。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌菌落呈紅色；痢疾志賀Ⅰ型、福氏志賀菌和傷寒沙門(mén)菌 生長(zhǎng)良好，菌落無(wú)色；腸炎或豬霍亂沙門(mén)菌菌落呈黑色；糞腸球菌、金黃色葡萄球菌不生長(zhǎng)。[保存] 避光，3天內(nèi)用完。注：煌綠要新配，中性紅要優(yōu)質(zhì)。 [用途] 麥康凱瓊脂(Maconkey agar)用于腸道致病菌的分離培養(yǎng)和非發(fā)酵細(xì)菌鑒別。 [配法] 蛋白胨20g，氯化鈉5g，膽鹽(豬、牛、羊)5g，乳糖10g，瓊脂15~20g，1%中性紅溶液5ml，蒸餾水1L。將上述成分(除中性紅外)稱量加入水中，加熱溶解，加入中性紅溶液，分裝滅菌115℃20min，冷卻至50℃左右時(shí)傾注平板。[用法] 取標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物接種平板，置35℃培養(yǎng)18~24h。不發(fā)酵乳糖的腸道細(xì)菌呈無(wú)色菌落，光滑半透明。[質(zhì)量控制]大腸埃希菌菌落呈桃紅色；痢疾志賀菌菌落呈無(wú)色；傷寒沙門(mén)菌菌落 無(wú)色；金黃色葡萄球菌不生長(zhǎng)。[保存] 置4℃冰箱(避光)，1周內(nèi)用完。注：非發(fā)酵細(xì)菌在該平板上是否生長(zhǎng)，是臨床鑒定某些非發(fā)酵細(xì)菌的指標(biāo)之一。 [用途] 用于腸道致病菌及大腸菌群分離培養(yǎng)。 [配法] 蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氫二鉀2g，20g/L伊紅Y溶液20ml，瓊脂17g，蒸餾水1L。將蛋白胨、磷酸鹽、瓊脂稱量混合于水中，并加熱煮沸溶解，校正pH至 ，分裝121℃滅菌15min備用。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂加入乳糖，冷至50~55℃時(shí)加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻傾注平板。[用法] 取糞便標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物接種平板，置35℃培養(yǎng)18~24h。根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牟煌羧o(wú)色菌落或挑選紫紅色及有金屬光澤的菌落轉(zhuǎn)種克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進(jìn)行鑒定。[質(zhì)量控制] 大腸埃希菌菌落呈紫紅色，有時(shí)有金屬光澤，直徑＞；傷寒沙門(mén)菌菌落呈灰白色，直徑＞；金黃色葡萄球菌不生長(zhǎng)。[保存] 置4℃冰箱，1周內(nèi)用完。 [用途]克氏雙糖鐵瓊脂(Kliger iron agar)用于腸桿菌科細(xì)菌的初步鑒定。 [配法] 蛋白胨20g,牛肉膏3g,酵母膏3g,乳糖10g,葡萄糖1g,氯化鈉50g,%酚紅溶液5ml,瓊脂12ml,蒸餾水1L。將前8種成分稱量混合于水中，加熱溶解，再加入瓊脂和酚紅溶液，煮沸溶解分裝試管，每管4ml，經(jīng)115℃滅菌20min，立即制成高層斜面，待凝固后經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)備用。[用法] 取待檢菌純培養(yǎng)物，用接種針作底層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。斜面變黃，底層變黃，產(chǎn)氣者或不產(chǎn)氣者多屬大腸埃希菌群及發(fā)酵乳糖的菌株。斜面變紅，底層變黃，為不發(fā)酵乳糖菌株。產(chǎn)硫化氫菌株可使底層或全管產(chǎn)生黑色反應(yīng)。[質(zhì)量控制]奇異變形桿菌 K/A 硫化氫陽(yáng)性；大腸埃希菌 A/A；志賀痢疾桿菌 K/A；傷寒沙門(mén)菌 K/A 硫化氫陽(yáng)性；銅綠假單胞菌 K/K。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。注:該培養(yǎng)基pH值尤為重要。 [用途] 用于腸桿菌科細(xì)菌初步生化鑒定。 [配法] 蛋白胨15g，月示胨5g，牛肉膏3g，酵母膏3g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化鈉5g硫酸亞鐵2g/L，%酚紅溶液5ml，瓊脂12g，蒸餾水1L。將前10種成分稱量混合于水中，再加瓊脂及酚紅溶液，加熱煮沸溶解。分裝試管，每管4ml，經(jīng)115℃滅菌20min，立即置高層斜面，待凝固后，經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)備用。[用法] 取待檢菌純培養(yǎng)物，用接種針作底層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。發(fā)酵乳糖或蔗糖的菌可使斜面及底層均變黃色。不發(fā)酵乳糖和蔗糖的細(xì)菌僅發(fā)酵葡萄糖時(shí)使底層變黃，斜面變紅。產(chǎn)生硫化氫的菌株可使底層或整個(gè)培養(yǎng)基呈黑色。分解乳糖或蔗糖后產(chǎn)氣時(shí)有些菌株還能使培養(yǎng)基斷裂。[質(zhì)量控制] 傷寒沙門(mén)菌K/A， 硫化氫陽(yáng)性；副傷寒沙門(mén)菌K/A， 硫化氫陽(yáng)性；痢疾志賀菌K/A；大腸埃希菌A/A；普通變形桿菌A/A， 硫化氫陽(yáng)性；銅綠假單胞菌 K/K。 [保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。注：該培養(yǎng)基pH 。 [用途] 用于致病性、侵襲性和產(chǎn)毒性大腸埃希菌分離培養(yǎng)。 [配法] 蛋白胨5g，月示胨3g，氯化鈉5g，膽鹽（豬、牛、羊）5g，山梨醇10g，瓊脂粉12g，5g/L中性紅溶液