生化分離技術(shù)第七章_層析技術(shù)-文庫吧
2024-12-28 15:34 本頁面
【正文】 ①保留時間 tR 從開始進(jìn)樣至柱出口處被測組分出現(xiàn)濃度最大值時所需的時間，稱為保留時間，如圖 73所示。 ②保留體積 VR 從開始進(jìn)樣到柱出口處被測組分出現(xiàn)濃度最大值時所通過的流動相體積，稱為保留體積。 ③死時間 t0 不被固定相滯留的組分（氣相色譜中如空氣、甲烷等），從開始進(jìn)樣到柱出口處出現(xiàn)濃度最大值時所需的時間稱為死時間，其值等于流動相流經(jīng)色譜柱的時間，如圖 73所示。 ④ 死體積 V0 不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰值所需流動相的體積，稱為死體積。它可由死時間 t0與色譜柱出口處流動相的體積流速 Fc來計算，即 V0 = t0Fc。 ⑤ 校正保留時間 tR′ 扣除死時間后的保留時間稱為校正保留時間（或調(diào)整保留時間），如圖 73所示；校正保留時間可理解為組分在固定相中實(shí)際滯留的時間。其定義式為： tR′ = tR t0 ⑥ 校正保留體積 VR′ 扣除死體積后的保留體積稱為校正保留體積（或調(diào)整保留體積）；其定義式為： VR′ = VR– V0 VR′ 與 tR′ 之間的關(guān)系為： VR′ = tR′ Fc 死體積 V0反映了色譜柱的幾何特性，它與被測物質(zhì)的性質(zhì)無關(guān)。保留體積 VR中扣除死體積 V0后，即校正保留體積VR′ ， 將更合理地反映被測組分的保留特點(diǎn)。 ⑦相對保留值 r2,1 在相同的操作條件下，待測組分與參比組分的校正保留值之比，稱為相 對保留值，又稱為選擇因子。 ,其定義式為： （ 72） 式中 t′R t′R1 —— 分別為被測物質(zhì)和參比物質(zhì)的校正保留時間； V′R V′R2 —— 分別為被測物質(zhì)和參比物質(zhì)的校正保留體積。 相對保留值 r2,1可以消除某些操作條件對保留值的影響，只要柱溫、固定相和流動相的性質(zhì)保持不變，即使填充情況、柱長、柱徑及流動相流速有所變化，相對保留值仍保持不變。 222 ,111RRRRtVrtV?????? （ 5）峰高與峰面積 色譜峰頂點(diǎn)與峰底之間的垂直距離稱為峰高，用 h表示；峰與峰底之間的面積稱為峰面積，用 A表示，可作為定量分析的參數(shù)。 （ 6）區(qū)域?qū)挾? 色譜峰的區(qū)域?qū)挾瓤珊饬恐?，并且可與峰高相乘來計算峰面積，如圖 73所示。色譜峰的區(qū)域?qū)挾韧ǔＳ腥N表示方法： ①標(biāo)準(zhǔn)偏差 σ 即 。 ②半高峰寬 W1/2 即 1/2峰高處的峰寬。它與標(biāo)準(zhǔn)偏差的關(guān)系為： W1/2 = 。 ③ 峰寬 W 自色譜峰兩側(cè)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)（拐點(diǎn)）處所作的切線與峰底相交于兩點(diǎn)，此兩點(diǎn)間的距離稱為峰寬。它與標(biāo)準(zhǔn)偏差的關(guān)系為： W = 4σ。 標(biāo)準(zhǔn)偏差、峰寬與半高峰寬的單位由色譜峰橫坐標(biāo)單位而定，可以是時間、體積或距離等。在理想的色譜中，組分的譜帶應(yīng)是很窄的，若譜帶較寬，將直接導(dǎo)致分離效果下降。 （ 7）分離度 R 是指相鄰兩色譜峰保留值之差與兩組分色譜峰峰底寬度平均值之比值，即： （ 73） 式中 tR tR2—— 分別為組分 1和 2的保留時間 (也可采用其它保留值 )； W W2—— 分別為組分 1和 2的色譜峰的峰底寬度，與保留值的單位相同。 分離度 R綜合考慮了保留值的差值與峰寬兩方面的因素對柱效率的影響，可衡量色譜柱的總分離效能。 2121( ) / 2RRttRWW??? 根據(jù)分離度 R的大小可以判斷被物質(zhì)在色譜柱中的分離情況； R值越大，兩色譜峰的距離越遠(yuǎn)，分離效果就越好， 如圖 75所示。當(dāng) R1時，兩峰有部分重疊；當(dāng) R = 1時，兩峰有 98%的分離；當(dāng) R = ，分離程度可達(dá) %；一般用 R = 離的標(biāo)志。 圖 75 分離度影響示意圖 （ 8）柱效 柱效是表達(dá)色譜柱性能的一個重要參數(shù)，可用 塔板數(shù) N和塔板高度 H表示，其計算式為： 1 / 25 .5 4 ( )RtN W?LHN? 假設(shè)色譜柱的內(nèi)徑和柱內(nèi)的填料是均勻一致的，混合液流經(jīng)一小段色譜柱后，各組分在兩相間達(dá)平衡。這一小段色譜柱可看成是一個理論塔板，相當(dāng)于精餾操作中的一塊理論塔板，一個理論塔板所對應(yīng)的色譜柱的長度稱為理論塔板高度（理論板高），一個色譜柱可包含若干個理論塔板。理論塔板數(shù)的多少可反映色譜柱分離性能的優(yōu)劣。單位長度色譜柱內(nèi)包含的理論塔板數(shù)越多，流動相通過的塔板數(shù)也越多，說明流動相流過色譜柱的平衡次數(shù)越多，色譜柱的分離效率就越高。 （ 9）色譜流出曲線的意義 色譜峰數(shù)等于樣品中單組分的最少個數(shù)；色譜保留值是定性分析的依據(jù)；色譜峰高或面積是定量分析的依據(jù)；色譜保留值或區(qū)域?qū)挾仁巧V柱分離效能的評價指標(biāo)；色譜峰間距是固定相或流動相選擇是否合適的判定依據(jù)。 二 、 層析分類
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