生化分離技術(shù)第七章_層析技術(shù)-展示頁
2025-01-21 15:34本頁面
【正文】 相對保留值 r2,1可以消除某些操作條件對保留值的影響，只要柱溫、固定相和流動(dòng)相的性質(zhì)保持不變，即使填充情況、柱長、柱徑及流動(dòng)相流速有所變化，相對保留值仍保持不變。 ⑦相對保留值 r2,1 在相同的操作條件下，待測組分與參比組分的校正保留值之比，稱為相 對保留值，又稱為選擇因子。其定義式為： tR′ = tR t0 ⑥ 校正保留體積 VR′ 扣除死體積后的保留體積稱為校正保留體積（或調(diào)整保留體積）；其定義式為： VR′ = VR– V0 VR′ 與 tR′ 之間的關(guān)系為： VR′ = tR′ Fc 死體積 V0反映了色譜柱的幾何特性，它與被測物質(zhì)的性質(zhì)無關(guān)。它可由死時(shí)間 t0與色譜柱出口處流動(dòng)相的體積流速 Fc來計(jì)算，即 V0 = t0Fc。 ③死時(shí)間 t0 不被固定相滯留的組分（氣相色譜中如空氣、甲烷等），從開始進(jìn)樣到柱出口處出現(xiàn)濃度最大值時(shí)所需的時(shí)間稱為死時(shí)間，其值等于流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的時(shí)間，如圖 73所示。 ①保留時(shí)間 tR 從開始進(jìn)樣至柱出口處被測組分出現(xiàn)濃度最大值時(shí)所需的時(shí)間，稱為保留時(shí)間，如圖 73所示。 (a) (b) (c) 圖 74 峰形示意圖 （ 4）保留值 表示混合物中各組分在色譜柱中停留時(shí)間或?qū)⒔M分帶出色譜柱所需流動(dòng)相體積的數(shù)值，稱為保留值。 （ 3）峰形 正常的色譜流出曲線為對稱于 峰尖的正態(tài)分布曲線，如圖 74(a)所示。基線反映了操作條件下，檢測器系統(tǒng)噪聲隨時(shí)間變化的波動(dòng)情況，穩(wěn)定的基線應(yīng)是一條平行于橫坐標(biāo)的直線。 （ 1）基線 在操作條件下，色譜柱出口處沒有組分流出，僅有純流動(dòng)相流過檢測器，此時(shí)的流出曲線稱為基線，如圖 73中 OC曲線。 3．色譜圖及基本概念 混合液中各組分經(jīng)色譜柱分離后，隨流動(dòng)相依次流出色譜柱進(jìn)入檢測器，檢測器的響應(yīng)信號(hào) — 時(shí)間曲線或檢測器的響應(yīng)信號(hào) — 流動(dòng)相體積曲線，稱為色譜流出曲線，又稱色譜圖， 如圖 73所示。 2．阻滯因數(shù)或比移值 Rf 在色譜柱（紙、板）中，溶質(zhì)的移動(dòng)速度與流動(dòng)相的移動(dòng)速度之比，稱為阻滯因數(shù)或比移值 Rf， 其定義式可寫為： ( r )( R )fR ??溶 質(zhì) （ 濃 度 中 心 ） 的 移 動(dòng) 速 度 溶 質(zhì) （ 濃 度 中 心 ） 的 移 動(dòng) 距 離流 動(dòng) 相 的 移 動(dòng) 速 度 在 同 一 時(shí) 間 流 動(dòng) 相 前 沿 的 移 動(dòng) 距 離 令 As為固定相平均截面積， Am為流動(dòng)相平均截面積，則系統(tǒng)或柱的總截面積 At=As+Am。 平衡系數(shù) K主要與下列因素有關(guān)： ① 被分離物質(zhì)本身的性質(zhì)； ② 固定相和流動(dòng)相的性質(zhì)； ③ 色譜柱的操作溫度 。 圖 72 層析柱出口處各個(gè)溶質(zhì)的濃度變化 在定溫定壓條件下，當(dāng)色譜分離過程達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)，某種組分在固定相 S和流動(dòng)相 m中含量（濃度） C的比值，稱為平衡系數(shù) K（ 也可以是分配系數(shù)、吸附系數(shù)、選擇性系數(shù)等）。因此當(dāng)流動(dòng)相 移動(dòng)一定柱長后，使各 組分在層析柱內(nèi)分層，從而達(dá)到各組分分離的目的。 固定相填充于柱中，在柱的頂端(入口 )加入一定量的料液后，連續(xù)輸入流動(dòng)相，料液中的溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間發(fā)生擴(kuò)散傳質(zhì)，產(chǎn)生分配平衡。典型的柱層析分離設(shè)備示于圖 71中。第七章 層析技術(shù) 第一節(jié) 層析的基本原理及分類 第二節(jié) 凝膠過濾層析 第三節(jié) 離子交換層析 第四節(jié) 疏水性相互作用層析 第五節(jié) 親和層析 第六節(jié) 反相層析 學(xué)習(xí)目標(biāo) ? 了解層析方法的分類及各種層析方法的應(yīng)用特點(diǎn)； ? 掌握層析的基本原理及各種層析方法的原理及操作； ? 能利用各種層析技術(shù)對生物物質(zhì)進(jìn)行分離純化。 第一節(jié) 層析的基本原理及分類 一 、 層析的基本原理 層析是根據(jù)混合物中溶質(zhì)在互不混溶的兩相之間分配行為的差別，引起移動(dòng)速度的不同而進(jìn)行分離的方法。 圖 71柱層析分離設(shè)備 1．分離理論基礎(chǔ) 互不混溶的兩相分別稱為固定相 (stationary phase)和流動(dòng)相 (mobile phase)。由于各組分在固定相中的分配系數(shù)（或溶解、吸附、交換、滲透或親和能力）的差異，使各組分隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率不同，分配系數(shù)大的溶質(zhì)在固定相上存在的幾率大，隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度小。在層析柱出口處各個(gè)溶質(zhì)的濃度變化如下圖 72所示。 其表達(dá)通式可寫為： （ 71） smCKC?式中 K—— 平衡系數(shù)（分配系數(shù)、吸附系數(shù)、選擇性系數(shù)等）； Cs—— 固定相中的濃度； Cm
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