層析分離技術(shù)與設(shè)備-文庫(kù)吧
2025-07-17 17:43 本頁(yè)面
【正文】 身移動(dòng)的距離之比值。常用 Rf來(lái)表示。 ? 相對(duì)遷移率：在一定條件下，在相同時(shí)間內(nèi)，某一組分在固定相中移動(dòng)的距離與某一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在固定相中移動(dòng)的距離之比值。（常用） 分辨率（或分離度） ? 分辨率：相鄰兩個(gè)峰的分開(kāi)程度。用 Rs來(lái)表示。 保留體積和保留時(shí)間 ? 保留時(shí)間 (retention time， tR)：從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。 ? 保留體積 (retention volume， VR)：從進(jìn)樣開(kāi)始到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。 第 2節(jié) 吸附層析技術(shù) 一、基本原理 吸附層析法（液 固色譜法， LSC） 原理： 利用固定相的固體吸附劑表面對(duì)不同組分吸附力的大小及洗脫液對(duì)它的溶解作用（解吸作用）的差異進(jìn)行分離。 特點(diǎn)： 適合分離不同種類的化合物 (醇類和芳香烴）。 ? 吸附劑是具有大表面積的活性多孔固體，與待分離物質(zhì)的極性官能團(tuán)作用。 ? 常用的吸附劑有活性炭、硅石、氧化鋁、羥基磷灰石等 ? 羥基羥基磷灰石（ HA） [Ca10(PO4)6.(OH)2],最重要的用途 是用于分離蛋白質(zhì)與核酸。 二、吸附劑 第 3節(jié) 凝膠過(guò)濾層析 一、基本原理 概念（ 排阻層析，分子篩層析）：當(dāng)生物大分子通過(guò)裝有凝膠顆粒的層析柱時(shí)，根據(jù)它們 分子大小 不同而進(jìn)行分離的技術(shù)。 原理： 凝膠顆粒內(nèi)部具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，被分離的混合物流 過(guò)層析柱時(shí)，比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，在凝膠顆粒之間的空隙向下移動(dòng)，并最先被洗脫出來(lái)；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度的自由出入凝膠孔內(nèi)外，在柱內(nèi)經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng)移動(dòng)速度較慢，最后被洗脫出來(lái)。 二、凝膠的種類和性質(zhì) （一）交聯(lián)葡聚糖凝膠（ Sephadex) Sephadex G —— G 后的數(shù)字為凝膠吸水值（ ml / g） 的 10倍。 —— 可用于分離蛋白質(zhì)、核酸、酶、多糖、多肽、氨基酸、抗菌素，也可用于高分子物質(zhì)樣品的脫鹽及測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。 Sephacryl —— 葡聚糖與甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)而成。 —— 優(yōu)點(diǎn)就是它的分離范圍很大，排阻極限甚至可以達(dá)到 108 —— 不僅可以用于分離一般蛋白，也可以用于分離蛋白多糖、質(zhì)粒、甚至較大的病毒顆粒。 （二）瓊脂糖凝膠 ?產(chǎn)品： Sepharose(瑞典 )、 BiogelA(美國(guó) )、Segavac(英國(guó) ) ?機(jī)械強(qiáng)度和篩孔的穩(wěn)定性均優(yōu)于交聯(lián)葡聚糖凝膠。 ?瓊脂糖濃度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越密集。 ?排阻極限很大，分離范圍很廣，適合于分離大分子物質(zhì)，但分辨率較低。 （三）聚丙烯酰胺 ? 商品名為 BioGel P。 ? 由丙烯酰胺（ acrylamide）與甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)而成。 ? 丙烯酰胺的濃度越高，交聯(lián)度越大，孔隙度越小。 ? 主要用于蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定、核苷及核苷酸的分離純化。
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