【正文】 E位：排出位 (Exit site) 轉(zhuǎn)肽酶活性 ? 大小亞基共同組成： A位：氨基酰位 (aminoacyl site) P位：肽酰基位 (peptidyl site) 三、 tRNA是氨基酸的運(yùn)載工具及蛋白質(zhì)生物合成的適配器 tRNA的作用 ? 運(yùn)載氨基酸 ：氨基酸由其特異的 tRNA攜帶 ， 一種氨基酸可有幾種對(duì)應(yīng)的 tRNA， 氨基酸結(jié)合在tRNA氨基酸臂 CCA腺苷酸 3?OH上 ， 結(jié)合需要ATP供能 ? 充當(dāng)適配器 (adaptor)：每種 tRNA的反密碼子決定了所攜帶的氨基酸能準(zhǔn)確地在 mRNA上對(duì)號(hào)入座 二級(jí)結(jié)構(gòu) 三級(jí)結(jié)構(gòu) ? tRNA 反密碼子環(huán) 氨基酸臂 四、蛋白質(zhì)生物合成需要酶類、蛋白質(zhì)因子等 （一）重要的酶類 ? 氨基酰 tRNA合成酶： 催化氨基酸的活化 ? 轉(zhuǎn)肽酶： 催化核糖體 P位上的肽酰基轉(zhuǎn)移至 A位氨基酰 tRNA的氨基上 ， 使酰基與氨基結(jié)合形成肽鍵；受釋放因子作用后發(fā)生變構(gòu) ， 表現(xiàn)出酯酶的水解活性 ， 使 P位上的肽鏈與 tRNA分離 ? 轉(zhuǎn)位酶： 催化核糖體向 mRNA 3?端移動(dòng)一個(gè)密碼子的距離 ， 使下一個(gè)密碼子定位于 A位 （二）蛋白質(zhì)因子 ? 起始因子 (initiation factor, IF) ? 延長(zhǎng)因子 (elongation factor, EF) ? 釋放因子 (release factor, RF) ? 蛋白質(zhì)生物合成的能源物質(zhì)為ATP和 GTP ? 參與蛋白質(zhì)生物合成的無機(jī)離子有 Mg2+、 K+ 等 （三）能源物質(zhì)及離子 第二節(jié) 氨基酸的活化 Activation of Amino Acids ? 氨基酸與特異的 tRNA結(jié)合形成氨基酰 tRNA的過程稱為 氨基酸的活化 ? 參與氨基酸的活化的酶： 氨基酰 tRNA合成酶 ? 反應(yīng)過程 一、氨基酸活化形成氨基酰 tRNA 氨基酸 + tRNA 氨基酰 tRNA ATP AMP＋ PPi 氨基酰 tRNA合成酶 氨基酸 ＋ ATPE 氨基酰 AMPE ＋ PPi ? 第一步反應(yīng) ? 第二步反應(yīng) 氨基酰 AMPE ＋ tRNA 氨基酰 tRNA ＋ AMP ＋ E ? 氨基酸的活化形式： 氨基酰 tRNA ? 氨基酸的活化部位： ?羧基 ? 氨基酸與 tRNA連接方式： 酯鍵 ? 氨基酸活化耗能： 2個(gè) ~P ? 氨基酰 tRNA的表示方法 丙氨酰 tRNA： AlatRNAAla 精氨酰 tRNA： ArgtRNAArg 甲硫氨酰 tRNA： MettRNAMet 各種氨基酸和對(duì)應(yīng)的 tRNA結(jié)合后形成的氨基酰 tRNA表示為： 氨基酸的三字母縮寫 tRNA氨基酸的三字母縮寫 氨基酰 tRNA合成酶對(duì)底物氨基酸和 tRNA都有高度特異性 ? 特性 tRNA 氨基酰 tRNA合成酶 ATP 氨基酰 tRNA合成酶具有校正活性 動(dòng)力學(xué)校對(duì) 化學(xué)校對(duì) ? 特性 二、起始氨基酰 tRNA tRNAiMet與甲硫氨酸結(jié)合后形成 MettRNAiMet，可以在 mRNA的起始密碼子 AUG處就位，參與形成翻譯起始復(fù)合物 tRNAMet和甲硫氨酸結(jié)合后生成 MettRNAMet，必要時(shí)進(jìn)入核糖體，為延長(zhǎng)中的肽鏈添加甲硫氨酸 ? 起始氨基酰 tRNA: ? 參與肽鏈延長(zhǎng)的甲硫氨酰 tRNA： 真核生物 具有起始功能的 tRNAfMet與甲硫氨酸結(jié)合后，甲硫氨酸很快被甲酰化為 N甲酰甲硫氨酸 (Nformyl methionine, fMet)，于是形成 N甲酰甲硫氨酰 tRNA(fMettRNAfMet)，可以在mRNA的起始密碼子 AUG處就位，參與形成翻譯起始復(fù)合物 原核生物 ? 起始氨基酰 tRNA: fMettRNAfMet fMettRNAfMet的生成由 轉(zhuǎn)甲?；?催化 ，甲?；鶑?N10甲酰四氫葉酸轉(zhuǎn)移到甲硫氨酸的?氨基上 第三節(jié) 肽鏈的生物合成過程 The Biosynthesis Process of Peptide Chain ? 翻譯時(shí) ， 從 mRNA的起始密碼子 AUG開始 ， 按 5?→ 3?方向逐一讀碼 ， 直至終止密碼子 ? 合成中的肽鏈從 起始甲硫氨酸 開始 ，從 N端 → C端 延長(zhǎng) ， 直至終止密碼子前一位密碼子所編碼的氨基酸 起始 (initiation) 延長(zhǎng) (elongation) 終止 (termination ) 整個(gè)過程可分為 ： 一、原核生物的肽鏈合成過程 參與原核生物翻譯的各種蛋白質(zhì)因子 種類 生物學(xué)功能 起始因子 IF1 占據(jù) A位防止結(jié)合其他 tRNA IF2 促進(jìn) fMettRNAfMet與小亞基結(jié)合 IF3 促進(jìn)大、小亞基分離；提高 P位對(duì)結(jié)合 fMettRNAfMet的敏感性 延長(zhǎng)因子 EFTu 促進(jìn)氨基酰 tRNA進(jìn)入 A位，結(jié)合并分解 GTP EFTs 調(diào)節(jié)亞基 EFG 有轉(zhuǎn)位酶活性，促進(jìn) mRNA肽酰 tRNA由 A位移至 P位，促進(jìn) tRNA卸載與釋放 釋放因子 RF1 特異識(shí)別 UAA、 UAG，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)肽酶轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ? RF2 特異識(shí)別 UAA、 UGA，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)肽酶轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ? RF3 可與核糖體其他部位結(jié)合，有 GTP酶活性，能介導(dǎo) RFRF2與核糖體的相互作用 （一）起始 指 mRNA和 起始氨基酰 tRNA分別與核糖體 結(jié)合而形成 翻譯起始復(fù)合物 的過程 1. 核糖體大小亞基分離 2. mRNA在小亞基定位結(jié)合 3. 起始氨基酰 tRNA的結(jié)合 4. 核糖體大亞基結(jié)合 IF3 IF1 1. 核糖體大小亞基分離 A U G 539。 339。 IF3 IF1 2. mRNA在小亞基上定位結(jié)合 ? 原核生物 mRNA在核糖體小亞基上的準(zhǔn)確定位和結(jié)合涉及兩種機(jī)制： 起始 AUG上游約 8～ 13核苷酸部位，存在一段由 4～ 9個(gè)核苷酸組成的一致序列，富含嘌呤堿基，如 AGGAGG，稱為 ShineDalgarno序列（ SD序列） ，又稱 核糖體結(jié)合位點(diǎn) (ribosomal binding site, RBS) ? SD序列 小亞基中的 16SrRNA 3?端 有一富含嘧啶堿基的短序列，如 CCUCCU，通過與 SD序列堿基互補(bǔ)