綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)-3-文庫(kù)吧
2025-07-29 08:06 本頁(yè)面
【正文】 置。 ? 電滲：在電場(chǎng)中液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)；當(dāng)電滲方向與電泳方向一致時(shí)，會(huì)加快顆粒泳動(dòng)速度，反之，當(dāng)兩者方向相反時(shí)，會(huì)減慢顆粒泳動(dòng)速度。 ? 支持介質(zhì)的篩孔 ：篩孔越小，則顆粒在移動(dòng)的過(guò)程中所受到的阻力也就越大。 ? 緩沖液 pH和離子強(qiáng)度： pH值距離其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過(guò)高或過(guò)低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強(qiáng)度；強(qiáng)度過(guò)低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強(qiáng)度過(guò)高，在待分離分子周圍形成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子擴(kuò)散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。一般所用離子強(qiáng)度為 ～ 。 電泳的影響因素 血清蛋白醋酸纖維膜電泳 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 掌握醋酸纖維膜電泳的基本原理及其臨床意義 ? 熟悉電泳儀器的使用和操作 + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI大多在 ，在 ，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點(diǎn)以及形狀也有差異，在電場(chǎng)中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A、 α α β和 γ五條區(qū)帶。 蛋白名稱 等電點(diǎn) 分子量 白蛋白 69000 α α1： 20200 α2： 30000 β 90000150000 γ 156000300000 ? 醋酸纖維素（二乙酸纖維素）薄膜具有勻一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，滲透性強(qiáng)，對(duì)分子移動(dòng)無(wú)阻力，用它作區(qū)帶電泳的支持物，具有用樣量少，分離清晰，無(wú)吸附作用。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。 ? 醋酸纖維素薄膜經(jīng) 1,4－二氧六環(huán)、透明液或液體石蠟處理即透明，因而可得背景為無(wú)色的電泳圖譜。 醋酸纖維素薄膜的特性 實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng) 1. 膜的預(yù)處理：將薄膜切成 8cm，無(wú)光澤面向下，漂浮于巴比妥緩沖液面上，膜條自然浸濕下沉。取充分浸透的膜條，濾紙吸取多余的緩沖液，不要弄太干。 2. 加樣：光面用鉛筆標(biāo)注，無(wú)光澤面距一端 （不能看見(jiàn)有液滴形成），待血清進(jìn)入膜內(nèi)，移開(kāi)點(diǎn)樣器。 3. 電泳：放置于電泳槽架時(shí)，無(wú)光澤面向下，點(diǎn)樣端置于負(fù)極，膜與電極緊密接觸，不能留有氣泡，平衡 5分鐘，通電 1h。 4. 染色：通電完畢，鑷子取出，浸于氨基黑的染色液中 5分鐘，立即放入盛有漂洗液的培養(yǎng)皿中，反復(fù)漂洗數(shù)次，直至背景漂凈，濾紙吸干，不要太干。 5. 定量： ? 取 6支試管，編號(hào)，分別用吸管吸取 NaOH 4ml； ? 剪下膜上各蛋白質(zhì)帶及另一空白部位剪一平均大小的薄膜條（空白帶的寬度以最窄的條帶為準(zhǔn)）。將各條分別浸于上述試管內(nèi)（注意管與蛋白帶的順序），用力搖動(dòng)，使藍(lán)色洗出，約半小時(shí)； ? 用分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長(zhǎng) 650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對(duì)照，讀取 A、 α1
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