【正文】 ? 雙向電泳技術在蛋白質組與醫(yī)學研究中所處的重要位置。 TEMED(N,N,N’,N’四甲基乙二胺 ) 通過催化過硫酸 銨形成自由基而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的聚合。 聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳 實驗目的 ? 學習等電聚焦電泳分離血清蛋白的原理 ? 學習聚丙烯酰胺作為電泳介質的優(yōu)點及用途 ? 了解等電聚焦電泳和普通聚丙烯酰胺電泳的異同 以聚丙烯酰胺作為支持物，兩性載體電解質在支持物內(nèi)形成穩(wěn)定的 pH梯度，當?shù)鞍踪|在電場力的作用下，便會在支持物中運動到相當與自身 pI的位置中聚合成一狹窄的區(qū)帶而停留下來。一般所用離子強度為 ～ 。綜合性設計性實驗 3 ? 蛋白質翻譯后修飾位點預測 ? 醋酸纖維薄膜電泳 聚丙烯酰胺等電聚焦電泳分離血紅蛋白和細胞色素 C ? 目標蛋白的 2D電泳分離分析及其生物質譜鑒定 此實驗共包括如下三個部分 1. 第一部分，蛋白質翻譯后修飾位點預測 2. 第二部分，醋酸纖維薄膜電泳和等電聚焦電泳 3. 第三部分，目標蛋白的 2D電泳分離分析及其生物質譜鑒定 第一部分，蛋白質翻譯后修飾位點預測 ? 泛素化對于細胞分化與凋亡 、 DNA修復 、 免疫應答和應激反應等生理過程起著重要作用； ? 磷酸化涉及細胞信號轉導 、 神經(jīng)活動 、 肌肉收縮以及細胞的增殖 、 發(fā)育和分化等生理病理過程； ? 糖基化在許多生物過程中如免疫保護 、 病毒的復制 、 細胞生長 、 炎癥的產(chǎn)生等起著重要的作用； ? 脂基化對于生物體內(nèi)的信號轉導過程起著非常關鍵的作用； ? 組蛋白上的甲基化和乙?；c轉錄調節(jié)有關 。 電泳的影響因素 血清蛋白醋酸纖維膜電泳 實驗目的 ? 掌握醋酸纖維膜電泳的基本原理及其臨床意義 ? 熟悉電泳儀器的使用和操作 + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI大多在 ，在 ，并且蛋白質的分子量、立體構象、等電點以及形狀也有差異，在電場中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A、 α α β和 γ五條區(qū)帶。 實驗原理 聚丙烯酰胺凝膠 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的電泳方法。 c. 將長滴管及時清洗 試劑 數(shù)量（ ml） 蒸餾水 Acr Bis 2 40% Ampholine 樣品：人 Hb和 CytC混合物 （ 1mg/ml） 4滴 10％過硫酸銨 TEMED 5 181。 ? 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用 SDSPAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開，從而大大提高了分辨率。其中雙向電泳 (Two