綜合性設計性實驗-3(參考版)
2025-08-28 08:06本頁面
【正文】 。 ? 將雙向凝膠電泳的蛋白點挖出來，用質譜分析，能得到該蛋白的分子量，質荷比等參數，隨后搜索蛋白質數據庫，將該蛋白判斷為哪個蛋白。 ? 質譜（ Mass Spectrometry）是帶電原子、分子或分子碎片按質荷比（或質量）的大小順序排列的圖譜。 ? 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用 SDSPAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開，從而大大提高了分辨率。其中雙向電泳 (Two Dimensional Electrophoresis， 2DE) 是蛋白質組研究的三大關鍵核心技術之一 ( 另兩種是質譜技術和蛋白質組信息學 ) 。 ? 2D電泳可用于蛋白質轉錄及轉錄后修飾研究、蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用、細胞分化凋亡研究、致病機制及耐藥機制的研究、療效監(jiān)測、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許多方面。 第三部分，目標蛋白的 2D電泳 分離分析及其生物質譜鑒定 ? 蛋白質是生理功能的執(zhí)行者，是生命現象的直接體現者，以細胞內全部蛋白質的存在及其活動方式為研究對象。 4. 測定樣品 pI 方法一：直接用 PH試紙插入所需測定的蛋白區(qū)帶中，此法雖然十分方便，但較為粗略。加完電極液后，要仔細檢查凝膠管上下口內有無氣泡，如有必需排除，否則影響導電； ? 上槽接正極，下槽接負極，電壓 50V，預電泳 30分鐘，然后將電壓維持在 200300V，12小時； ? 電泳結束后，取下玻璃管； 3. 剝膠 用帶有針頭的注射器吸入蒸餾水，將針頭插入凝膠與玻璃管壁之間，邊旋轉邊注水，使針頭慢慢旋轉前進。然后垂直靜置待其聚合。 ? 立即用 5ml注射器針頭沿玻璃壁內側面緩慢加入 ，加時貼近凝膠，盡量減少膠面與水相混和。 c. 將長滴管及時清洗 試劑 數量（ ml） 蒸餾水 Acr Bis 2 40% Ampholine 樣品：人 Hb和 CytC混合物 （ 1mg/ml） 4滴 10％過硫酸銨 TEMED 5 181。 b. TEMED最后加，注意混勻。 等電聚焦電泳進行過程中 等電聚焦電泳結束后 （＋） （＋） （－） （－） 高 pH 低 pH 實驗操作及注意事項 1. 凝膠配制： ? 取 10 ，選擇底部較齊平的一端用橡皮片封底（用兩條橡皮圈扎緊），從一端量出 7cm作好標記，垂直放置。引入電場時，載體兩性電解質分子分別向陰極和陽極移動，最終在分子凈電荷為零的位置停止遷移， 在
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